Патент на изобретение №2371191

(54) БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЙ СТИМУЛЯТОР И СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ВТОРИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТОВ У ТЕЛЯТ С ЕГО ПРИМЕНЕНИЕМ

(57) Реферат:

Изобретение относится к ветеринарной медицине, касается биологически активного стимулятора и способа коррекции вторичных иммунодефицитов с его применением. Способ включает подкожную инъекцию неспецифического иммуноглобулина и дополнительное применение внутрь спиртовой настойки из измельченной растительной смеси травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой, взятых в равных количествах в виде водного раствора 7-8% концентрации в дозе 1,5-2,0 мл/кг живой массы животного в течение 15 дней с интервалом в 24 часа. Биологически активный стимулятор оказывает благоприятное воздействие на все органы и системы организма животных, регулирует обменные процессы и повышает резистентность организма (активация В – и Т-систем, фагоцитоза), что обеспечивает коррекцию вторичных иммунодефицитов до уровня физиологической нормы. Основные свойства препарата: естественное происхождение, способность легко метаболизироваться и выводиться из организма, высокую совместимость с другими лекарственными средствами, отсутствие сенсибилизации и индуцирования иммунопатологических реакций. 2 н.п. ф-лы, 7 табл.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, касается средства растительного происхождения, обладающего иммуностимулирующим действием, и может быть использовано как основной или дополнительный компонент стимуляции иммунной системы молодняка сельскохозяйственных животных, преимущественно телят, для повышения общей резистентности и иммунологической реактивности к действию различных повреждающих агентов.

Применение иммуномодулирующих препаратов направлено преимущественно на коррекцию вторичных иммунодефицитов, которые проявляются в частых, рецидивирующих, трудно поддающихся лечению инфекционно-воспалительных заболеваний различной локализации. Для молодняка крупного рогатого скота первые дни жизни и начало выпойки сборного молока (в 20-дневном возрасте) являются критическими иммунологическими периодами, что связано с физиологическими особенностями организма, в частности, иммунодефицитным состоянием организма телят до первой выпойки молозива, а в 20-дневном возрасте – с расходованием молозивных защитных белков при недостаточности собственного иммунопоэза, а также стрессами из-за смены кормления и перехода от индивидуального к групповому содержанию. Так, наши исследования, проведенные в хозяйствах Нижегородской области, длительно неблагополучных по желудочно-кишечным и респираторным инфекциям, выявили иммунодефицитные состояния у клинически здоровых телят как 3-5-, так и 20-дневного возраста (таблицы 1 и 2).

Таблица 1
Иммунный статус телят 3-5-дневного возраста в условиях стационарного неблагополучия
Показатели	Клинически здоровые телята неблагополучного хозяйства	Клинически здоровые телята из благополучного хозяйства
Т-лимфоциты,%	18,2±0,8	19,8±1,0
В-лимфоциты, %	3,1±0,2	5,2±0,3
Функциональная активность нейтрофилов крови, %:
спонтанный тест	3,2±0,2	3,8±0,4
индуцированный тест	6,4±0,4	8,4±0,7
Бактерицидная активность сыворотки крови, %	39,4±3,0	52,1±2,4
Лизоцимная активность сыворотки крови, %	1,5±0,2	2,5±0,2
Иммуноглобулины, мгл
G	11,9±0,1	13,4±0,2
М	1,1±0,02	1,8±0,05

Таблица 2
Иммунный статус телят 20-дневного возраста в условиях стационарного неблагополучия
Показатели	Клинически здоровые телята неблагополучного хозяйства	Клинически здоровые телята благополучного хозяйства
Т-лимфоциты, %	21,7±1,0	32,9±1,8
В-лимфоциты, %	5,7±0,4	8,0±0, 6
Функциональная активность нейтрофилов крови, %:
– спонтанный тест	4,8±0,3	7,1±0,5
– индуцированный тест	16,8±1,4	28,4±1,2
Бактерицидная активность сыворотки крови, %	61,4±1,2	86,5±2,0
Лизоцимная активность сыворотки крови,%	2,2±0,2	3,6±0,2
Иммуноглобулины, мг/мл
G	12,0±0,3	18,0±1,5
М	1,0±0,01	1,4±0,02

