Патент на изобретение №2375335

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ТЕСТИРОВАНИЯ ГУМАТОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ И/ИЛИ УДОБРЕНИЙ НА ИХ ОСНОВЕ И СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ РАСТЕНИЙ (ВАРИАНТЫ)

(57) Реферат:

Группа изобретений относится к области сельского хозяйства. В способе испытывают гуматосодержащие препараты и/или удобрения на активность посредством скрининга содержания в них бенз(а)пирена. Получают необходимое количество гуматосодержащего препарата и/или удобрений на их основе для приготовления рабочего раствора с оптимальным диапазоном концентрации бенз(а)пирена, соответствующего высокой биологической активности для определенного вида обработки растений и/или семян. В способе повышают биохимическую активность растений. В качестве биологически активного вещества для внекорневой обработки растений используют гуматосодержащие препараты и/или удобрения на их основе с содержанием бенз(а)пирена в рабочем растворе в диапазоне концентраций 3-10 нг/дм³, приготовленном перед его использованием не позднее чем за 6 часов. В способе для предпосевной обработки семян содержание бенз(а)пирена в рабочем растворе составляет 150-200 нг/дм³. Для подкорневой обработки растений содержание бенз(а)пирена в рабочем растворе составляет 0,1-0,3 нг/дм³. Группа изобретений позволяет повысить достоверность и экспрессность определения биологической активности и тестирования гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе. 4 н.п. ф-лы, 9 табл., 7 ил.

Изобретение относится к сельскохозяйственному производству, биотехнологии, экологии, а именно к определению биологической активности (стимулирующей способности к росту) гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе и к их тестированию на возможность применения определенным способом обработки растений или семян: корневым, внекорневым, предпосевным.

Изобретение может быть использовано при производстве гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе.

Из уровня техники известно, что определение активности препаратов проводят для разных культур (овощные, картофель, зерновые, многолетние травы) в разных условиях подкормки, разными способами их обработки: корневой, внекорневой, предпосевной. Действие препаратов оценивают по повышению урожайности, срокам всхожести, устойчивости к заболеваниям, степени лежкости овощей во время хранения, устойчивости при засухе и заморозках.

Причем перед практическим использованием препаратов их испытывают на активность в экспериментальных, опытных, производственных условиях, которые включают разные этапы, отличающиеся трудоемкостью, длительностью, высокими экономическими затратами, низкой точностью, вплоть до получения отрицательного результата.

1. – С.6-7).

Общими признаками известного способа с заявляемым способом определения биологической активности и тестирования гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе является назначение, а именно оценка эффективности различных препаратов.

К недостаткам известного способа относятся низкая достоверность оценки эффективности препаратов и удобрений из-за неточного подбора концентраций препаратов (и удобрений).

Недостатками известного способа с оценкой по урожайности являются также:

– высокая трудоемкость и материалоемкость (требуемая площадь от 100 м² до 2 га);

– длительность исполнения (до 4-х лет);

– значительные экономические затраты.

Известен метод определения биологической активности стимуляторов роста растений природного происхождения с помощью вегетационных опытов на культуре гороха, при котором стимулирующую (биологическую) активность оценивают по выходу зеленой массы растений в пересчете на 1 растение, выращиваемых в течение двух недель (Патент России 2213452, кл. A01N 65/00, C05F 11/02, 2001).

Общими признаками известного способа с заявляемым по п.1 формулы изобретения является назначение в части определения биологической активности.

Недостатки данного метода:

– низкая точность и достоверность результатов определения биологической активности препаратов;

– трудоемкость;

– большая продолжительность процесса.

Известен метод определения качества (биологической активности) удобрений по всхожести семян (Майсурян Н.А. Практикум по растениеводству. М.: Колос, 1970. – 446 с. – с.407-410).

Общими признаками известного способа с заявляемым способом определения биологической активности и тестирования гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе также является назначение в части определения биологической активности.

Недостатками этого метода являются: недостаточная достоверность; необходимость поддержания особых условий эксперимента (постоянная температура, необходимая влажность); длительность исполнения – от 6 до 10 суток.

