Патент на изобретение №2376755

(54) СПОСОБ ПОДРАЩИВАНИЯ МОЛОДИ АЗОВО-ЧЕРНОМОРСКОЙ ШЕМАИ В ПРУДАХ

(57) Реферат:

Способ включает осеннюю заготовку производителей, выдерживание их в зимовалах до наступления нерестовых температур, гормональное стимулирование гипофизом сазана или леща в дозах 6-7 мг/кг, инкубацию икры, выдерживание эмбрионов в рыбоводных емкостях до перехода на экзогенное питание. В последующем осуществляют пересадку особей в пруды с подготовленной естественной кормовой базой. Кормовую базу готовят путем внесения азотно-фосфорно-калийных удобрений в соотношении 5:2:1 соответственно. Минеральные удобрения вносят по сухому ложу. Пересадку личинок осуществляют в 2 этапа с интервалом 7-10 дней. Плотность посадки составляет 1-3 млн. шт./га. Перед посадкой личинок проводят предварительное залитие и спуск прудов. В процессе подращивания дополнительно вносят навоз по прибрежной зоне вместе с культурой Daphnia magna и Ceriodaphnia sp. и зеленые удобрения из скошенной и подвяленной растительности. При переходе шемаи на стадию малька в искусственный корм с содержанием белка не менее 20% вводят пробиотический препарат на основе Bacillus subtilis В-1895 в количестве 0,05-0,15% от массы корма. Такая технология позволяет повысить эффективность подращивания азово-черноморской шемаи и вывести из состава микрофлоры особи патогенные микроорганизмы, а также повысить выживаемость и рыбопродуктивность. 1 табл.

Изобретение относится к рыбоводству и может быть использовано при искусственном разведении шемаи, в частности при подращивании молоди в монокультуре в прудах до ее выпуска в реку.

Запасы шемаи в Азовском и Черном морях находятся в прямой зависимости от условий размножения в реках и от объема искусственного размножения. Сейчас азово-черноморскую шемаю относят к исчезающим видам, она занесена в Красную книгу.

Многие звенья технологического процесса воспроизводства шемаи заводским методом уже разработаны. Однако использование высоких плотностей посадки, экономящих прудовые фонды и материальные средства рыбоводных хозяйств, находящихся в жестких экономических условиях, приводит к снижению рыбопродуктивности и качества выпускаемой молоди.

Известный «Способ разведения и выращивания азово-черноморской шемаи»[1] является наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту. Способ включает заготовку производителей осенью, выдерживание их в зимовалах до наступления нерестовых температур, гормональное стимулирование гипофизом сазана или леща в дозах 6-7 мг/кг, инкубацию икры, выдерживание эмбрионов в рыбоводных емкостях до перехода на экзогенное питание, последующую пересадку в пруды с естественной кормовой базой, подготовленной путем внесения азотно-фосфорно-калийных удобрений в соотношении 5:2:1 соответственно и органических в виде навоза, с плотностью посадки 1-3 млн. шт./га, причем пересадку в пруды осуществляют в 2 этапа с интервалом в 7-10 дней, а выращивание личинок осуществляют в моно- или поликультуре с рыбцом при соотношении рыбец: шемая, составляющем 1,5:1,0.

Недостатками данного способа являются незащищенность получаемой молоди от заболеваний из-за обсемененности поверхностных и внутренних тканей, присутствия патогенных для человека микроорганизмов, что снижает выход жизнестойкой молоди, а также небогатая естественная кормовая база.

Целью настоящего изобретения является повышение эффективности подращивания азово-черноморской шемаи, выведение из состава ее микрофлоры патогенных микроорганизмов, повышение выживаемости и рыбопродуктивности.

Эта цель достигается тем, что заготовленных осенью производителей выдерживают в зимовалах до наступления нерестовых температур, стимулируют при наступлении нерестовых температур гипофизом сазана или леща в дозах 6-7 мг/кг, икру инкубируют, эмбрионов выдерживают в рыбоводных емкостях до перехода на экзогенное питание с последующей пересадкой в пруды с подготовленной естественной кормовой базой.Перед посадкой личинок проводят предварительное залитие и спуск прудов, по сухому ложу вносят минеральные удобрения – в виде азотно-фосфорно-калийных в соотношении 5:2:1 соответственно и органические в виде навоза.

Личинок пересаживают в пруды в 2 этапа с интервалом в 7-10 дней и с плотностью посадки 1,5 млн. шт./га, во время подращивания дополнительно вносят навоз с культурой Daphnia magna и Ceriodaphnia, а также зеленые удобрения из скошенной и подвяленной растительности, а на стадии малька в искусственный комбикорм с содержанием белка не менее 20% вводят пробиотический препарат на основе Bacillus subtilis В-1895 в количестве 0,5-0,15% от массы корма. Содержание жизнеспособных пробиотических микроорганизмов в препарате составляет 1×10¹⁰-5×10¹¹ КОЕ/г.