В условиях хозяйств, неблагополучных по болезням телят, у клинически здорового молодняка 3-5-дневного возраста выявлялись иммунодефицитные состояния, характеризовавшиеся снижением относительного содержания В-лимфоцитов на 67,7%, уровней иммуноглобулинов G и М на 12,6 и 63,6% соответственно, функциональной активности нейтрофилов крови (в спонтанном тесте – на 18,8%, в индуцированном тесте – на 31,3%), бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови на 39,2 и 50,0% соответственно (таблица 1), а у клинически здорового молодняка 20-дневного возраста – иммунодефицитные состояния, характеризовавщиеся снижением относительного содержания В-лимфоцитов на 40,4%, популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов на 51,6% с нарушением их соотношения, уровня иммуноглобулинов G и М на 50 и 40% соответственно, функциональной активности нейтрофилов крови (в спонтанном тесте – на 47,9%, в индуцированном тесте на 69%), бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови на 40,9 и 63,6% соответственно.

Известен ряд неспецифических стимуляторов иммунитета (синтетического, бактериального, растительного происхождения), различающихся по структуре и механизмам действия. Из известных препаратов растительного происхождения иммуностимулирующие свойства наиболее изучены у препаратов элеутерококка, пустырника, препаратов из семян тыквы, травы эхинацеи пурпурной, левзеи сафлоровидной. Однако данные об иммунотропном действии этих препаратов отличаются противоречивостью /1, 2, 3, 4, 5, 6/.

Известен также препарат растительного происхождения тетраиммунофит – фитоэкстракционный препарат из травы зверобоя, листа сены, плодов шиповника и корнеплодов свеклы, обладающий иммуностимулирующим действием на гуморальный иммунный ответ /7/.

Наиболее близким к заявленному является средство, обладающее иммуностимулирующим действием, представляющее собой водный экстракт из трав зверобоя продырявленного, тимьяна ползучего, мяты перечной и мать-и-мачехи, взятых в равных количествах /8/.

Технический результат заключается в создании нового лекарственного средства с расширенным спектром действия, обладающего иммуномодулирующим, противовоспалительным и антимикробным действием, что обеспечивает стимуляцию защитных сил организма, на основе фармакологически активных веществ из растений.

Получение указанного результата достигается использованием настойки из измельченной растительной смеси равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой, которую заливают этиловым спиртом 70% концентрации при соотношении 1:10, выдерживают в темном месте при температуре 15-20°С в течение 7 суток, процеживают, отжимая сырье, и фильтруют.

Используемые ингредиенты лекарственного средства широко применяются в фитотерапии. Обоснованием для выбора компонентов композиции послужили данные о фармакологических свойствах и химическом составе лекарственного растительного сырья. Каждый компонент содержит биологически активные вещества, одновременно активизирующие внутриклеточный метаболизм и обмен веществ, а также обладающие выраженным антимикробным действием на патогенную и условно патогенную микрофлору.

Трава и соцветия эхинацеи пурпурной обладают иммуномодулирующей активностью, подавляют активность гиалуронидазы – фермента, способствующего повышению проницаемости для вирусов и микробов, увеличивают противомикробную активность лейкоцитов, макрофагов и нейтрофилов крови и повышают синтез защитных антител и эндогенного интерферона.

Трава и соцветия мать-и-мачехи обладают выраженными бактериостатическими свойствами и антиоксидантной активностью.

Трава гармалы обыкновенной обладает выраженной антимикробной активностью, подтвержденной фармакологическими исследованиями.