Известен способ определения активности биостимуляторов, удобрений, биопрепаратов, ядохимикатов и патогенов картофеля, рыб и водных беспозвоночных, при котором выращивают растения картофеля в различных концентрациях действующих на растение химикатов и патогенов в водных растворах. При этом биоиспытания растений картофеля проводятся в отсутствие почвы в специальных сосудах, позволяющих вести визуальное наблюдение за объектом в течение всего опыта (заявка на изобретение 98118879, кл. А01Н 1/04, G01N 33/48).

Недостатки этого способа: длительность исполнения и периодическая оценка результатов на 10-й, 20-й и 30-й день опыта; для ускоренного получения результатов необходимость поддержания особых условий эксперимента (поддержание во все время вегетации растений картофеля постоянной температуры +28°С, относительной влажности 100% и длины светового дня 18 часов).

3. – С.20-21) по следующим показателям:

– урожайность;

– содержание активного гумата, зольность;

– скорость роста и созревания растений;

– жизнестойкость растений.

Общими признаками известного способа-прототипа к заявляемому способу по п.1 формулы заявляемой группы изобретений являются назначение в части определения биологической активности гуматосодержащих препаратов.

Недостатками прототипа являются недостаточная достоверность и значительная продолжительность испытаний. Причиной этому является следующий ряд недостатков.

Во-первых, содержание активного гумата, зольность в различных препаратах гуматов, а также такие свойства, как состав балласта и растворимых примесей, кислотность, влажность колеблются в очень широких пределах не только в разных препаратах, но и в разных партиях одного и того же препарата. На эти пределы накладывается еще и методическая погрешность, вызванная разными методами и методиками определения показателей, т.е. свойства – нестабильный показатель.

Во-вторых, для более эффективного использования гуминовых препаратов экспериментальным путем подбирают концентрации препарата, оптимальные по стимулирующему эффекту. Однако существующая связь между концентрацией и дозой раствора неоднозначна и не до конца изучена.

В-третьих, необходим тщательный подбор условий применения препарата, который включает длительный и затратный экспериментальный подход.

Известен способ повышения биохимической активности (стимулирующей способности) растений с применением синтетических стимуляторов роста, в качестве которых используют как индивидуальные соединения, так и их композиции, содержащие в своем составе ростостимулирующие вещества (патент России 2267924, МПК A01N 37/04, опубл. 20.01.2006; 2158510, МПК A01N 25/00, 37/04, 37/44, опубл. 2000 г.).

Общими признаками известного способа с заявляемыми способами по п.2, 3, 4 формулы заявляемой группы изобретения являются назначение и воздействие на процессы роста и развития биологически активным веществом.

Недостатком известного способа является тот факт, что механизм воздействия стимуляторов на ростовые процессы в растениях до сих пор до конца не выяснен, однозначно нельзя предугадать воздействия на живой организм (человека или животного) сельхозпродукции, выращенной с использованием стимуляторов роста.

За прототип способов по п.2, 3, 4 формулы заявляемой группы изобретений принят способ повышения биохимической активности растений (патент РФ 2171577, МПК A01N 43/90, C07D 475/02, C12N 1/38, опубл. 2001 г.).

Общими признаками способа прототипа с заявляемыми способами по п.2, 3, 4 формулы группы изобретения являются назначение и воздействие на процессы роста и развития биологически активным веществом.

Недостатком известного способа является то же, что и в предыдущем способе, а именно применение в качестве стимулятора роста синтетического вещества гидроптерина.

Заявляемая группа изобретений направлена на решение задачи по получению технологий, способных экспрессно и достоверно определять из природных материалов гуматосодержащие препараты и/или удобрения на их основе в таких концентрациях, которые наиболее эффективно способствуют росту и развитию сельскохозяйственных культур.

Заявляемая группа изобретений объединена единым изобретательским замыслом, так как каждый способ из заявляемой группы направлен на решение указанной задачи.

Технический результат заявляемой группы изобретений заключается в повышении достоверности и экспрессности определения биологической активности и тестирования гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе при низких затратах за счет исключения необходимости длительных экспериментальных работ, а также в более точном подборе вида обработки (внекорневой, корневой, предпосевной).

