Патент на изобретение №2374223

(54) ГИДРОБРОМИД 3-[N-(ЭТОКСИКАРБОНИЛМЕТИЛЕН)БЕНЗИЛАМИНО]-4-N-БЕНЗИЛБУТАНАМИДА, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ПРОТИВОМИКРОБНУЮ АКТИВНОСТЬ И СВОЙСТВА СТИМУЛЯТОРА ПРОРАСТАНИЯ СЕМЯН ПШЕНИЦЫ

(57) Реферат:

Изобретение направлено на получение нового соединения – гидробромида 3-[N-(3-этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-N-бензилбутанамида, расширяющего ассортимент веществ с рострегулирующими свойствами и обладающего антимикробной активностью. При использовании заявляемого соединения в оптимальной дозе отмечено, что ростстимулирующее действие на проростках пшеницы значительно превосходит контроль и аналоги по строению и действию; при использовании предлагаемого соединения на бактериях золотистого стафилококка наблюдается существенное возрастание бактериостатического и бактерицидного действия по сравнению с аналогом по действию. 2 табл.

Изобретение направлено на получение нового соединения – гидробромиду 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-N-бензилбутанамида формулы 1:

которое: а) может найти применение в медицине в качестве антисептического средства; б) в сельском хозяйстве – в качестве стимулятора прорастания семян пшеницы.

Указанное соединение, его химические и биологические свойства в литературе не известны.

К наиболее близким аналогам по структуре и действию в качестве стимулятора прорастания семян пшеницы относится 3-бензиламино-4-гидрокси-N-бензилбутанамид формулы 2:

ближайшим аналогом по структуре и противомикробному действию заявляемому соединению является гидробромид 3-[N-(3-карбоксипропилен)-бензиламино]-4-гидрокси-N-бензилбутанамида формулы 3

В качестве аналога по противомикробному действию использован известный антисептик – фениловый эфир салициловой кислоты – фенилсалицилат (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., 2005).

В качестве аналога по рострегулирующим свойствам был взят гиббереллин, широко используемый для активации прорастания семян. Однако гиббереллин – дорогостоящий продукт микробиологического синтеза и малодоступен. Его применение вызывает нерациональную трату пластических веществ растительным организмом (1. Муромцев Г.С. и др. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений. – М.: Агропромиздат, 1987. – с.33-80).

5. С.154-168), а также проявляющего противомикробную активность.

Это достигается синтезом нового неописанного ранее соединения – гидробромида 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-N-бензилбутанамида формулы 1, проявляющего свойства активатора прорастания семян пшеницы и противомикробную активность. Соединение формулы 1 получают взаимодействием 3-бензиламино-4-гидрокси-N-бензилбутанамида с этиловым эфиром -бромуксусной кислоты. Полученное соединение идентифицировано по совокупности данных элементного анализа и результатам физико-химических методов анализа.

Изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1

Получение гидробромида 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-4-N-бензилбутанамида (1)

В круглодонной колбе растворяют 6,81 г этилового эфира -бромуксусной кислоты и 12,15 г 3-бензиламино-4-гидрокси-N-бензилбутанамида в 150 см³ смеси этилацетат – хлороформ (1:1), кипятят 2 ч с обратным холодильником и оставляют на ночь. Выпавшие кристаллы отделяют фильтрованием и промывают на фильтре этилацетатом и серным эфиром. Получают 10,42 г (55%) целевого продукта. Т. пл. 122123°С.

Вычислено, %: С 56,77%; Н 6,24%; N 5,02%; Br 17,20%.

Найдено, %: С 56,61%; Н 6,14%; N 5,11%; Br 16,51%. C₂₂H₂₉N₂O₄Br.

ПК спектр, вазелиновое масло (, см^-1): 3170, 3080, 3060, 3030, 2690, 1740, 1660, 1640, 1580.

Пример 2

Рострегулирующая активность гидробромида 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-4-N-бензилбутанамида

Рострегулирующую активность соединения 1 и его влияние на посевные качества семян определяли модельными методами модифицированного лабораторного скрининга на семенах озимой пшеницы сорта Дея.

В ходе исследований определяли оптимальную ростактивирующую концентрацию соединения 1, его влияние на посевные качества семян озимой пшеницы (энергия прорастания, длина и масса побеговой и корневой системы проростков).

Для изучения рострегулирующей активности заявляемое вещество и аналог по строению предварительно растворяли в ДМСО и затем воде. В качестве аналога по свойствам использовали гиббереллин, в качестве аналога по структуре – соединение 2. Абсолютным контролем служила вода.

Семена замачивали в водных растворах препаратов в течение 18 часов.