Корни солодки голой обладают антиоксидантной активностью, гепатозащитным действием, способствуют восстановлению угнетенного иммунного статуса.

Химический состав лекарственного средства представлен комплексом биологически активных веществ, обеспечивающих его высокий фармакотерапевтический эффект. Доминирующими биологически активными веществами являются: фенольные соединения, флавоноиды, полисахариды, алкалоиды, дубильные вещества, витамины, микроэлементы, главными из которых можно считать цинк, селен, медь и железо.

Флавоноиды (содержат все компоненты) ингибируют фермент катехол-орто-метилтрансферазу и обеспечивают адаптационно-трофическую функцию организма за счет адренопролонгирующего эффекта. Флавоноиды обладают Р-витаминной (капилляроукрепляющей) активностью. В суммарном противовоспалительном эффекте флавоноидов имеет значение их непосредственное действие на клеточные и тканевые мембраны – снижение их проницаемости, уплотнение мембран лизосом, ингибирование гиалуронидазы, антагонистическое действие по отношению к медиаторам воспаления /8/.

Полисахариды (содержат все компоненты) оказывают противовоспалительное, иммунокорригирующее действие. Они стимулируют неспецифический иммунитет и фагоцитоз, деятельность макрофагов и нейтрофилов, а также бактерицидную функцию клеток.

Фенольные соединения (содержат все компоненты) оказывают противомикробное действие, механизм которого обусловлен их способностью сорбироваться компонентами цитоплазматической мембраны бактерий, образовывать прочные водородные связи с белками и повреждать мембрану, в частности повышая ее проницаемость для ионов (прежде всего, калия) и важных метаболитов, теряемых клеткой, а также для воды, поступающей извне и способствующей лизису.

78% от общего количества алкалоидов, содержащихся в траве гармалы обыкновенной, составляет пеганин. Фармакологические исследования показали, что 1%-ный и 10%-ный настои травы гармалы обыкновенной обладают высокой противостафилококковой активностью, а 0,25%-ый раствор пеганина – высокой антимикробной активностью.

Дубильные вещества (солодка голая – до 9,46%, мать-и-мачеха – не менее 8,0%), проявляя мембраностабилизирующий эффект,

восстанавливают процессы репарации в гепатоцитах и улучшают работу антиоксидантной системы печени.

Витамины (витамин С – трава и соцветия мать-и-мачехи, эхинацея пурпурная; витамин Е – солодка голая, витамин А – эхинацея пурпурная) участвуют во всех процессах обмена веществ, повышают устойчивость организма к заболеваниям, оказывают противовоспалительное действие, способствуют дезинтоксикации организма.

Микроэлемент цинк (солодка голая – 0,33 мкг/г, гармала обыкновенная – 0,78 мкг/г) участвует в организме в иммунных процессах, селен (солодка голая – 12,14 мкг/г, гармала обыкновенная – 1,0 мкг/г, мать-и-мачеха – 22,9 мкг/г) является мощным антиоксидантом, железо (эхинацея пурпурная – 48 мг/ 100 г, гармала обыкновенная – 0,14 мг/г, солодка голая – 0,7 мг/г) – основным структурным компонентом гемоглобина крови и гемсодержащих ферментов, а также в комплексе с кобальтом (солодка голая – 0,03 мкг/г, мать-и-мачеха – 4,0 мкг/г) оказывает стимулирующее влияние на иммуногенез при вирусных инфекциях, медь (мать-и-мачеха – 43,3 мкг/г, солодка голая – 0,2 мкг/г) повышает функциональную активность лейкоцитов, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови.

Высокая эффективность лекарственного средства достигается благодаря сочетанию целого комплекса биологически активных веществ, вследствие чего наблюдается взаимное усиление полезных фармакологических свойств каждого отдельного компонента. Так, комбинация витаминов А, С и цинка стимулирует синтез антител, сочетание флавоноидов и дубильных веществ обеспечивает гепатозащитное действие, а сочетание флавоноидов и фенологликозидов усиливает детоксикационную функцию печени.

