Патент на изобретение №2372763

(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ПРЕДПОСЕВНОЙ ОБРАБОТКИ СЕМЯН ГОРОХА

(57) Реферат:

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой средство для предпосевной обработки семян гороха. Средство содержит салициловую кислоту, лектины фасоли и источник магния при следующем соотношении компонентов, мас.%: салициловая кислота – 0,00001, сульфат магния MgSO₄ или хлорид магния MgCl₂ – 0,00001, лектины из семян фасоли – 0,0001, вода – 99,99988. Изобретение позволяет повысить всхожесть семян гороха, урожайность и устойчивость к болезням и вредителям. 7 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии, а именно к средствам для предпосевной обработки семян.

Предпосевная обработка семян осуществляется веществами, обладающими защитно-стимулирующим действием, повышающими иммунитет, способствующими увеличению ростовой активности растений, защите их от болезней и вредителей и в конечном итоге повышению урожайности.

Известен широкий спектр ростовых веществ и средств защиты растений от сорняков, вредителей и болезней. Значительная часть этих препаратов относится к категории химических соединений, загрязняющих окружающую среду и создающих опасность для здоровья человека и животных. Вместе с тем требования экологии приводят к необходимости создания препаратов, относящихся к категории биопрепаратов, использование которых в малых дозах было бы эффективно.

В качестве средства для предпосевной обработки семян известен препарат НАРЦИСС ВР, представляющий собой хитозан (50%), янтарная кислота (30%), глутаминовая кислота (80%), которое можно рассматривать как биопрепарат (Справочник пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации за 2004 год. Издательство «Агрорус», ООО»Агро 48», Липецк, стр.318) [1].

Норма расходования средства 1 л/т, он рекомендован для использования на рисе, пшенице, ячмене, подсолнечнике, огурцах.

5. С.667-670 [2].

Недостатком описанных выше препаратов является то, что они не действуют на бобовые культуры, в частности горох.

Задачей изобретения является повышение урожайности гороха.

Поставленная задача решается благодаря тому, что в известное средство, содержащее салициловую кислоту, согласно изобретению дополнительно вводят лектины фасоли и источник магния при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Предлагаемое средство относится к классу фитоиммуномодуляторов и способно заменить химические пестициды, тем самым увеличить получение безопасной экологически чистой сельскохозяйственной продукции.

Салициловая кислота (C₇Н₈О₃) – белый кристаллический порошок, трудно растворимый в холодной воде.

Устойчивость растений к вирусам можно повысить, обрабатывая растения салициловой кислотой. В ответ на обработку начинается синтез PR-белков (PR-1- белки, PR-2 белки или b-1,3-глюказаны, PR-3 – белки). PR-1 белки токсичны для многих грибов. PR-2 белки b-1,3-глюканазами, расщепляющие глюканы клеточной стенки растений и некоторых грибов на более короткие фрагменты. Фрагменты глюканов также способны вызывать иммунную реакцию растительных клеток. PR-3 класс белков – хитиназы, которые расщепляют хитин клеточных стенок грибов. Салициловая кислота вызывает синтез ФАЛ (фенилаланин-аммиаклиазы) и тем самым усиливает собственный биосинтез. Кроме того, салициловая кислота может связываться с некоторыми Fe-содержащими белками (например, с каталазой). При взаимодействии с салицилатом активность каталазы падает, концентрация перекиси водорода и других активных форм кислорода растет. К этому же эффекту приводит взаимодействие салицилата с аскорбат-оксидазой. Повышение концентрации активных форм кислорода стимулирует образование новых порций салициловой кислоты, что приводит к усилению эффекта.

Источник магния – сульфат магния MgSO₄ представляет собой бесцветные ромбические кристаллы, легко растворимые в воде.

Магний является антистрессовым микроэлементом, стабилизирует структуру рибосомного аппарата клеток и выполняет роль «носителя фосфата», входя в молекулу фитина, который используется в энергетическом обмене и как источник фосфорной кислоты в период прорастания, усиливая устойчивость растений.

Лектины из семян фасоли представляют собой легко растворимые кристаллы белого цвета белковой природы.

Они являются обязательными компонентами живых клеток растений, входящих в состав мембран и растворимой фазы.

Участие лектинов в защитных механизмах можно объяснить присутствием их в свободном и ассоциированном с клеточными стенками состояниях. Лектины участвовуют в обезвреживании патогенных вирусов, бактерий и грибов в проводящих тканях высших растений.