По сравнению с прототипом отличительные признаки изобретения являются новыми, таким образом, изобретение соответствует критерию «новизна».

Совокупность существенных признаков заявленного технического решения не следует явным образом из изученного уровня техники, т.е. соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Способ испытан на рыбхозе ООО «им. Мирошниченко» Азовского р-на Ростовской области и по своей эффективности превосходит известный, т.о. он является промышленно применимым.

Достижение положительного эффекта согласно цели настоящего изобретения обеспечивается следующим:

1) Перед посадкой личинок проводят предварительное залитие и спуск прудов для уменьшения количества эстерии, стрептоцефалюса и щитня, негативно влияющих на гидробиологические процессы при подращивании шемаи, при этом по сухому ложу вносят минеральные удобрения. Внесение удобрений активизирует развитие мелких живых кормов (коловраток) – самого ценного вида питания для развивающихся личинок.

2) В середине июня по прибрежной зоне вносят навоз вместе с культурой Daphnia magna, а в конце июня – также с навозом – культуру Ceriodaphnia.

3) В процессе подращивания вносят зеленые удобрения из скошенной и подвяленной растительности. Мероприятия по п.п.2 и 3 способствуют увеличению естественной кормовой базы до начала использования искусственных кормов.

4) В искусственный карповый комбикорм вводят пробиотический препарат на основе Bacillus subtilis В-1895 в количестве 0,05-0,15% от массы корма. Содержание жизнеспособных пробиотических микроорганизмов в препарате составляет 1×10¹⁰-5×10¹¹ КОЕ/г.

На стадии малька шемая начинает питаться искусственным комбикормом, например, карповым. Обогащение его пробиотическим препаратом на основе Bacillus subtilis В-1895 способствует, во-первых, полному исчезновению из состава микрофлоры шемаи патогенных для человека штаммов микроорганизмов, принадлежащих к родам Salmonella и Klebsiella – потенциальных возбудителей инфекционных заболеваний; во-вторых, позволяет значительно повысить темп роста, коэффициент упитанности, массу выращиваемой рыбы и рыбопродуктивность прудов на 36,2% по сравнению с контролем.

Использование пробиотических препаратов, т.е. культур симбиотических микроорганизмов, – наиболее реальная альтернатива антибиотикам. Они способны создавать естественный защитный барьер между животными и возбудителями инфекционных заболеваний и укреплять естественный иммунитет.

Пробиотический препарат на основе Bacillus subtilis В-1895, технология получения которого разработана в ФГУП «АзНИИРХ» и заявлена им в 2007 г. (2), представляет собой коричневый порошок и отличается от других препаратов на основе Bacillus subtilis стойким эффектом и низкой стоимостью.

Технология его получения исключает использование дорогостоящих и экологически неблагополучных процессов глубинной ферментации в жидких средах и лиофильной сушки. В 1 г препарата содержится 1×10¹⁰-5×10¹¹ жизнеспособных клеток Bacillus subtilis. Стоимость 1 кг 60 руб.

Способ осуществляется следующим образом.

Производителей шемаи заготавливают осенью и выдерживают в зимовалах до наступления нерестовых температур, далее их переводят в нерестовые пруды или садки, за сутки до проведения инъекций рыб пересаживают в рыбоводные емкости, стимулируют созревание самок путем введения гипофиза сазана или леща в дозах 6-7 мг/кг. Полученную икру оплодотворяют, обесклеивают и инкубируют в аппаратах П.С.Ющенко, личинок выдерживают в рыбоводных емкостях до перехода на экзогенное питание.

Перед посадкой личинок проводят провокационное залитие прудов, чтобы избавиться от эстерии, стрептоцефалюса и щитня; после спуска воды в пруды по сухому ложу вносят минеральные удобрения (азотно-фосфорно-калийные в соотношении 5:2:1 соответственно), затем в мае пруды заливают снова и через 4-5 дней выпускают личинок в 2 этапа с интервалом в 7-10 дней с плотностью посадки 1550 тыс. шт./га. Длительность выращивания 75 суток.

В середине июня вместе с повторным внесением навоза по прибрежной зоне вносят культуру Daphnia magna, а в конце июня также с навозом – Ceriodaphnia sp. В качестве зеленых удобрений в процессе подращивания вносят скошенную и подвяленную растительность.