Настойка из измельченной растительной смеси травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой готовится фармакопейным способом в соотношении сырья к извлекателю 1:10. В качестве извлекателя используют этиловый спирт концентрацией 70%. Лекарственное сырье измельчают до частиц размером 1-3 мм, смешивают в равных количествах, навеску сырья помещают в стеклянный сосуд, добавляют расчетное количество этилового спирта концентрацией 70%, выдерживают 7 суток в темном месте при температуре 15-20°С. Затем спиртовую настойку процеживают через холст или два слоя марли, отжимая сырье, фильтруют.

Пример: в стеклянный сосуд поместили 500 г лекарственного сырья (равные количества из травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки), добавили 5,0 л этилового спирта концентрацией 70%, поставили в темное место и выдерживали при температуре 15-20°С в течение 7 суток, после чего процедили через холст, отжимая сырье, и профильтровали.

Для коррекции вторичных иммунодефицитов у телят на фоне неспецифической иммунизации применяют биологически активный стимулятор, представляющий собой спиртовую настойку из измельченной растительной смеси травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой, взятых в равных количествах.

Способ коррекции вторичных иммунодефицитов у телят с применением биологически активного стимулятора, представляющего собой спиртовую настойку из измельченной растительной смеси травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой, взятых в равных количествах, на фоне неспецифической иммунизации осуществляется следующим образом.

70% спиртовую настойку из измельченной растительной смеси травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой в виде 7-8% водного раствора, приготовленного на кипяченой охлажденной воде, применяют внутрь в дозе 1,5-2,0 мл /кг живой массы животного с интервалом в 24 часа в течение 15 дней в дополнение к подкожной инъекции неспецифического иммуноглобулина в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Стимулирующее влияние биологически активного стимулятора в соответствии с изобретением на иммунологический статус новорожденных телят изучали в хозяйстве, длительно неблагополучном по болезням телят (заболеваемость 60-70%, смертность – 20-30%). В условиях неполноценности (дефицит макро- и микроэлементов) кормления коров-матерей (зимний стойловый период) по принципу аналогов с учетом клинико-физиологического состояния, породы и массы тела по принципу аналогов формировали 2 группы новорожденных телят живой массой при рождении 28-30 кг для опыта и контроля. Телятам первой группы (опытной – 12 голов) применяли внутрь биологически активный стимулятор в виде водного раствора 7% концентрации в дозе 2,0 мл/кг массы животного в течение 15 дней с интервалом в 24 часа. Телята контрольной группы (12 голов) препарата не получали. Параметры иммунологического статуса телят изучали на 3, 10, 20 и 30 сутки по общепринятым в биологии современным тестам. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3
Иммунобиологические показатели крови телят.
	Возраст, сут.
Показатели	3	10	20	30
Т – лимфоциты, %
В-лимфоциты, %
Бактерицидная активность, %
Лизоцимная активность, %
Иммуноглобулины, мг/мл G
М
Примечание: в числителе – показатели подопытных животных, в знаменателе – контрольных

При анализе иммунобиологических показателей (таблица 3) подопытных и контрольных телят установили, что в возрасте 3 суток различия практически отсутствовали или были незначительными. У животных опытной группы к 10-дневному возрасту происходило повышение основных показателей клеточного и гуморального иммунитета, которое продолжилось до 30-дневного возраста. Важное практическое значение имело увеличение количества иммуноглобулинов в сыворотке крови подопытных телят, что свидетельствовало о лучшей усвояемости новорожденными молозивных и более раннем начале синтеза собственных иммуноглобулинов.