Взаимодействие лектинов с микроорганизмами способствует специфическому узнаванию. Патоген подвергается воздействию со стороны растения-хозяина и формирует реакцию устойчивости или продолжается его дальнейшее развитие – восприимчивости к болезни.

Методика выделения и очистки лектинов фасоли

Сухие семена фасоли измельчают на лабораторной мельнице и экстрагируют лектины 0,9 М NaCl в течение 3 часов в соотношении 1:9 (1 часть муки из семян фасоли и 9 частей 0,9 М раствора NaCl).

Затем центрифугируют в следующих режимах: температура центрифугирования не должна превышать 3-4°С, скорость 4000 g в течение 20 минут.

Операцию повторяют 2 раза. Объединенные супернатанты доводят до рН 4.0 4Н НСl и вновь центрифугируют (4000 g, 15 минут). Супернатант нейтрализуют до рН 7.0. После нейтрализации супернатанта осадок удаляют центрифугированием при 6000 g в течение 20 минут. Белок высаливают 70% сульфатом аммония до полного выпадения белка. Неочищенный белок собирают на фильтр и растворяют в десятикратном (по объему) количестве дистиллированной воды с последующим диализом в течение 48 ч при t 10°C против буферной смеси (0,1 М ацетатный буфер, рН 6.8). Очистку лектина проводят на колонке с Sephodex G-50, уравновешенной буферной смесью. Адсорбированный лектин элюируют 0,1 М раствором глюкозы в 0,1 М ацетатном буфере (рН 6.8), с последующим осаждением 80% сульфатом аммония.

Далее проводят двухступенчатый диализ: 1 ступень – 24 ч при t 4°С против 0,1 М ацетатного буфера (рН 6.8); 2 ступень – 24 ч при t 4°С против дистиллированной воды. Сформированные кристаллы лектина растворяют в воде (подкисленной 0,1Н НСl до рН 4,0), раствор нейтрализуют до рН 6.7-7.0 и лиофильно высушивают.

Эффективность данного средства проверяют на биологическую активность, которую осуществляют с помощью измерения величины пероксидазной активности, являющейся экспресс-методом ускоренной оценки препаратов

Ускоренная оценка индуцированной болезнеустойчивости осуществляется с помощью измерения пероксидазной активности методом окисления о-дианизидина в присутствии перекиси водорода в концентрации и измерения экстинции раствора на фотоэлектроколориметре КФК-2 при длине волны 590 нм.

Активность фермента вычисляют по найденной скорости реакции и выражают в относительных единицах на 1 г сырой ткани за 1 минуту.

Испытываемые индукторы болезнеустойчивости отбирают по пероксидазозависимому иммунитету, определяемому по активности пероксидазы.

Агенты, увеличивающие суммарную активность пероксидазы, способствуют повышению сопротивляемости растений к патогенам.

Сущность использования предлагаемого средства заключается в том, что семена перед посевом замачивают в водном растворе предлагаемого средства в течение 2-3 часов и опрыскивают вегетирующие растения в период бутонизации и цветения.

Пример 1-4.

Проводили испытания известного средства салициловой кислоты, компонентов предлагаемого средства (сульфат магния MgSO₄ – 0,00001 мас.% и лектины из семян фасоли – 0,0001 мас.%) и непосредственно предлагаемого средства. Для этого использовали здоровые и инфицированные Fusarium oxysporum семена гороха. Перед посевом семена замачивают в предлагаемом средстве на 2 часа.

Активность пероксидазы в 10-дневных проростках гороха при обработке семян салициловой кислотой имеет тенденцию к повышению в меньшей концентрации (0,00001 мас.%) Так, активность в здоровых семенах при обработке салициловой кислотой в концентрации 0,0001 мас.% составляет 212,0 у.е., а в концентрации 0,00001 мас.% – 292,3 у.е. У инфицированных семян показатели составляют 261,6 и 302,7 у.е. соответственно. Именно поэтому концентрация салициловой кислоты 0,00001 мас.% оптимальна для создания комплексного средства (табл.1).

Замачивание семян гороха в том же режиме в растворе сульфата магния в концентрации 0,00001 мас.% в сравнении с салициловой кислотой показало наибольшее повышение активности фермента. У здоровых семян активность фермента составляет 301,4 у.е. под влиянием сульфата магния и 292,3 у.е. под влиянием салициловой кислоты. У инфицированных семян показатели активности составляют 306,6 и 302,7 у.е. соответственно (табл.2).

