Патент на изобретение №2378653

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОНИХОДИСТРОФИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии. Для диагностики ониходистрофии выполняют визуальный осмотр ногтей пациента, после чего исследуют его биологический материал. В качестве биологического материала используют сыворотку крови больного, в которой определяют содержание пептидносвязанного оксипролина (ПО). Если содержание ПО составляет более 0,5 мкг/мл (ПО>0,5 мкг/мл), диагностируют ониходистрофию. Использование способа позволяет повысить достоверность диагностики ониходистрофии и сократить время проведения исследований.

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для диагностики ониходистрофии.

Ониходистрофия – это болезнь ногтей, проявляющаяся нарушением целостности кератогиалиновой структуры ногтевой пластины, развивающаяся в связи с изменениями трофики при дефицитных состояниях, обусловленных различными нарушениями обмена белков, жиров и углеводов во время беременности, лактации, стрессе и других. Здоровый ноготь монолитен и непроницаем для любой флоры. Нарушение монолитной кератогиалиновой структуры ногтя и образование расслоения пластинчатой структуры ногтя являются причиной развития изменений в ногте, приводящих к нарушению его целостной структуры (Яковлев А.Б., Корсунская И.М., Дворянкова Е.В. Комбинированная терапия онихомикозов / Учебное пособие, М.: ИД Медпрактика. – М., 2003, с.4). Колонизация микробной и грибковой флорой, ферментативные процессы, связанные с ее размножением приводят к расплавлению кератогиалиновых клеток, образованию пустот и потере связи с кровеносной сетью ногтевого ложа (Средство для устранения нарушений роста ногтей. Описание изобретения к патенту РФ 2178289, БИПМ, 2, 2002 г.). Нарушение монолитности между слоями кератогиалиновых клеток ногтя лишает его прозрачности. В зависимости от особенностей ферментативной деятельности флоры, заселяющей пространство между слоями кератогиалиновых клеток, ногтевая пластина изменяет нормальный розовый цвет. Распространение ферментативных процессов в сторону ногтевого ложа или матрикса ногтя усугубляет нарушение микроциркуляции и приводит к изменению химического состава и физических свойств ногтевой пластины (Савина Н.А. Применение электрофореза между синусоидальными модулированными токами и фотохромотерапии в комплексном лечении больных ониходистрофиями. /Автореферат дисс.канд. мед. наук, Санкт-Петербург, 2007 г., с.3).

Отсутствие кровоснабжения в участке ногтя приводит к отторжению всего ногтя или его части. Отторжение ногтя может быть ускорено внешними факторами: физическими – травмы, обморожения, ожоги, грубый уход, отсутствие ухода и др., химическими – работа с различными химическими агентами, покрытие ногтей лаками, полимерами и др., а также нарушением кровообращения (Зенин А.С., Торсуев Н.А. Учебник кожных и венерических болезней, М.: Медгиз, 1960, С.150-151; Курчева О.П., Молочков В.А. Ламизил – эффективное средство лечения онихомикозов / Российский журнал кожных и венерических болезней, 1998, 1, с.47-48).

Глубина поражения ногтевого ложа, выраженность гиперкератоза, площадь отторжения части ногтя от ложа при ониходистрофии зависят от наличия препятствий для роста ногтя, вида грибов или микробов, колонизирующих многослойные кератогиалиновые структуры ногтя и пораженные участки ложа, а также дефицита аминокислот при различных диспротеинемических состояниях. Расслоение ногтевой пластины на ранних стадиях ониходистрофии приводит к ее расщеплению, отторжению от ложа, нарушению роста ногтя, деформации ложа, капиллярному стазу. Кератогиалиновые клетки скапливаются в местах нарушения роста, образуя пролежень, что в дальнейшем приводит к образованию гиперкератоза. Ногтевая пластина утолщается за счет скопления кератогиалиновых масс (Кошкин С.В., Зонов О.А., Чермных Т.В. Применение экзифина для лечения микозов стоп и онихомикозов. Успехи медицинской микологии, М., Медицина, Том II, 2003, С.74). Однако в изученной нами литературе нам не удалось найти ссылки на наличие связи между аминокислотным составом крови и развитием ониходистрофии.

Важно своевременно выявить невидимый глазу начинающийся дистрофический процесс расслоения монолитной кератогиалиновой структуры в ростковой зоне ногтя, предшествующий началу заболевания и провоцирующий быстрое образование пространственных пустот между слоями кератогиалиновых клеток ногтя (Кошкин С.В., Зонов О.А., Чермных Т.В. Применение экзифина для лечения микозов стоп и онихомикозов. Успехи медицинский микологии, М.: Медицина, Том II, 2003, С.74).