Пример 2. Эффективность способа коррекции вторичных иммунодефицитов с применением биологически активного стимулятора в соответствии с изобретением на фоне подкожной инъекции неспецифического иммуноглобулина в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней изучали в условиях хозяйства, стационарно неблагополучного по желудочно-кишечным болезням телят, обусловленными воздействием на организм ассоциаций вирусов, патогенной и условно патогенной микрофлоры на фоне нарушения условий содержания и кормления стельных коров и телят. Острые желудочно-кишечные расстройства у молодняка выявляли в 2-3-дневном возрасте. У больных отмечали урежение частоты пульса и дыхания, понижение температуры тела, западение орбиты глаз, синюшность видимых слизистых оболочек, взъерошенность и тусклость шерсти, профузный понос. Заболеваемость – 60-70%, смертность – 25-30%. По принципу аналогов подбирали клинически здоровых телят 1-3-дневного возраста, которых распределяли на четыре группы по 15 голов в каждой – три группы опытные, одна группа – контрольная. Телятам первой группы подкожно инъецировали неспецифический иммуноглобулин в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней и дополнительно применяли внутрь биологически активный стимулятор, представляющий собой спиртовую настойку из измельченной растительной смеси травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой, взятых в равных количествах, в виде 8% водного раствора в дозе 1,5 мл/ кг массы животного в течение 15 дней с интервалом в 24 часа (предлагаемый способ). Телятам второй группы подкожно инъецировали неспецифический иммуноглобулин в дозе 1,0 мл/кг живой массы животного трехкратно с интервалом в 5 дней (способ-прототип). Телятам третьей группы подкожно инъецировали сыворотку реконвалесцентов в дозе 20,0 мл в течение 9 дней с интервалом в 48 часов (базовый способ). Телята четвертой группы препаратов не получали. За всеми животными наблюдали в течение 30 суток, регистрируя все случаи заболевания, характер их течения и эффективность лечения. Естественную резистентность и иммунный статус оценивали, как в примере 1. Результаты представлены в таблицах 4 и 5.

В таблице 4A представлена сравнительная эффективность предлагаемого и известных способ коррекции вторичных иммунодефицитов.

Как видно из таблицы 4, во всех опытных группах проявилась тенденция к нормализации иммунобиологических показателей. Более выраженные изменения нормализующего характера установлены в первой группе.

Таблица 4
Эффективность способа коррекции вторичных иммунодефицитов с применением биологически активного стимулятора
	Способ коррекции вторичных иммунодефицитов
подкожно неспецифический иммуноглобулин	подкожно сыворотка крови животных-реконвалесцентов	без применения препаратов
дополнительно внутрь настойка
Показатели
Т-лимфоциты, %
В-лимфоциты, %
Бактерицидная активность, %
Лизоцимная активность, %
Иммуноглобулины, мг/мл
G
М
Примечание: в числителе – показатели до начала опыта, в знаменателе – через 5 дней после окончания опыта

Таблица 4A
Сравнительная эффективность предлагаемого и известных способов коррекции вторичных иммунодефицитов
Показатели	Способ коррекции вторичных иммунодефицитов
подкожно неспецифический иммуноглобулин	подкожно сыворотка крови животных-реконвалесцентов	без применения препаратов
дополнительно внутрь настойка
Заболело, голов	1	2	2	3
Форма переболевания легкая тяжелая	1	2	2	2 1
Профилактическая эффективность, %	93,3	86,7	86,7	80,0
Продолжительность болезни, дней	4	5-6	6-6,5	7

Пример 3. Эффективность способа коррекции вторичных иммунодефицитов с применением биологически активного стимулятора в соответствии с изобретением на фоне подкожной инъекции неспецифического иммуноглобулина в дозе 1,0 мл трехкратно с интервалом в 5 дней изучали в условиях хозяйства, стационарно неблагополучного по респираторным болезням телят вирусно-бактериальной этиологии с заболеваемостью до 60-80%. Этиологическая роль вирусов инфекционного ринотрахеита (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3) и вирусной диареи – болезни слизистых (ВД-БС) подтвердили выделением в сыворотках телят вируснейтрализующих антител к этим вирусам в 57,6, 72,4 и 75,5% случаев соответственно. Бактериальная микрофлора была представлена стрептококками, сальмонеллами и протеями. Иммунологический статус характеризовался снижением на 10-12% относительного содержания В-лимфоцитов, популяций и субпопуляций Т-лимфоцитов с нарушением их соотношений, функциональной активности нейтрофилов, снижением уровня иммуноглобулинов G и М, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови. По принципу аналогов подбирали клинически здоровых телят 10-15-дневного возраста, которых распределяли на четыре группы. Эффективность оценивали по иммунобиологическим и клиническим показателям (таблицы 5 и 6).