Технический результат заявляемого изобретения достигается тем, что в способе определения биологической активности и тестирования гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе (по п.1 формулы группы изобретений), включающем испытание их на активность, согласно изобретению, испытание гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе на активность проводят посредством скрининга содержания в них бенз(а)пирена с последующим проведением расчета необходимого количества гуматосодержащего препарата и/или удобрений на их основе для приготовления рабочего раствора с оптимальным диапазоном концентрации бенз(а)пирена, соответствующего высокой биологической активности для определенного вида обработки растений и/или семян.

Технический результат заявляемого изобретения достигается тем, что в способе повышения биохимической активности растений (по п.2 формулы), включающем воздействие на процессы роста и развития раствором биологически активного вещества, согласно изобретению, в качестве биологически активного вещества для внекорневой обработки растений используют гуматосодержащие препараты и/или удобрения на их основе с содержанием бенз(а)пирена в рабочем растворе в диапазоне концентраций 3-10 нг/дм³, приготовленном перед его использованием не позднее чем за 6 часов, т.к. известно, что за это время бенз(а)пирен окисляется на 10-20% (Кирсо У.Э., Стом Д.И., Белых Л.И., Ирха Н.И. Превращение канцерогенных и токсических веществ в гидросфере. Таллин, «Валгус», 1988. С.92).

Технический результат заявляемого изобретения достигается тем, что в способе повышения биохимической активности растений (по п.3 формулы), включающем воздействие на процессы роста и развития раствором биологически активного вещества, согласно изобретению, в качестве биологически активного вещества для предпосевной обработки растений используют гуматосодержащие препараты и/или удобрения на их основе с содержанием бенз(а)пирена в рабочем растворе в диапазоне концентраций 150-200 нг/дм³, приготовленном перед его использованием не позднее чем за 6 часов.

Технический результат заявляемого изобретения достигается тем, что в способе повышения биохимической активности растений (по п.4 формулы), включающем воздействие на процессы роста и развития раствором биологически активного вещества, согласно изобретению, в качестве биологически активного вещества для подкорневой обработки растений используют гуматосодержащие препараты и/или удобрения на их основе с содержанием бенз(а)пирена в рабочем растворе в диапазоне концентраций 0,1-0,3 нг/дм³, приготовленном перед его использованием не позднее чем за 6 часов.

Известно, что биостимуляторами роста и развития растений являются водорастворимые соли природных гуминовых соединений – гуматы и фульваты Na, К или NH₄3. – С.1-3). Гуминовые вещества широко распространены в природе и образуются в результате деструкции органических веществ. Они обладают широким спектром физиологической активности на живые организмы и широко используются в качестве органических удобрений и структуроулучшителей почвы, стимуляторов роста растений и животных, а также кормовых добавок. Из всех известных стимуляторов роста только о гуминовых веществах можно совершенно определенно сказать, что в организме человека и животного они также проявляют положительный физиологический эффект, что подтверждено результатами исследований учеными многих стран.

3. – С.26-29.) установлено, что чем больше преобладают группы классов – карбонилы, карбоксилы, хиноны; фенольные гидроксилы и азотзамещенные ароматические группы; ароматика и гетероциклы; ароматические протонизированные атомы углерода – тем выше биологическая активность гуминовых препаратов (гуматов).

Поэтому необходим контроль содержания бенз(а)пирена в препаратах (удобрениях), интенсивно применяемых в сельском хозяйстве, животноводстве в качестве стимуляторов роста, и предпочтительно использовать препараты и удобрения с оптимальным содержанием бенз(а)пирена.

Решение поставленной задачи достигается тем, что проводят скрининг образцов гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе, т.е. проводится аналитическое определение бенз(а)пирена, включающее экстракцию бенз(а)пирена из образца, упаривание и очистку полученного экстракта, определение бенз(а)пирена известными методами низкотемпературной люминесценции (НТЛ), высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) или хромато-масс-спектрометрией (ХМС).

После этого проводится расчет необходимого для практического применения количества гуматосодержащего препарата для каждого способа обработки (внекорневая, корневая, предпосевная) такого количества препарата, которое обеспечит оптимальную концентрацию бенз(а)пирена в рабочем растворе – от 3 до 10 нг/дм³ при внекорневой обработке растений, от 0,1 до 0,3 нг/дм³ при подкорневой обработке, от 150 до 200 нг/дм³ при предпосевной обработке семян.

