Патент на изобретение №2375069

Published by on




РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ



ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
(19) RU (11) 2375069 (13) C1
(51) МПК

A61K35/66 (2006.01)
A23K1/165 (2006.01)

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

Статус: по данным на 17.09.2010 – может прекратить свое действие

(21), (22) Заявка: 2008117212/13, 29.04.2008

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

29.04.2008

(46) Опубликовано: 10.12.2009

(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске:
RU 2280464 C2, 27.07.2006. RU 2166323 C2, 10.05.2001. RU 2083666 C1, 10.07.1997. S 6,340,585 B1, 22.01.2002. ЦИНБЕРГ М.Б. и др. «Соя-бифидум» и «Соя-лактум» – новые пробиотические продукты, созданные на основе соевого сырья. Международная конференция. Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современноесостояние и перспективы. – М.: 2004,с.124-125. Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве. Сборник научных трудов, МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского. – М.: 1986, с.37. КИТЕЛЬ Н.Ф. Технология бактериальных препаратов для функциональных продуктов и биологически активных добавок 2003 года, Автореф. на соиск. уч. ст. д.т.н. – Киев: 2003. СТАРОВОЙТОВА С.О. и др. Влияние ассоциативной культуры лактобактерий на герпетичный менингоэнцефалит у мышей. Материалы научно-практической конференции с международным участием 27-28 марта 2008. Инфекции в практике клинициста. Антибактериальная и антивирусная терапия на догоспитальном и госпитальном этапах. – Харьков: 2008, с.316-317.

Адрес для переписки:

350072, г.Краснодар, ул. Московская, 2, ГОУВПО “КубГТУ”, ОИиПС и экспертизы проектов, Проректору по НиИД, проф. В.С. Симанкову

(72) Автор(ы):

Хамитова Нелли Ринатовна (RU),
Шахрай Татьяна Анатольевна (RU),
Тимофеенко Татьяна Ильинична (RU),
Стукало Алена Сергеевна (RU),
Гринь Анастасия Валерьевна (RU)

(73) Патентообладатель(и):

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования “Кубанский государственный технологический университет” (ГОУВПО “КубГТУ”) (RU)

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО СИНБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА

(57) Реферат:

Готовят маточную культуру совместным культивированием молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244, взятых в равной пропорции на питательной среде, состоящей из компонентов, мас.%: молоко коровье 50, глюкоза 5-15, лактоза 5-15, агар 3-4, вода остальное. Твердофазную ферментацию маточной культуры проводят на стерилизованной муке из семян амаранта, взятых в соотношении 1:1 при 35-40°С в течение 4-6 суток с получением в полувлажном препарате не менее 2·109 КОЕ/г. Перемешивают последнюю со стерилизованной мукой из семян амаранта до получения влажности в готовом препарате 8-12% и биотитра не менее 2-108 КОЕ/г. Это обеспечивает выраженный синбиотический эффект препарата, оказывает рост-стимулирующее воздействие на микрофлору организма и улучшает микробиоценоз кишечника организма. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, синбиотикам, препаратам для профилактики дисбактериозов и различных заболеваниях, связанных со свободно-радикальным окислением липидов в организме человека.

Известен способ получения сухого бактериального препарата путем сублимационной сушки биопрепарата на основе ацидофильных бактерий и бифидобактерий (Патент РФ 2083666, кл. 6 С12N 1/20, А23С 9/12, С12N 1/20, опубл. 01.07.1997 г.). К недостаткам данного способа относится применение дорогостоящей сублимационной сушки, требующей больших капиталовложений в производство препарата.

Известен способ получения сухого пробиотического препарата, предусматривающий получение маточной культуры штаммов микроорганизмов Rhuminococcus albus Kr, Lactobacillus acidophilus Scav. BKПM В 4625, совместное культивирование маточной культуры на подсолнечном шроте при температуре 30-45°С в течение 4-8 суток, с последующим смешиванием получившийся полувлажной формы с сухим шротом в соотношении 1:10-1:12 до получения влажности в готовом препарате 8-10% (патент РФ 2280464, А61К 35/66, А23К 1/165, опубл. 27.07.2006 г.). К недостаткам данного способа относится отсутствие в препарате компонентов, стимулирующих рост и развитие собственной микрофлоры хозяина.

Техническим результатом изобретения является следующее: полученный препарат обладает выраженным синбиотическим эффектом за счет использования муки из семян амаранта, в качестве источника пребиотиков – пектиновых веществ и биологически активных веществ – сквалена с радиопротекторными свойствами; токоферолов с антиоксидантными, иммуномоделирующими свойствами с одной стороны, и комплекса молочнокислых микроорганизмов, обладающих высокой антагонистической активностью (в отношении патогенной микрофлоры кишечника), высокой выживаемостью в кислой среде желудка и обеспечивающих своими метаболитами улучшение микробиоценоза кишечника с другой стороны. Препарат, полученный по заявляемому способу, оказывает рост-стимулирующее воздействие на нормофлору организма и поэтому показан для профилактики и лечения не только дисбактериоза кишечника, но и при различных заболеваниях, связанных со свободно-радикальным окислением липидов в организме человека (атеросклероз, в том числе ишемическая болезнь сердца, стенокардия, гипертоническая болезнь, лучевое и другие негативные воздействия).

Технический результат достигается предложенным способом. Готовят маточную культуру совместным культивированием молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244, взятых в равной пропорции на питательной среде, состоящей из смеси молока коровьего, глюкозы, сахарозы, агара и воды при следующем соотношении компонентов, мас%:

Молоко коровье 50
Глюкоза 5-15
Лактоза 5-15
Агар 3-4
Вода остальное

осуществляют твердофазную ферментацию маточной культуры на стерилизованной муке из семян амаранта, взятых в соотношении 1:1 при 35-40°С в течении 4-6 суток с получением в полувлажном препарате не менее 2·109 КОЕ/г, перемешивают последнюю со стерилизованной мукой из семян амаранта до получения влажности в готовом препарате 8-12% и биотитра не менее 2·108 КОЕ/г.