Таблица 5
Иммунобиологические показатели у телят после курса лечебно-профилактического воздействия для коррекции вторичных иммунодефицитов
Показатели	Способ лечебно-профилактического воздействия
подкожно неспецифический иммуноглобулин	подкожно сыворотка крови животных-реконвалесценов	без применения препаратов
дополнительно внутрь настойка
Функциональная активность нейтрофилов крови по НСТ-тесту, %:
спонтанному
индуцированному
Бактерицидная активность, %
Лизоцимная активность, %
Иммуноглобулины, мг/мл:
IgG
IgM
Примечание: в числителе – показатели до начала опыта, в знаменателе – через 5 дней после окончания опыта

Таблица 6
Сравнительная эффективность предлагаемого и известных способов коррекции иммунодефицитов
Показатели	Способ коррекции вторичных иммунодефицитов
подкожно неспецифический иммуноглобулин	подкожно сыворотка крови животных-реконвалесцентов n=16	без применения препаратов n=15
дополнительно внутрь настойка n=16	n=15
Заболело, гол.	1	2	2	3
Форма переболевания,
легкая	1	2	2	2
тяжелая				1
Эффективность, %	93,8	86,7	87,5	80,0
Продолжительность болезни, дней	–
3-4	5-6	6-7	7-8
Примечание: в числителе – показатели до начала опыта, в знаменателе -показатели после окончания опыта

Коррекция иммунодефицитных состояний до уровня физиологической нормы (таблица 4) профилактировала развитие респираторной патологии у телят (таблица 5).

Проведенные нами исследования показали, что биологически активный стимулятор, представляющий собой спиртовую настойку из измельченной растительной смеси травы и соцветий эхинацеи пурпурной, мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой, взятых в равных количествах, обладает иммуностимулирующей активностью, которая может быть использована для коррекции вторичных иммунодефицитов и стимуляции естественной резистентности при инфекционных заболеваниях, патогенетически связанных с недостаточностью иммунной системы. Эффективность заявленного биологически активного стимулятора обеспечивается наличием в его составе веществ, повышающих функциональную активность антиоксидантной и иммунной систем, в частности, макрофагальных клеток. Средство является нетоксичным, содержит биодоступные полезные биологически активные вещества, включающие, например, эфирное масло, флавоноиды, картиноиды, фитостерин, сапонины, обладает экологической чистотой.

Источники информации

7.

2.

5.

4.

4.

3.

8. RU 22501101 C1, 2005.

Формула изобретения

1. Биологически активный стимулятор, представляющий собой спиртовую настойку растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют смесь равных количеств травы и соцветий эхинацеи пурпурной и мать-и-мачехи, травы гармалы обыкновенной и корней солодки голой, растительное сырье заливают этиловым спиртом 70% концентрации при соотношении 1:10, выдерживают в темном месте при температуре 15-20°С в течение 7 сут, процеживают, отжимая сырье, и фильтруют.

2. Способ коррекции вторичных иммунодефицитов у телят, включающий подкожную инъекцию неспецифического иммуноглобулина, отличающийся тем, что дополнительно внутрь применяют биологически активный стимулятор по п.1 в виде водного раствора 7-8% концентрации в дозе 1,5-2,0 мл/кг живой массы животного в течение 15 дней с интервалом в 24 ч.