Расчет проводится по следующей формуле:

где С_гум – количество готового к применению гуматосодержащего препарата; – аналитически определенная концентрация бенз(а)пирена в гуматосодержащем препарате, нг/г; – рекомендуемая оптимальная концентрация бенз(а)пирена в препарате, нг/дм³.

После расчета и взвешивания необходимого количества гуматосодержащего препарата проводится приготовление рабочего раствора путем разбавления в воде. При этом рабочий раствор необходимо готовить непосредственно перед его использованием и хранить не более 6 ч.

Таким образом, в основу настоящего изобретения положено определение содержания бенз(а)пирена в гуминовых препаратах. О биологической активности препарата судят по наличию и содержанию бенз(а)пирена в диапазоне от 3 до

10 нг/дм³ при внекорневой обработке растений, от 0,1 до 0,3 нг/дм³ при подкорневой обработке, от 150 до 200 нг/дм³ при предпосевной обработке семян в рабочем растворе. Для этого на этапе приготовления гуминовых препаратов необходимо проводить скрининг содержания бенз(а)пирена, поскольку биологическая активность, проявляемая в прибавке урожая, усилении скорости роста и созревания, повышении жизнестойкости растений зависит от концентрации бенз(а)пирена. Было установлено, что максимальные эффекты проявляются в диапазоне низких концентраций, увеличение же содержания бенз(а)пирена в препарате приведет к стабилизации или даже ингибированию отмеченных эффектов.

Испытание гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе на активность посредством скрининга содержания в них бенз(а)пирена позволяет однозначно установить их биологическую активность и возможность использования различными видами обработки без дополнительных классических методов определения активности – по урожайности, по всхожести семян, скорость роста и созревания растений, содержание активного гумата – как на стадии испытания готовой продукции на заводах-изготовителях, так и при реализации удобрений.

Использование рабочих растворов для внекорневой обработки растений с концентрацией бенз(а)пирена менее 3 нг/дм³ не приводит к положительному результату, т.е. не наблюдается стимулирующего эффекта (пример 1, 2, 3, табл.1, 2, 3, фиг.1, 2, 3).

Использование рабочих растворов для внекорневой обработки растений с концентрацией бенз(а)пирена более 10 нг/дм³ приводит к обратному эффекту – ингибированию роста и развития растений, что приводит к снижению урожайности (пример 1, 2, 3, табл.1, 2, 3, фиг.1, 2, 3).

Использование рабочих растворов для предпосевной обработки семян с концентрацией бенз(а)пирена менее 150 нг/дм³ не приводит к положительному результату, т.е. не наблюдается заметного стимулирующего эффекта (пример 4, табл.4, фиг.4).

Использование рабочих растворов для предпосевной обработки семян с концентрацией бенз(а)пирена более 200 нг/дм³ приводит к стабилизации эффекта (стимулирование роста) и даже его снижению (пример 4, табл.4, фиг.4).

Использование рабочих растворов для корневой обработки растений с концентрацией бенз(а)пирена менее 0,1 нг/дм³ также не приводит к положительному результату, т.е. не наблюдается стимулирующего эффекта роста и развития растений (пример 5, 6, 7, табл.5, 6, 7, фиг.5, 6, 7).

Использование рабочих растворов для корневой обработки растений с концентрацией бенз(а)пирена более 0,3 нг/дм³ приводит к обратному эффекту, т.е. к ингибированию роста и развития растений (пример 5, 6, 7, табл.5, 6, 7, фиг.5, 6, 7).

Известно определение содержания бенз(а)пирена, например при установлении степени загрязнения объектов окружающей среды и поисков способа устранения загрязнителя-канцерогена. Однако совсем отсутствуют способы определения бенз(а)пирена для контроля каких-либо эффектов и процессов.

В заявляемом изобретении бенз(а)пирен выполнят роль индикатора, вернее его содержание выступает фактором, позволяющим проводить экспрессное тестирование, что свидетельствует о его новой функции и проявлении в заявляемой совокупности признаков нового технического результата, что доказывает соответствие заявляемого изобретения условию патентоспособности «изобретательский уровень».

