Патент на изобретение №2372938

(54) ИНАКТИВИРОВАННАЯ БИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ И АДЕНОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ И АДЕНОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

(57) Реферат:

Группа изобретений относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вакцина включает антиген аденовируса первого серотипа В-10, инактивант, адъювант концентрированный ПЭГ-6000 в конечной концентрации 10%. Дополнительно вакцина содержит антиген вируса вирусной диареи «Оригон», концентрированный 8-9% ПЭГ-6000 в растворе 0,5-0,6 М NaCl. В качестве инактиванта вакцина содержит афицинальный формалин, а в качестве адъюванта афицинальную ГОА, при этом компоненты входят в состав вакцины в следующем соотношении (об.%): антиген аденовируса первого типа В-10 с инфекционным титром 6-7 lg ТЦД₅₀/мл, концентрированный 5 раз ПЭГ-6000 в растворе 0,5-0,6 М NaCl – 30-37, антиген вируса вирусной диареи штамма «Оригон» с инфекционным титром 7-8 lg ТЦД₅₀/мл, концентрированный 5 раз ПЭГ-6000 в растворе 0,5-0,6 М NaCl – 30-37, формалин 40% – 0,5-0,8, ГОА афицинальная 6,0% остальное. Вакцину вводят телятам внутримышечно двукратно с интервалом 13-16 дней в дозе 1,0 мл. Вакцина имеет высокую профилактическую активность. 4 табл.

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности к получению инактивированных вакцин против респираторно-кишечной патологии крупного рогатого скота, вызываемой вирусами адено- и вирусной диареи.

Вирусная диарея и аденовирусная инфекция крупного рогатого скота – остро протекающие, контагиозные вирусные болезни, главным образом, телят, характеризующиеся поражением органов респираторно-кишечного тракта. Болезни регистрируются во всех странах мира, в том числе и в России. Вирусы вызывают заболевания у крупного рогатого скота, поражая от 40-60 % животных и обуславливая в 20-30 % случаев вспышки респираторно-кишечных болезней. Как правило, данные вирусы вызывают заболевания в ассоциации в 80-85 % случаях, при этом смертность телят достигает 27-30 % (1).

Известна вакцина для профилактики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота, включающая антигены аденовируса КРС штамм В-10, который инактивировали димером этиленимином (ДЭИ) в конечной концентрации 0,1 % и в качестве адъюванта использовали аэросил (2).

Известны также вакцины для специфической профилактики вирусной диареи, включающие антигены вируса диареи КРС штаммы Оригон, С-24 V, Нью-Йорк, которые инактивировали формалином и в качестве адъюванта была использована гидроокись алюминия (3).

Вакцины обладают высокой эффективностью, однако они имеют ряд недостатков. Так, например, вакцины применяют раздельно, что связано с огромными затратами труда ветеринарных специалистов, многократным беспокойством животных, созданием у них стрессового состояния, что неблагоприятно отражается на иммунологической реактивности животных к прививке.

В задачу наших исследований входит получить вакцину, обеспечивающую создание длительного напряженного иммунитета в организме животного против аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС и не обладающую реактогенными свойствами.

Поставленная задача достигается тем, что инактивированная бивалентная вакцина против вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота включает в себя антигены аденовируса первого серотипа В-10 с инфекционным титром 6-7 lg ТЦД₅₀/мл, штамма «Оригон» вируса вирусной диареи с инфекционным титром 17-8 lg ТЦД ₅₀/мл, инактивированных формалином, концентрированных в 5 раз полиэтиленгликолем 6000 и депонированных на гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов (об. %):

антиген аденовируса КРС первого
типа В-10 с инфекционным титром
6-7 lg ТЦД 50/мл концентрированный в 5 раз;
10 % ПЭГ- 6000 в растворе 0,5-0,6 М NaCI	30-37
антиген вируса вирусной диареи КРС штамма «Оригон»
с инфекционным титром 7-8 lg. ТЦД50/мл;
концентрированный в 5 раз 8-9 % ПЭГ-6000
в растворе 0,5-0,6 М NaCI	30-37
формалин 40%	0,5-0,8
гидроокись алюминия афицинальная 6,0 %	остальное.

Пример

Для приготовления инактивированной бивалентной вакцины против вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота берут вируссодержащий материал аденовируса первого серотипа В-10 с инфекционным титром 6-7 lg ТЦД ₅₀/мл (Тканевых Цитопатических Доз), полученную вируссодержащую суспензию инактивируют формалином в конечной концентрации 0,2-0,3 % и концентрируют в 5 раз исходного объема полиэтиленгликолем 6000 в конечной концентрации 10,0 %. Далее берут антиген вируса вирусной диареи КРС штамм «Оригон», полученный из вируссодержащей суспензии с инфекционным титром 7-8 lg ТЦД ₅₀/мл, инактивируют формалином 0,2-0,3 % конечной концентрации при температуре 37-38°С в течение 72 часов при рН 7,2-7,4. Полученные антигены концентрируют полиэтиленгликолем (ПЭГ 6000) в конечной концентрации 8 % и ресуспендируют в 0,5-0,6 М NaCl, затем антигены смешивают в равных объёмах 1:1 и добавляют официнальный адъювант 6 % ГОА до 2-3 % конечной концентрации в полученной вакцине.

Конкретные примеры приготовления вакцины отражены в табл.1.