Штамм Lactobacillus acidophilus В 3235 является антагонистом бактерий кишечной группы и используется для получения лечебно-профилактического кормового продукта и как пробиотик в медицине и ветеринарии, продуцент молочной кислоты.

Штамм Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788 применяется в качестве лечебно-профилактического препарата медицинского и ветеринарного назначения.

Штаммы бактерий Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 являются пробиотиками и активными продуцентами витаминов группы В.

Семена амаранта являются высокобелковым продуктом со сбалансированным аминокислотным составом, высоким содержанием кальция, витамина С и пищевых волокон, являющихся стимулириующим фактором роста молочнокислых бактерий в кишечнике.

Таким образом, получен комбинированный синбиотический препарат сообщества доминантных молочнокислых микроорганизмов с семенами амаранта, содержащими компоненты-пребиотики, стимулирующие рост представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Пример 1. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:

Молоко коровье 50
Глюкоза 6
Лактоза 14
Агар 3
Вода остальное

Культивирование проводят при 35°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 4,5. Тверд офазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на цельно смолотой муке из семян амаранта, стерилизованной при 121°С в течение 40 мин, при температуре 35°С в течение 4 суток с получением в полувлажном препарате 1·109 КОЕ/г и рН 4,0. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 1·108 КОЕ/г и влажности в готовом препарате 12%.

Пример 2. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:

Молоко коровье 50
Глюкоза 10
Лактоза 10
Агар 3,5
Вода остальное

Культивирование проводят при 37°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 3,5. Твердофазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на стерилизованной цельно смолотой муке из семян амаранта, при температуре 37°С в течение 4 суток с получением в полувлажном препарате 2·109 КОЕ/г и рН 3,6. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 2·108 КОЕ/г и влажности в готовом препарате 9%.

Пример 3. Для культивирования пробиотических штаммов молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244 используют питательную среду следующего состава, мас%:

Молоко коровье 50
Глюкоза 14
Лактоза 6
Агар 4
Вода остальное

Культивирование проводят при 40°С в течение 72 часов, активная кислотность к концу культивирования рН 4. Твердофазную ферментацию полученной маточной культуры проводят на стерилизованной цельно смолотой муке из семян амаранта, при температуре 40°С в течение 5 суток с получением в полувлажном препарате 1,5·109 КОЕ/г и рН 4,3. Полувлажную форму препарата перемешивают со стерилизованной мукой из семян амаранта с получением сухой формы препарата с биотитром 1·108 КОЕ/г и влажности в готовом препарате 10%.

Цельно смолотая мука амаранта содержит в своем составе не менее 5,5 г/100 г пищевых волокон, которые не перевариваются эндогенными секретами желудочно-кишечного тракта, стимулируют рост и метаболизм микроорганизмов, обитающих в толстом кишечнике, обеспечивая нормальный состав кишечной микрофлоры. Защитные компоненты, входящие в состав питательной среды для маточной культуры, обеспечивают лучшую выживаемость и сохранность микроорганизмов в сухом препарате.

В лабораторном опыте на белых мышах было сформировано 3 группы по 25 голов в каждой. Мыши контрольной 1-й группы получали стандартный рацион согласно нормам, изложенным в Приказе по Министерству здравоохранения СССР за 163 от 10 марта 1966 г. О нормах кормления лабораторных животных и продуцентов. Мышам 2-й и 3-й групп добавляли 0,05 и 0,1 г синбиотического препарата соответственно. Продолжительность опыта 56 суток.

Контролируемый показатель Группы
1 2 3
Количество мышей на начало опыта 25 25 25
На конец опыта 20 24 25
Сохранность, % 80 96 100
Живая масса одной мыши на начало опыта, г 9,90 9,91 9,86
На конец опыта 22,9 26,3 31,9
Прирост живой массы тела, г 13 16,39 22,04

Исследования показали, что применение препарата повысило сохранность мышей и увеличило прирост живой массы тела во 2-й и 3-й группах на 26 и 69,5% соответственно. Препарат не оказывает неблагоприятных воздействий на организм, каких-либо патологических изменений в ходе приема препарата не обнаружено.

Формула изобретения

1. Способ получения сухого синбиотического препарата, характеризующийся тем, что готовят маточную культуру совместным культивированием молочнокислых микроорганизмов Lactobacillus acidophilus В 3235, Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus В 5788, Bifidobacterium longum AC 1249, Bifidobacterium adolescentis AC 1244, взятых в равной пропорции, на питательной среде, состоящей из смеси молока коровьего, глюкозы, сахарозы, агара и воды при следующем соотношении компонентов, мас.%:

молоко коровье 50
глюкоза 5-15
лактоза 5-15
агар 3-4
вода остальное

осуществляют твердофазную ферментацию маточной культуры на стерилизованной муке из семян амаранта, взятых в соотношении 1:1, при 35-40°С в течение 4-6 суток с получением в полувлажном препарате не менее 2·109 КОЕ/г, перемешивают последнюю со стерилизованной мукой из семян амаранта до получения влажности в готовом препарате 8-12% и биотитра не менее 2·108 КОЕ/г.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что стерилизацию муки из семян амаранта осуществляют при 121°С в течение 40 мин.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что твердофазную ферментацию проводят до достижения pH 3,5-4,5.

Categories: BD_2375000-2375999