Наши наблюдения показали, что пациенты не обращали внимания на расслоение ногтей, если этот ранний симптом ониходистрофии не проявлялся повышенной ломкостью или мягкостью ногтей, мешающих их росту. Большинство наблюдаемых нами пациентов были женщины (89%). Они обратились к дерматологу с жалобой на недостаток роста ногтей. У них имелись нарушения пластинчатой структуры, иногда видимые только при осмотре через увеличительную лупу. Опрос пациентов или наблюдение их в динамике показал, что расслоение ногтя обязательно предшествовало отторжению ногтя от ложа. Всего под нашим наблюдением находилось 97 женщин в возрасте от 13 до 77 лет. Опрос 65 пациенток с отторжением участков ногтя от ложа указывал на появление время от времени расслоения одного или нескольких ногтей рук. У 32 пациенток были иные причины посещения дерматолога, например, сухость, трещины, бородавки кожи рук и др. При осмотре с помощью лупы нами обнаружены расслоенные участки отросшей части ногтей. Установление диагноза и назначение адекватного лечения предотвращали переход процесса расслоения в отторжение ногтя от ложа. В тех случаях, когда пациенты не могли изменить свой образ жизни или возникало обострение хронических заболеваний, расслоение ногтей приводило к отторжению их от ложа и развитию гиперкератоза.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе выявлены различные способы диагностики ониходистрофии.

В работе Ариевич A.M., Шецерули Л.Т. (Грибковые заболевания ногтей, Тбилиси, 1972, С.38-42) описан способ диагностики ониходистрофии путем визуального осмотра ногтей пациента. Диагноз ониходистрофии устанавливают по изменению цвета, прозрачности, гладкости ногтя и состоянию ногтевого ложа. Недостатками указанного метода являются его субъективность и недостаточная достоверность.

В работе Сергеева Ю.В., Иванова O.Л., Сергеева В.Ю., Черкасова М.В. (Цифровая видеодермоскопия: новые подходы к диагностике, лечению и профилактике заболеваний кожи. / Российский журнал кожных и венерических болезней, 2004, 1, с.23, 27) описан способ диагностики ониходистрофии путем осмотра ногтевого ложа пациента с помощью цифрового видеодермоскопа. Диагноз ониходистрофии устанавливают по обнаружению каналов, образованных грибом красным трихофитоном. Недостатком указанного метода является техническая сложность, обусловленная необходимостью применения дорогостоящего цифрового оборудования, а также его недостаточная достоверность.

Наиболее близким техническим решением, принятым нами за прототип, является способ диагностики ониходистрофии, описанный в работе (Потоцкий И.И. Справочник дерматовенеролога, Киев: Здоров’я, 1983, с.114-115). Указанный способ осуществляют путем визуального осмотра ногтей пациента и исследования биологического материала – кератогиалиновых масс и/или чешуек ногтя, взятых у пациента. Диагноз ониходистрофии устанавливают по визуальному обнаружению изменений морфологии ногтя, микроскопическому обнаружению в чешуйках ногтя элементов тканевой формы гриба, выделению культуры гриба при посеве кератогиалиновых масс и/или чешуек ногтя больного.

Недостатком указанного способа является его техническая сложность, длительность проведения исследований, а также недостаточная достоверность.

Целью настоящего изобретения является повышение достоверности диагностики ониходистрофии и сокращение времени проведения исследований.

Указанная цель достигается тем, что выполняют визуальный осмотр ногтей пациента, после чего исследуют его биологический материал. В качестве биологического материала используют сыворотку крови больного, в которой определяют содержание пептидносвязанного оксипролина (ПО). Если содержание ПО составляет более 0,5 мкг/мл (ПО > 0,5 мкг/мл), диагностируют ониходистрофию.

Подробное описание способа.

У пациента берут кровь из вены. Оставляют кровь на один час при комнатной температуре. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок стеклянной палочкой. Затем его центрифугируют, полученную сыворотку отбирают пипеткой.