Для определения безвредности вакцины использовали два вида лабораторных животных – белых мышей весом 15-18 г и кроликов весом 2,5 кг. Вакцину вводили внутримышечно однократно в дозе 0,2 и 1 мл соответственно. В течение 10-дневного наблюдения вакцинированные животные оставались живыми, на месте введения вакцины не образовывалось некроза тканей. Таким образом, вакцина предложенного состава полностью безвредна для животных, данные представлены в таблице 3.

Испытание эффективности вакцины с различными соотношениями компонентов проводили на лабораторных крысах. Вакцину в указанных в табл. 1. концентрациях вводили животным двукратно с интервалом 14 дней, внутримышечно в дозе 0,2 мл. Формировали пять опытных групп. Вакцину каждой концентрации вводили 5-ти крысам. Первой группе вводили с минимальными значениями компонентов, второй группе – оптимальное, третьей – максимальное, четвертой меньше минимального и пятой – больше максимального.

Кровь для определения уровня специфических антител брали из сердца до иммунизации (фон) и через две недели после последней вакцинации. Титр специфических антител определяли в реакции нейтрализации на культуре клеток (РН). При этом уровни специфических антител при оптимальной и максимальной концентрациях компонентов существенно не отличались, а дальнейшее увеличение концентрации компонентов не приводило к увеличению уровней специфических антител. Использование для иммунизации вакцины в дозах меньше минимальных оказалось неэффективным, так как не вызывало выработку антител в титрах, обеспечивающих защиту против этих инфекций.(табл. 1)

Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных представлен в табл. 2 ( минимальное, оптимальное и максимальное).

Способ профилактики аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС с помощью предложенной вакцины заключается в следующем.

Иммунизацию крупного рогатого скота проводили по следующей схеме.

Три группы клинически здоровых телят, не содержащих в сыворотке крови специфических антител (по 5 голов в группе, всего 15 животных). Животным первой группы вводили инактивированную бивалентную вакцину против вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота внутримышечно дважды с интервалом 14 дней по 1 мл. Животным второй и третьей группы вводили в соответствии с утвержденными наставлениями по применению коммерческие моновакцины против аденовируса и вируса вирусной диареи внутримышечно по 10 мл двукратно с интервалом 14 дней. Через 14 дней после второй иммунизации от всех животных брали пробы крови из яремной вены в количестве 5-8 мл. Результаты представлены в табл. 3.

Активность вакцин по уровню антител в сыворотке крови телят к аденовирусу и вирусу ВД КРС представлены в табл. 4.

Таким образом, в крови животных иммунизированных предложенной вакциной, отмечался не только более высокий уровень специфических антител к вирусу вирусной диареи и аденовирусу крупного рогатого скота, но и удалось уменьшить дозу вакцины в десять раза, что, в свою очередь, обеспечивало защиту животных сразу против двух инфекций с меньшими трудозатратами.

Предложенную вакцину вводят животным внутримышечное двукратно с интервалом 13-16 дней в дозе 1 мл.

Высокая профилактическая активность предложенной вакцины по сравнению с известными вакцинами того же назначения была подтверждена испытаниями, проведенными в условиях животноводческих хозяйств, и обеспечивает длительный (не менее б месяцев) напряженный иммунитет, не обладает реактогенными свойствами.

Вакцина апробирована нами с положительным результатом с 2004-2007 гг. на кафедре ветеринарной вирусологии московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им К. И Скрябина и хозяйстве «ООО Аграрное» Орехово-Зуевского района.

Полученная вакцина позволит снизить экономический ущерб, причиняемый данными вирусами животноводству Российской Федерации, и найдет применение в неблагополучных хозяйствах.

Источники информации

1. Автореф. дисс. к.в.н. Курбанбекова З.Д. Эпизоотическая ситуация по респираторно-кишечным болезням молодняка крупного и мелкого рогатого скота в центральных районах Таджикистана. М.: – 2007 гг.- с. 9.

2. Дисс. к.б.н. Литвинов О.Б. Экспериментальные исследования по разработке инактивированной вакцины против аденовирусной инфекции крупного рогатого скота. М.: – 1984 гг.- с.39.

3. Книга. Сюрин В.Н. Вирусные болезни животных. М.-ВНИТИБП.-1998 гг.- с.139.

Формула изобретения

1. Инактивированная бивалентная вакцина против вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота, включающая антиген аденовируса первого серотипа В-10, инактивант, адъювант концентрированный ПЭГ-6000 в конечной концентрации 10%, отличающаяся тем, что вакцина дополнительно содержит антиген вируса вирусной диареи «Оригон», концентрированный 8-9% ПЭГ-6000 в растворе 0,5-0,6 М NaCl, в качестве инактиванта – афицинальный формалин, а в качестве адъюванта – афицинальная ГОА, при этом компоненты входят в состав вакцины в следующем соотношении, об.%:

антиген аденовируса первого типа В-10 с
инфекционным титром 6-7 lg ТЦД 50/мл,
концентрированный 5 раз ПЭГ-6000
в растворе 0,5-0,6 М NaCl	30-37
антиген вируса вирусной диареи штамма «Оригон»
с инфекционным титром 7-8 lg ТЦД 50/мл,
концентрированный 5 раз ПЭГ-6000 в растворе
0,5-0,6 M NaCl	30-37
афицинальный формалин	0,5-0,8
ГОА афицинальная	остальное

2. Способ профилактики аденовирусной инфекции и вирусной диареи КРС, включающий введение вакцины, охарактеризованной в п.1, которую вводят телятам внутримышечно двукратно с интервалом 13-16 дней в дозе 1,0 мл.