Патент на изобретение №2380416
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЛОКОСВЕРТЫВАЮЩЕГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ПЛОДОВЫХ ТЕЛ ВЕШЕНКИ ОБЫКНОВЕННОЙ
(57) Реферат:
Изобретение относится к биотехнологии и может быть применено в пищевой промышленности. Плодовые тела вешенки обыкновенной гомогенизируют, замораживают полученный гомогенат с последующим размораживанием и разделением на экстракт и осадок. Осадок соединяют с дистиллированной водой в соотношении 1:2, выдерживают при температуре +4 – +8°С, отделяют вторичный экстракт и соединяют его с ранее полученным экстрактом. В полученную смесь добавляют пищевую кислоту до достижения рН 3,8 и осуществляют осаждение насыщением раствора хлоридом натрия при температуре +4 – +8°С. Полученный осадок отделяют и высушивают вымораживанием при температуре -18°С. Высушенный осадок хранят в холодильнике. Перед применением растворяют в минимальном количестве воды и центрифугируют. Это обеспечивает высокую молокосвертывающую активность и повышенное соотношение молокосвертывающей и общей протеолитической активности. 3 з.п. ф-лы, 1 табл.
Изобретение относится к ферментным препаратам из грибного сырья и способам их получения и может быть применено в пищевой промышленности. Плодовые тела вешенки обыкновенной являются доступным, дешевым и нетоксичным сырьем для получения ферментных препаратов.
Известен также способ получения ферментного препарата из штаммов Fomitopsis pinicola (Fr.) Karst (ATCC 20036) и Irpex lacteus Fr (IFO 5367), предусматривающий культивирование продуцентов на жидкой питательной среде при рН 2-7, температуре от 20°С до 38°С в условиях аэрации, и последующее отделение ферментов из культуральной жидкости фильтрацией или центрифугированием, осаждением спиртом (этанолом, метанолом), который может быть заменен ацетоном или изопропанолом, либо сульфатом аммония (50-75% насыщения экстракта). Полученные осадки высушиваются под вакуумом или в морозильной камере [патент US 3858492]. Способ прост в исполнении, непродолжителен по времени, не требует токсичных реагентов. Однако более предпочтительным для пищевой промышленности осадителем является хлорид натрия. А применяемые продуценты не относятся к широко культивируемым съедобным грибам. Кроме того, получаемый таким образом ферментный препарат обладает недостаточно высокой молокосвертывающей активностью и высокой протеолитической активностью. Что затрудняет применение такого препарата для ускорения коагуляции молока в сыроделии. Способ прост в исполнении, непродолжителен по времени, не требует токсичных реагентов. Однако дополнительная экстракция при комнатной температуре (+20°С) может привести к инактивации значительной части протеолитических ферментов. Задача настоящего изобретения – создать ферментный препарат, который бы обладал высокой молокосвертывающей и низкой общей протеолитической активностью. Задача решается предложенным способом получения молокосвертывающего ферментного препарата из плодовых тел вешенки обыкновенной. Способ характеризуется тем, что плодовые тела вешенки обыкновенной гомогенизируют, замораживают полученный гомогенат с последующим размораживанием и разделением на экстракт и осадок. Осадок соединяют с дистиллированной водой в соотношении 1:2, выдерживают при температуре +4 – +8°С, отделяют вторичный экстракт и соединяют его с ранее полученным экстрактом. В смесь экстрактов добавляют пищевую кислоту до достижения рН 3,8 и осуществляют осаждение насыщением раствора хлоридом натрия при температуре +4 – +8°С. Отделяют полученный осадок и высушивают вымораживанием при температуре -18 – -20°С. Высушенный осадок хранят в холодильнике. Перед применением растворяют в минимальном количестве воды и центрифугируют. Замораживание гомогената проводят при температуре -18 – – 20°С. Осаждение проводят при концентрации хлорида натрия в растворе 35,9%. В качестве пищевой кислоты используют уксусную или соляную кислоты. Совокупность существенных признаков заявляемого способа обеспечивает получение технического результата, который заключается в увеличении выхода молокосвертывающего фермента за счет частичной очистки его от других протеаз плодовых тел вешенки обыкновенной, а также в увеличении соотношения молокосвертывающей и общей протеолитической активности по сравнению с аналогом. Примеры осуществления изобретения. Пример 1. Плодовые тела вешенки обыкновенной (500 г) гомогенизируют, замораживают-размораживают, разделяют на экстракт и осадок. Получают 315 мл экстракта. К осадку добавляют дистиллированную воду (1:2), выдерживают при температуре +4°С и периодическом помешивании 8 часов, затем фильтруют. Вторичный экстракт объемом 325 мл соединяют с полученным ранее. Уксусной кислотой доводят рН экстракта до значения 3,8. Добавляют хлорид натрия до полного насыщения раствора (35,9 г на 100 мл экстракта). Осаждение проводят 8 часов при температуре +4°С. Затем отделяют осадок центрифугированием и высушивают при температуре -18°С. Получают 3 г молокосвертывающего ферментного препарата. Препарат содержит 0,65 мг белка и 0,091 ед.МАС на мг препарата. Пример 2. Плодовые тела вешенки обыкновенной (1000 г) гомогенизируют, замораживают-размораживают, разделяют на экстракт и осадок. Получают 620 мл экстракта. К осадку добавляют дистиллированную воду (1:2), выдерживают при температуре +4°С и периодическом помешивании 8 часов, затем фильтруют. Вторичный экстракт объемом 640 мл соединяют с полученным ранее. Соляной кислотой доводят рН экстракта до значения 3,8. Добавляют хлорид натрия в количестве 35,9 г на 100 мл экстракта. Осаждение проводят 8 часов при температуре +4°С. Затем отделяют осадок фильтрованием под вакуумом и высушивают при температуре -20°С. Получают 6,5 г молокосвертывающего ферментного препарата. Препарат содержит 0,60 мг белка и 0,09 ед.МАС на мг препарата. При дальнейшем исследовании сравнили полученный ферментный препарат с известным. Полученные данные приведены в таблице.
Как видно из результатов, приведенных в таблице, молокосвертывающий фермент, полученный заявляемым способом, обладает высокой молокосвертывающей активностью, а также значительно большим, чем у аналога, соотношением молокосвертывающей и общей протеолитической активности.
Формула изобретения
1. Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата из плодовых тел вешенки обыкновенной, характеризующийся тем, что плодовые тела вешенки обыкновенной гомогенизируют, замораживают полученный гомогенат с последующим размораживанием и разделением на экстракт и осадок, осадок соединяют с дистиллированной водой в соотношении 1:2, выдерживают при температуре 4-8°С, отделяют вторичный экстракт и соединяют его с ранее полученным экстрактом, в смесь экстрактов добавляют пищевую кислоту до достижения рН 3,8 и осуществляют осаждение насыщением раствора хлоридом натрия при температуре 4-8°С, отделяют полученный осадок и высушивают вымораживанием при температуре (-18)-(-20)°С. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что гомогенат замораживают при температуре (-18)-(-20)°С. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что осуществляют осаждение раствором хлорида натрия с концентрацией 35,9%. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве пищевой кислоты используют уксусную или соляную кислоту.
|
||||||||||||||||||||||||||
3, 1980 г., с. 561-568]. Однако применение в качестве осадителя этилового спирта вызывает значительную инактивацию протеолитических ферментов и не способствует стабильности препарата.