До начала кормления искусственным кормом исследуют наличие бактерий, особенно патогенных, в образцах поверхностных тканей и кишечника шемаи. Помимо стандартных методов, используемых в микробиологии для идентификации бактериальных культур, используют ПЦР-диагностику. Выделение ДНК из проб, постановку ПЦР и анализ продуктов амплификации посредством электрофореза в 1,5% агарозном геле для идентификации бактерий, относящихся к роду Salmonella, Yersinia enterocolitica, Candida albicans и Listeria monocytogenes проводят согласно «Временному наставлению по применению тест-системы «САЛ-КОМ» для выявления возбудителя сальмонеллеза методом ПЦР»(1998), «Инструкции по применению ПЦР-тест-системы Амплисенс Yersinia enterocolitica-270» (2002), «Методике проведения исследований на наличие ДНК ИППП методом ПЦР» (2002) и «Наставлению по применению тест-системы «ЛИСТЕР» для выявления и идентификации Listeria monocytogenes методом ПЦР» (1999), соответственно.

Источником инфицирования сальмонеллой воды и рыбы могут являться животные и птицы, кормящиеся рыбой. Сальмонеллы могут длительно сохранять жизнеспособность во внешней среде. Так, в воде открытых водоемов они могут жить до 120 дней, в морской воде – до 217 дней. Бактерии рода сальмонелла живут в организме животных, рыб и птиц. Попадая в организм человека в основном через пищу (мясо животных и птицы, яйца, рыба) или питье (сырая вода или молоко) сальмонеллы внедряются и начинают жить в стенках человеческого кишечника.

Из энтеробактерий, как известно, особую опасность представляют микроорганизмы родов Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter и Proteus, их определение также необходимо.

На 25-е сутки после вселения личинок в пруды, при переходе на стадию малька их начинают кормить искусственным карповым комбикормом мелкой фракции, содержащим 23% протеина; с 42-х по 75 сутки с добавлением пробиотического препарата на основе Bacillus subtilis В-1895 одной размерной фракции с кормом в количестве 0,1% от массы корма, при этом корм готовят тщательным перемешиванием с сухим пробиотиком.

Примеры осуществления способа.

Пример 1. (Контроль). Заготовленных осенью производителей шемаи выдерживали в зимовалах до наступления нерестовых температур, после переводили в садки, за сутки до инъецирования пересаживали в рыбоводные емкости, стимулировали созревание самок путем введения гипофиза сазана в дозах 6-7 мг/кг. Полученную икру оплодотворяли, обесклеивали и инкубировали в аппаратах П.С.Ющенко, выклюнувшихся личинок выдерживали в рыбоводных емкостях до перехода на экзогенное питание. Пруд, предназначенный для выращивания, площадью 0,2 га спускали, вносили по сухому ложу азотно-фосфорно-калийные удобрения в соотношении 5:2:1. Через 5 дней после залития пруда выпустили личинок с плотностью посадки 1550 тыс. шт./га в 2 этапа с интервалом 7 дней.

Перед выпуском личинок обследовали на наличие бактерий, были выявлены штаммы бактерий родов Salmonella и Klebsiella, патогенные для человека, кроме них, представители естественной микрофлоры рыб: бактерии родов Alcaligenes, Aeromonas, Acinetobacter, Pseudomonas, Micrococcus.

В зоопланктоне контрольного пруда было обнаружено 15 видов из различных групп гидробионтов. Наиболее многочисленными были кладоцеры, представленные 7 видами, и хирономиды – 4 вида.

В период зарыбления развивались организмы, являющиеся кормовыми для мелких личинок (коловратки, ювенильные формы копепод, мелкие формы кладоцер). Конец июня и начало июля характеризовались снижением в развитии зоопланктона (биомасса 0,54 г/м³). Затем до конца выращивания доминировали кладоцеры, биомасса которых в 3 декаде июля достигала 80,55 г/м³ за счет развития дафний и цериодафний.

Начиная с 25 суток и до конца выращивания рыбу кормили искусственным карповым комбикормом, содержащим 23% протеина, из расчета 15% от биомассы молоди в пруде. Кормление осуществлялось 2 раза в сутки.

Перед выпуском в реку мальков снова обследовали, состав микрофлоры остался неизменным.

Пример 2. Аналогично примеру 1 в опытный пруд 1 в середине июня вместе с навозом внесли культуру Daphnia magna, а в конце июня также с навозом – культуру Ceriodaphnia sp.

В качестве зеленых удобрений в начале июня внесли скошенную и подвяленную растительность.

В зоопланктоне опытного пруда отмечено 22 вида кормовых гидробионтов. В начале выращивания (3-я декада мая) наблюдались коловратки и ювенильные формы копепод и кладоцер. В 1-й декаде июня доля мелких форм зоопланктона составляла 98,1% от общей биомассы, составляющей 148,1 г/м³.