Затем семена проращивали в рулонах фильтровальной бумаги при температуре 20-22°С. Повторность опыта трехкратная. В каждой повторности использовали по 50 штук семян.

Об оптимальной ростстимулирующей концентрации соединения судили по совокупности таких показателей, как энергия прорастания, длина и сухая масса проростков и их потенциальная продуктивность.

Результаты определения оптимальной концентрации соединения и их влияния на посевные качества семян приведены в таблице 1.

Проведенные исследования позволили установить, что испытанное соединение 1 проявляет свойства активатора прорастания семян пшеницы.

Соединение 1 в оптимальной ростстимулирующей дозе с массовой долей 0,001% активирует рост проростков, увеличивая энергию прорастания семян на 2%, длину побеговой части 7-дневных проростков – на 55,4%, длину коней проростков – на 58,6%, а их массу – на 64,6 и 59,7% соответственно, значительно превосходя контроль и аналоги по строению и действию.

Таким образом, заявляемое соединение гидробромид 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-4-N-бензилбутанамида формулы 1 является эффективным активатором прорастания семян пшеницы и может найти применение в практике сельского хозяйства в качестве средства для улучшения посевных качеств семян пшеницы и повышения жизнеспособности всходов.

Пример 3

Противомикробное действие гидробромида 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-4-N-бензилбутанамида

Исследование биологической активности (специфического действия и токсичности) заявляемого соединения проводили на белых беспородных мышах массой 18-20 г. Противомикробное действие выявляли методом двукратных серийных разведений в соответствии с методикой изучения противомикробного действия препаратов (Першин Г.Н., 2-е изд., 1971) на золотистом стафилококке (Staphylococcus aureus, 209-p). Для культивирования бактерий использовали мясо-пептонный бульон и агар (рН 7,2-7,4). Готовили исходные разведения микробных тел по оптическому стандарту мутности из суточной агаровой культуры. Для определения бактериостастатического действия микробная нагрузка соответствовала 2,5·10⁵ микробных тел в 1 мл среды, для изучения бактерицидного действия – 2 миллиардам микробных тел в 1 мл среды.

Микробную взвесь вносили в приготовленные разведения препарата в питательной среде. Результаты опытов учитывали после 20-часового термостатирования при 37°С.

Зараженные тест-объекты вносили в приготовленные разведения препарата в питательной среде и через определенное время промывали нейтрализатором, затем засевали в питательный бульон. Учет результата проводили через 7 суток. Противомикробные бактериостатическую и бактерицидную концентрации оценивали по минимально действующей концентрации. Эталоном сравнения служил известный лекарственный препарат фенилсалицилат (Машковский М.Д., 1986, с.406), аналогом по структуре и действию – гидробромид 3-[N-(3-карбоксипропилен)бензиламино]-4-гидрокси-N-бензилбутанамид формулы 3.

Результаты исследования представлены в таблице 2.

Таблица 2
Изучение противомикробного действия предлагаемого соединения 1 в сравнении с аналогами
Соединение	Активность золотистого стафилококка, мкг/мл
Соединение 1
Соединение 3
Фенилсалицилат

Как следует из таблицы, заявляемое соединение гидробромид 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-N-бензилбутанамида формулы 1 обладает выраженным ингибирующим действием в отношении золотистого стафилококка в концентрации 15,6 мкг/л, что значительно превосходит действие структурного аналога 3 и эталона по действию (соответственно 1000,0 и 4000,0 мкг/л). Цидный эффект достигается у предлагаемого соединения при концентрации 250 мкг/л, что также существенно лучше действия аналогов по структуре и свойствам (см. табл.2). Предлагаемый препарат обладает выраженным противомикробным действием в отношении грамположительных бактерий, а именно золотистого стафилококка (St. auereus), т.е. заявляемое соединение обладает преимуществом.

Изучение средней летальной дозы (ЛД₅₀) заявляемого соединения 1 проводили по методу Першина Г.Р. (1963) на белых беспородных мышах массой 18-20 г при однократном пероральном введении и наблюдения за поведением и гибелью животных в течение 5 суток. ЛД₅₀ предлагаемого соединения составила 1000 мг/кг, что позволяет отнести этот препарат к умеренно токсичным.

В связи с тем, что гидробромид 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-4-N-бензилбутанамида умеренно токсичен и обладает выраженным противомикробным действием по сравнению со структурным аналогом и эталоном по действию фенилсалицилатом он может найти применение в качестве антисептического средства в практической медицине.

Формула изобретения

Гидробромид 3-[N-(этоксикарбонилметилен)бензиламино]-4-гидрокси-4-N-бензилбутанамида формулы

проявляющий противомикробную активность и свойства стимулятора прорастания семян пшеницы.