Содержание пептидносвязанного оксипролина определяют методом по окислению хлорамина Т с парадиметиламинобензальдегидом (Кузнецова Т.П., Прошина Л.Я., Приваленко М.Н. Модификация определения содержания оксипролина в сыворотки крови. / Лабораторное дело, 1982, 8, С.456-458). В опытную пробу добавляют 0,5 мл сыворотки и 2 мл охлажденного до 4°С этанола; в контрольную пробу 0,5 мл дистиллированной воды вместо сыворотки и 2 мл охлажденного до 4°С этанола. Пробы оставляют при температуре 4°С на 15 минут. Пробы центрифугируют при 3 тысячах об/мин. Надосадочную жидкость выпаривают в фарфоровых чашках. Осадок растворяют в 1 мл дистиллированной воды. Проводят гидролиз проб с 1,5 мл 8 н. раствором с HClO₄ в течение 4 часов на кипящей водяной бане с последующим охлаждением и нейтрализацией насыщенным раствором КОН по фенолфталеину. Пробы центрифугируют при 3 тысячах оборотах в минуту. Надосадочную жидкость выпаривают на кипящей водяной бане в фарфоровых чашках и добавляют к сухому остатку по 0,5 мл дистиллированной воды, 1 мл парадиметиламинобензальдегида, 1 мл изопропанола и 0,5 мл хлорамина Т, выдерживают при температуре 60°С 20 минут с последующим охлаждением проточной водой до комнатной температуры. Определяют разность оптических плотностей опытной и контрольной проб и по калибровочному графику рассчитывают содержание пептидносвязанного оксипролина. При содержании ПО более 0,5 мкг/мл диагностируют ониходистрофию.

Практическая реализуемость способа иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Пациентка О., история болезни 20081, 26 лет. Жалобы на периодически возникающее расслоение ногтей рук. При осмотре с помощью увеличительной лупы обнаружили расслоение участка одной из ногтевых пластин кистей в отросшей части. У пациентки взяли кровь из вены. Оставили кровь на один час при комнатной температуре. Образовавшийся сгусток отделили от стенок стеклянной палочкой. Затем центрифугировали, полученную сыворотку отобрали пипеткой и определили содержание ПО методом по окислению хлорамина Т с парадиметиламинобензальдегидом. В опытную пробу добавили 0,5 мл сыворотки и 2 мл охлажденного до 4°С этанола; в контрольную пробу – 0,5 мл дистиллированной воды вместо сыворотки и 2 мл охлажденного до 4°С этанола. Пробы оставили при температуре 4°С на 15 минут. Пробы центрифугировали при 3 тысячах об/мин. Надосадочную жидкость выпаривали в фарфоровых чашках. Осадок растворили в 1 мл дистиллированной воды. Провели гидролиз проб с 1,5 мл 8 н раствором с НСlO₄ в течение 4 часов на кипящей водяной бане с последующим охлаждением и нейтрализацией насыщенным раствором КОН по фенолфталеину. Пробы центрифугировали при 3 тысячах оборотах в минуту. Надосадочную жидкость выпаривали на кипящей водяной бане в фарфоровых чашках и добавили к сухому остатку по 0,5 мл дистиллированной воды, 1 мл парадиметиламинобензальдегида, 1 мл изопропанола и 0,5 мл хлорамина Т, выдержали при температуре 60°С 20 минут с последующим охлаждением проточной водой до комнатной температуры. Определили разность оптических плотностей опытной и контрольной проб, по калибровочному графику рассчитали содержание ПО, равное 2,31 мкг/мл. Поскольку у пациентки ПО=2,31>0,5 мкг/мл, ей был поставлен диагноз: ониходистрофия. Было назначено адекватное лечение, результаты которого подтвердили достоверность диагноза.

Пример 2.

Пациентка И., история болезни 20085, 15 лет. Жалобы на расслоение ногтей кистей рук. Опрос пациентки показал, что ногти расслоились после перенесенного острого гломерулонефрита. У пациентки взяли кровь из вены. Оставили кровь на один час при комнатной температуре. Образовавшийся сгусток отделили от стенок стеклянной палочкой. Затем центрифугировали, полученную сыворотку отобрали пипеткой, определили содержание ПО методом по окислению хлорамина Т с парадиметиламино-бензальдегидом. В опытную пробу добавили 0,5 мл сыворотки и 2 мл охлажденного до 4°С этанола; в контрольную пробу 0,5 мл дистиллированной воды вместо сыворотки и 2 мл охлажденного до 4°С этанола. Пробы оставили при температуре 4°С на 15 минут. Пробы центрифугировали при 3 тысячах об/мин. Надосадочную жидкость выпаривали в фарфоровых чашках. Осадок растворили в 1 мл дистиллированной воды. Провели гидролиз проб с 1,5 мл 8 н раствором с НСlO₄ в течение 4 часов на кипящей водяной бане с последующим охлаждением и нейтрализацией насыщенным раствором КОН по фенолфталеину. Пробы центрифугировали при 3 тысячах оборотах в минуту. Надосадочную жидкость выпаривали на кипящей водяной бане в фарфоровых чашках и добавили к сухому остатку по 0,5 мл дистиллированной воды, 1 мл парадиметиламинобензальдегида, 1 мл изопропанола и 0,5 мл хлорамина Т, выдержали при температуре 60°С 20 минут с последующим охлаждением проточной водой до комнатной температуры. Определили разность оптических плотностей опытной и контрольной проб, по калибровочному графику рассчитали содержание ПО, равное 1,36 мкг/мл. Поскольку у пациентки ПО=1,36>0,5 мкг/мл, ей был поставлен диагноз: ониходистрофия. Было назначено адекватное лечение, результаты которого подтвердили достоверность диагноза.