Заявляемое изобретение иллюстрируется примерами

Пример 1. Было изучено влияние гумата (смешанный образец) и содержащегося в нем бенз(а)пирена на урожайность моркови в условиях внекорневой подкормки (опрыскивание раствором). Результаты представлены в таблице 1, проиллюстрированы на фиг.1.

Пример 2. То же, что и в примере 1, но на культуре картофеля сорта «Невский». Результаты представлены в таблице 2, проиллюстрированы на фиг.2. В данном случае, несмотря на испытания удобрений гуматов различного химического состава, сохранилась четкая, практически линейная зависимость урожайности картофеля от содержания бенз(а)пирена в растворах. При этом не проявлялось эффекта стабилизации, что объясняется низкими содержаниями стимулятора (до 10 нг/дм³) по сравнению с выше рассмотренным примером.

Пример 3. То же, что и в примере 2, но для картофеля сорта «Иртыш», обрабатываемого внекорневым способом обработки разными препаратами гуматов в период интенсивного нарастания вегетативной массы (фаза бутонизации – цветения). С увеличением нагрузки на почву бенз(а)пирена до 10 нг/м² отмечена резкая прямая роста урожая с последующим небольшим (на 2-4%) снижением эффекта. Результаты представлены в таблице 3, на фиг.3.

Пример 4. То же, что и в примере 2, но при обработке клубней картофеля водным раствором гумата непосредственно перед посадкой (предпосевной способ обработки). В испытуемом растворе препарата в воде были рассчитаны концентрации бенз(а)пирена. В диапазоне содержания соединения 0-150 нг/дм³ прибавка биомассы клубней линейно зависит от концентрации бенз(а)пирена, с увеличением которой до 200 нг/дм³ эффект далее стабилизируется. Результаты их влияния в виде прибавки урожайности картофеля приведены в таблице 4, на фиг.4.

Пример 5. Изучено влияние растворов смешанного образца гумата разных концентраций на прирост корней пшеницы в модельном эксперименте при подкорневом способе обработки (внесение в почву). Результаты показали, что максимальный прирост наблюдается для концентраций бенз(а)пирена 0,25 нг/дм³. С увеличением концентрации соединения в два раза действие эффекта снижается. Результаты представлены в таблице 5, на фиг.5.

Пример 6. То же, что и в примере 5, но влияние гумата и содержащегося в нем бенз(а)пирена изучено на культуре гороха при подкорневом способе обработки. Отмеченный эффект проявился еще в большей степени. Результаты представлены в таблице 6, на фиг.6.

Пример 7. Тоже, что и в примере 5, но влияние гумата и содержащегося в нем бенз(а)пирена изучено на делящихся растительных клетках при подкорневом способе обработки. Результаты представлены в таблице 7, на фиг.7.

Приведенные примеры однозначно обнаруживают влияние концентрации бенз(а)пирена в препаратах гуматов на прибавку урожая различных культур, на рост клеток и корней по общим зависимостям – максимальное проявление эффекта при низких концентрациях с последующей стабилизацией или даже снижением действия при высоких содержаниях бенз(а)пирена.

Пример 8. Систематизированы диапазоны концентраций бенз(а)пирена, стимулирующие рост урожайности сельскохозяйственных культур в зависимости от способа обработки растений. Результаты представлены в табл.8.

Таблица 8
Способ обработки растений	Гуматы	Эффективные концентрации бенз(а)пирена
Вид	Концентрация бенз(а)пирена, мкг/кг	Изученный диапазон доз	Оптимальный диапазон доз для приготовления рабочего раствора
1. Внекорневая обработка (опрыскивание, полив)
– морковь	ГУМАТ (К, Na)	50±20	От 1,25 до 37,5 нг/дм3
– картофель	ГУМАТ+7	25±9
ГУМЭЛ	25±9
ГУМАТ-80	3,0±1,5	От 0,9 до 10 нг/дм3	От 3 до 10 нг/дм3
Бульба	2,0±1,0
– картофель	ГУМАТ (К, Na)	50±20
ГУМАТ+7	25±9
ГУМЭЛ	25±9	От 3,75 до 60 нг/м2
Бульба	2,0±1,0
2. Внесение в почву (подкорневая обработка)
– пшеница (рост корней)
– горох (рост корней)	ГУМАТ (К, Na)	50±20	От 0,05 до 0,5 нг/дм3	От 0,1 до 0,3 нг/дм3
рост растительных клеток
3. Предпосевная обработка семян (замачивание в растворе)
– картофель	ГУМАТ (К, Na)	50±20	От 50 до 220 нг/дм3	От 150 до 200 нг/дм3