Во 2-3 декадах июня в связи с появлением лептестерии наблюдался спад в развитии зоопланктона. В конце июня наблюдались высокие значения биомассы и численности зоопланктона за счет развития кладоцер (Daphnia sp., Scapholeberis mucronatas, Diaphamosoma brachiurum, Ceriodaphnia retiadata) со средней биомассой в июле 32,1 г/м³, в августе продолжали доминировать кладоцеры, используемые шемаей в качестве корма на 65,8-88%.

Начиная с 45 суток и до конца подращивания шемаи в искусственный комбикорм вводили простым перемешиванием сухой пробиотический препарат на основе штамма Bactilus subtilis В-1895 в количестве 0,05% от массы корма.

Перед выпуском в реку проведенное обследование молоди показало, что основной состав микрофлоры шемаи остался неизменным, однако количество штаммов бактерий, принадлежащих к родам Salmonella и Klebsiella, значительно сократилось.

Пример 3. Аналогично примеру 2 в опытный пруд 2 с 45 суток выращивания шемаи в искусственный карповый комбикорм вводили сухой пробиотический препарат в количестве 0,1% от массы корма.

Введение пробиотического препарата способствовало исчезновению штаммов микроорганизмов, принадлежащих к родам Salmonella и Klebsiella, из микрофлоры шемаи.

Пример 4. Аналогично примеру 2 в опытный пруд 3 с 45-ых суток подращивания в искусственный карповый комбикорм вводили сухой пробиотический препарат в количестве 0,15% от массы корма.

Перед выпуском в реку штаммы бактерий, принадлежащие к родам Salmonella и Klebsiella, у шемаи не обнаружены.

Результаты подращивания шемаи в контрольном и опытных прудах представлены в таблице.

Как видно из таблицы, в контрольном пруде при относительно близких условиях подращивания, коэффициент упитанности молоди при выпуске в реку был гораздо ниже, выживаемость – близкой по значению, а рыбопродуктивность в пруде 2 на 36,2% превышала контрольный вариант.

Таким образом, внесение органических удобрений с культурой дафний, зеленых удобрений, а также введение в корм пробиотического препарата в количестве 0,1% от массы корма способствовали исчезновению из состава микрофлоры шемаи патогенных для организма человека штаммов бактерий, принадлежащих к родам Salmonella и Klebsiella, и привели к повышению ежесуточного прироста массы и конечной рыбопродуктивности.

Источники информации

1. Патент РФ 2185057, МПК А01к 61/00, 2000 г.

2. Заявка на изобретение 2007114381 с приоритетом от 16.04.07 г. «Способ получения пробиотической кормовой добавки».

Таблица
Результаты опытов по подращиванию шемаи в прудах
Показатели	Пруды
контрольный	1 вариант	2 вариант	3 вариант
Концентрация пробиотического препарата в искусственном в корме, %	0,00	0,05	0,10	0,15
Площадь пруда, м2	2000
Глубина, м	0,8
Экспозиция опыта, сутки	75
Кол-во вселенных личинок,
тыс.шт.	±310	±309	±312	±308
Плотность посадки,
тыс.шт./га	±1550	±1545	±1560	±1540
шт./м3	±194	±193	±195	±193
Индивидуальная масса личинок, мг
1,8	1,8	1,8	1,8
Коэффициент упитанности по Фультону
1,2±0,06	1,3±0,11	1,3±0,10	1,3±0,09
Ежесуточный прирост молоди, мг
2,7	3,2	3,8	3,7
Выживаемость молоди, % от посадки
49,5	51,1	50,9	50,4
Рыбопродуктивность, кг/га	161,7	191,8	228,7	215,8
Средняя масса выпускаемой молоди, г
0,211	0,243	0,288	0,278

Формула изобретения

Способ подращивания азово-черноморской шемаи, включающий осеннюю заготовку производителей, выдерживание их в зимовалах до наступления нерестовых температур, гормональное стимулирование гипофизом сазана или леща в дозах 6-7 мг/кг, инкубацию икры, выдерживание эмбрионов в рыбоводных емкостях до перехода на экзогенное питание с последующей пересадкой в пруды с подготовленной естественной кормовой базой путем внесения азотно-фосфорно-калийных удобрений в соотношении 5:2:1 соответственно, пересадку личинок в 2 этапа с интервалом 7-10 дней, при этом плотность посадки составляет 1-3 млн шт./га, отличающийся тем, что перед посадкой личинок проводят предварительное залитие и спуск прудов, минеральные удобрения вносят по сухому ложу, в процессе подращивания дополнительно вносят навоз по прибрежной зоне вместе с культурой Daphnia magna и Ceriodaphnia sp. и зеленые удобрения из скошенной и подвяленной растительности, а при переходе шемаи на стадию малька в искусственный корм с содержанием белка не мене 20% вводят пробиотический препарат на основе Bacillus subtilis В-1895 в количестве 0,05-0,15% от массы корма.