Пример 3.

Пациентка Л., история болезни 20083, 37 лет. Обратилась к дерматологу с жалобами на образование бородавки 1 пальца правой кисти. При осмотре ногтевых пластин рук обнаружили их расслоение. Данные анамнеза указывали, что в течение жизни часто появлялось расслоение ногтей. У пациентки взяли кровь из вены. Оставили кровь на один час при комнатной температуре. Образовавшийся сгусток отделили от стенок стеклянной палочкой. Затем центрифугировали, полученную сыворотку отобрали пипеткой и определили содержание ПО методом по окислению хлорамина Т с парадиметиламинобензальдегидом. В опытную пробу добавили 0,5 мл сыворотки и 2 мл охлажденного до 4°С этанола; в контрольную пробу 0,5 мл дистиллированной воды вместо сыворотки и 2 мл охлажденного до 4°С этанола. Пробы оставили при температуре 4°С на 15 минут. Пробы центрифугировали при 3 тысячах об/мин. Надосадочную жидкость выпаривали в фарфоровых чашках. Осадок растворили в 1 мл дистиллированной воды. Проводили гидролиз проб с 1,5 мл 8 н раствором НСlO₄ в течение 4 часов на кипящей водяной бане с последующим охлаждением и нейтрализацией насыщенным раствором КОН по фенолфталеину. Пробы центрифугировали при 3 тысячах оборотах в минуту. Надосадочную жидкость выпаривали на кипящей водяной бане в фарфоровых чашках и добавили к сухому остатку по 0,5 мл дистиллированной воды, 1 мл парадиметиламинобензальдегида, 1 мл изопропанола и 0,5 мл хлорамина Т, выдержали при температуре 60°С 20 минут с последующим охлаждением проточной водой до комнатной температуры. Определили разность оптических плотностей опытной и контрольной проб, по калибровочному графику рассчитали содержание ПО, равное 2,91 мкг/мл. Поскольку у пациентки ПО=2,91>0,5 мкг/мл, ей был поставлен диагноз: ониходистрофия. Было назначено адекватное лечение, результаты которого подтвердили достоверность диагноза.

С помощью заявляемого способа нами было проведено обследование 36 пациентов различных возрастных групп, обратившихся к дерматологу с различными жалобами. Анамнез этих пациентов указывал на периодически возникающий процесс расслоения ногтей. Осмотр пациентов не позволил выявить клинические признаки ониходистрофии. Исследование сыворотки крови больных с помощью предлагаемого способа показало, что у всех пациентов содержание пептидносвязанного оксипролина превышало 0,5 мкг/мл, характерное для здоровых людей (Кузнецова Т.П., Прошина Л.Я., Приваленко М.Н. Модификация определения содержания оксипролина в сыворотке крови. /Лабораторное дело, 1982, 8, с.456-458). Всем им был поставлен диагноз: ониходистрофия. Среднее время исследования для установления диагноза согласно заявляемому способу составило 6 часов.

Ретроспективный анализ 71 истории болезни пациенток, которым диагностика ониходистрофии осуществлялась согласно прототипу, показал, что 70% был поставлен диагноз: ониходистрофия. Среднее время исследования для установления диагноза согласно прототипу составляло не менее 24 часов. Однако 30% пациенток диагноз ониходистрофия не был поставлен, несмотря на имеющиеся незначительные жалобы на ломкость ногтей. Через некоторое время 15% из них обратились повторно, но уже с имеющим место отторжением ногтя от ложа.

Таким образом, заявляемый нами способ по сравнению с прототипом позволяет повысить достоверность диагностики ониходистрофии и существенно сократить время исследования.

Формула изобретения

Способ диагностики ониходистрофии путем визуального осмотра ногтей пациента и исследования его биологического материала, отличающийся тем, что в качестве биологического материала используют сыворотку крови, в которой определяют содержание пептидносвязанного оксипролина (ПО), и при значении ПО>0,5 мкг/мл диагностируют ониходистрофию.