Результаты эксперимента по влиянию бенз(а)пирена в составе гуматосодержащих препаратов (на примере «Иркутских гуматов») на ростовые функции растительных организмов позволяют говорить об участии биологически активного бенз(а)пирена в стимулирующих (или ингибирующих) эффектах в зависимости от его концентрации. Это необходимо учитывать при практическом использовании гуматосодержащих препаратов и подборе условий их дальнейшего использования.

Пример 9. Было проведено аналитическое определение бенз(а)пирена методом НТЛ в удобрениях гуматов («Иркутские гуматы») разного состава и расчет необходимого их количества для приготовления рабочих растворов с оптимальным диапазоном содержания бенз(а)пирена. Результаты представлены в табл.9.

Изобретение поясняется графическими изображениями (графиками), где:

на фиг.1 представлено влияние гуматов (смешанный образец) и содержащегося в нем бенз(а)пирена на урожайность моркови при внекорневом способе обработки;

на фиг.2 – влияние гуматов и содержащегося в нем бенз(а)пирена на урожайность картофеля сорта «Невский» при внекорневом способе обработки;

на фиг.3 – влияние гуматов и содержания в них Б(а)П на урожай картофеля сорта «Иртыш» при внекорневом способе обработки;

на фиг.4 – влияние гумата и содержания бенз(а)пирена на урожайность картофеля при предпосевной обработке семян;

на фиг.5 – влияние гумата и содержания в нем бенз(а)пирена на рост корней пшеницы при корневом способе обработки;

на фиг.6 – влияние гумата и содержащегося в нем бенз(а)пирена на рост корней гороха при корневом способе обработки;

на фиг.7 – влияние гумата и содержащегося в нем бенз(а)пирена на количество делящихся растительных клеток при корневом способе обработки.

Формула изобретения

1. Способ определения биологической активности и тестирования гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе путем испытания их на активность, отличающийся тем, что испытание гуматосодержащих препаратов и/или удобрений на их основе на активность проводят посредством скрининга содержания в них бенз(а)пирена с последующим проведением расчета необходимого количества гуматосодержащего препарата и/или удобрений на их основе для приготовления рабочего раствора с оптимальным диапазоном концентрации бенз(а)пирена, соответствующего высокой биологической активности для определенного вида обработки растений и/или семян.

2. Способ повышения биохимической активности растений путем воздействия на процессы роста и развития раствором биологически активного вещества, отличающийся тем, что в качестве биологически активного вещества для внекорневой обработки растений используют гуматосодержащие препараты и/или удобрения на их основе с содержанием бенз(а)пирена в рабочем растворе в диапазоне концентраций 3-10 нг/дм³, приготовленном перед его использованием не позднее, чем за 6 ч.

3. Способ повышения биохимической активности растений путем воздействия на процессы роста и развития раствором биологически активного вещества, отличающийся тем, что в качестве биологически активного вещества для предпосевной обработки семян используют гуматосодержащие препараты и/или удобрения на их основе с содержанием бенз(а)пирена в рабочем растворе в диапазоне концентраций 150-200 нг/дм³, приготовленном перед его использованием не позднее, чем за 6 ч.

4. Способ повышения биохимической активности растений путем воздействия на процессы роста и развития раствором биологически активного вещества, отличающийся тем, что в качестве биологически активного вещества для подкорневой обработки растений используют гуматосодержащие препараты и/или удобрения на их основе с содержанием бенз(а)пирена в рабочем растворе в диапазоне концентраций 0,1-0,3 нг/дм³, приготовленном перед его использованием не позднее, чем за 6 ч.

РИСУНКИ