Таким образом, по активности исследуемого фермента сульфат магния показывает более высокие результаты в сравнении с салициловой кислотой.

Показатели активности пероксидазы снимали в 10-дневных проростках гороха под влиянием пектинов из семян фасоли в концентрациях 0,0001 мас.% в сравнении с влиянием салициловой кислоты 0,00001 мас.%. Наибольшая активность выявлена в образце, обработанном пектинами, как в здоровых семенах (297,4 у.е.), так и при инфицировании (369,6 у.е.). При обработке салициловой кислотой активность составляет 292,3 и 302,7 соответственно. Таким образом, активность фермента выше под влиянием пектинов из семян фасоли по сравнению с салициловой кислотой (табл.3).

При обработке семян гороха салициловой кислотой и предлагаемым среством обнаружено следующее повышение активности фермента: у здоровых семян под влиянием салициловой кислоты 293,3 у.е., под влиянием предлагаемого средства 347, 5 у.е. У инфицированных семян активность составляет 302,7 и 392,4 у.е. соответственно (табл.4).

Выявлено положительное влияние на повышение активности пероксидазы в 10-дневных проростках гороха комплексного средства по сравнению с салициловой кислотой.

Пример 5-7.

Далее проводили испытания предлагаемого средства в полевых условиях. Семена гороха перед посевом замочили на 2 часа в известном средстве – салициловой кислоте и предлагаемом средстве. В результате обработки увеличивается энергия прорастания семян (с 78,1 до 87,0%), всхожесть семян лабораторная (с 89,4 до 93,2%) и полевая (с 89,0 до 91,6%). Зараженность семян снижается с 29,4 до 19,0% (табл.5).

Таким образом, предлагаемое средство повышает посевные качества семян и снижает зараженность семян гороха.

Под влиянием предлагаемого препарата снижается поражение растений гороха болезнями и вредителями. Так, развитие корневых гнилей снижается с 38,6 до 35,0%, развитие аскохитоза с 59,2 до 52,8%, количество погрызов долгоносиком на 1 растении с 27,4 до 16,9, снижается также поврежденность семян плодожоркой с 22,2 до 15,5% (табл.6).

Таким образом, под влиянием предлагаемого средства снижается поражение растений гороха корневыми гнилями, снижается развитие аскохитоза, снижается поврежденность долгоносиком и плодожоркой.

При обработке семян гороха салициловой кислотой и предлагаемым средством происходит увеличение количества бобов на одном растении (1,90 до 2,30 шт.; количества семян на одном растении с 5,49 до 6,03 шт.; веса семян на одном растении с 36,6 до 42,0 и урожайности с 10,2 до 12,0 ц/га (табл.7).

Предлагаемый препарат показывает преимущественное повышение урожайности гороха в сравнении с салициловой кислотой.

Таблица 7
Влияние биопрепаратов на урожайность гороха сорта Вега
Препарат	Кол-во бобов на 1 растение, шт.	Кол-во семян на 1 растение, шт.	Вес семян на 1 растении, г	Урожайность, ц/га
Салициловая кислота 0,00001 мас.%	1,90	5,49	36,6	10,2
Предлагаемое средство 0,0001 мас.%	2,30	6,03	42,0	12,0

Достоверно показано увеличение ростовых показателей, урожайности, устойчивости к болезням и вредителям. Установлено, что предлагаемый препарат увеличивает энергию прорастания, всхожесть семян, уменьшает зараженность семян болезнями и вредителями, повышает урожайность гороха.

Преимущества данного средства обусловлены способностью индуцировать болезнеустойчивость растений гороха за счет компонентов сигнальной системы устойчивости.

Механизм действия предлагаемого средства заключается в том, что оно вызывает экспрессию генов, ответственных за иммунитет, и активизирует ферменты и реакции, необходимые для синтеза хлорофилла и световой реакции фотосинтеза.

Таким образом, использование предлагаемого средства позволяет увеличить ростовые показатели, урожайность, устойчивость к болезням и вредителям.

Формула изобретения

Средство для предпосевной обработки семян гороха, содержащее салициловую кислоту, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит лектины фасоли и источник магния при следующем соотношении компонентов, мас.%: