Патент на изобретение №2371188

(54) СПОСОБ БИОСТИМУЛЯЦИИ ОРГАНИЗМА СОБАК

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ заключается в том, что вводят мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты, взятые после нормальных родов. При этом осуществляют эндолимфатическое введение клеток путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,075-0,20×10⁶ клеток/кг веса вдоль позвоночника или лапы одномоментно 1-2 раза в год. Способ позволяет улучшить общее состояние животного, повышает его активность, нормализует обменные процессы.

Изобретение относится к ветеринарии и может использоваться как основной метод стимуляции и оздоровления организма собаки со сниженной резистентностью к действию различных повреждающих агентов, а также при необходимости повышения работоспособности, активности и способности переносить повышенные стрессовые нагрузки. Кроме того, изобретение может быть использовано для увеличения продолжительности жизни собаки и замедления наступления болезненных состояний, связанных с увеличением возраста.

Известны способы воздействия на организм животного малоинтенсивной микроволновой радиацией, которая позволяет изменить функциональное состояние организма, оцениваемое по генетическим, биохимическим, иммунологическим, поведенческим и другим показателям организма (авт. св. СССР 1427303, 1068129, пат. РФ 2037154).

Известны различные способы замедления старения, основанные на применении антиоксидантов, иммуномодуляторов, гормонов, метаболических модуляторов (Ann. N.Y. Acad. Sci. 2002. vol.959).

Согласно современным представлениям в основе старения лежит наступающая с возрастом потеря соматическими клетками организма животного, в том числе и собаки, способности к репликации и сопутствующее этому изменение профиля экспрессии генов в стареющих клетках, что ведет к нарушению их функций. Наступающее с возрастом накопление подобных клеток в органах и тканях собаки формирует основу проявления болезней и патологических состояний, характерных для стареющего организма.

В соответствии с этими представлениями современные способы лекарственного увеличения продолжительности жизни воздействуют на внутриклеточный генетический аппарат клеток. Таковы, например, способы ингибирования фермента поли(АДФ-рибоза) полимеразы (пат. US 5874444) или активации фермента теломеразы (заявка WO 0031238). Общим недостатком способов активного лекарственного воздействия на генетический аппарат стареющей клетки является опасность непредсказуемых побочных эффектов.

Для биостимуляции людей используют внутрикожное или внутривенное введение фетальных клеток человека, полученных из абортного материала, а также инъекции клеток фетусов животных (овец, свиней и т.п.). Последнее широко используется в элитных клиниках Швейцарии. Кроме того, людям вводят различные экстракты плаценты.

В настоящее время отсутствуют какие-либо способы, которые позволяли бы эффективно замедлить наступление болезненных состояний, связанных с увеличением возраста животных. В связи с этим отсутствует возможность принять какое-либо известное техническое решение за прототип настоящего изобретения.

Наиболее близким способом биостимуляции организма собаки и замедления наступления болезненных состояний, связанных с увеличением возраста млекопитающего, является способ, который характеризуется тем, что в циркуляцию вводят агент, инактивирующий внеклеточную ДНК крови (пат РФ 2269357). В качестве такого агента использовали агент, разрушающий внеклеточную ДНК крови; агент, связывающий внеклеточную ДНК крови; фермент, изменяющий химическую структуру внеклеточной ДНК крови; агент, стимулирующий синтез или активность эндогенной дезоксирибонуклеазы, например стволовые клетки пуповинной крови человека (СКПК), трансфецированные in vitro кДНК гена Дезоксиирибонуклеазы 1 человека, или агент, стимулирующий синтез антител, связывающих внеклеточную ДНК крови.

Цель данного изобретения – создание эффективного способа биостимуляции организма собаки

Поставленная задача достигается за счет использования способа биостимуляции организма собаки, заключающегося во введении стимулирующего агента, в качестве которого используют мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты, взятых после нормальных родов, при этом осуществляют эндолимфотическое введение клеток путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,075-0,20×10⁶ клеток/кг веса вдоль позвоночника или лапы одномоментно 1-2 раза в год.

Мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты были получены в соответствии со стандартной методикой следующим образом. Образцы пуповины или плаценты человека собирали после нормальных родов на 39-40 неделе гестации. Вены пуповины и плаценты канюлировали и промывали сначала раствором Хенкса, а затем 0,1% раствором коллагеназы I типа, приготовленым на среде DMEM без сыворотки, и инкубировали при 37°С 30 мин. Затем сосуды вновь промывали раствором Хенкса, ткань подвергали непродолжительному мягкому механическому воздействию и собирали отделившиеся клетки. Полученные клетки осаждали центрифугированием. Осадок ресуспендировали в среде DMEM, содержащей 10% сыворотки, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базальнного фактора роста фибробластов (-FGF), переносили в культуральные чашки и культивировали до формирования монослоя, сменяя среду 2 раза в неделю. При достижении монослоя клетки пересевали в соотношении 1:3.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. Собаке проводят эндолимфотическое введение клеток путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,075-0,20×10⁶ клеток/кг веса вдоль позвоночника с двух сторон или лапы одномоментно 1-2 раза в год в зависимости от состояния собаки.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример сравнительный (прототип)

Использовали стволовые клетки пуповинной крови человека (СКПК).

В опыте использовали 10 безпородных крыс. В опытной группе 1 крысам, начиная с 25 месячного возраста, вводили интактные СКПК внутривенно ежемесячно до момента гибили животного. В опытной группе 2 вводили клетки путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,125×10⁶ клеток/кг веса крысы в лапы одномоментно 1 раз. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор. Продолжительность жизни крыс в контрольной группе (естественная продолжительность жизни) составила в среднем 28 месяцев. Продолжительность жизни крыс в опытной группе 1 составила 31 месяц, в опытной группе 2-35 месяцев.

Пример 1. Собака, восточно-европейская овчарка, кобель, возраст 9 лет, поступила в ветеринарную клинику с диагнозом: снижена активность обменных процессов, вялость, повышенная утомляемость, ухудшена подвижность задних конечностей. По показаниям назначено эндолимфатическое введение мезенхимальных стволовых клеток пуповины или плаценты человеческого эмбриона путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,125×10⁶ клеток/кг веса вдоль позвоночника с двух сторон одномоментно. Через 4 дня наблюдается улучшение подвижности задних конечностей, повышена общая активность, улучшился аппетит. Через 6 месяцев была проведена повторная процедура. Эндолимфотическое введение клеток осуществляли путем инъекции в задние лапы. После курса лечения состояние животного значительно улучшилось, возобновилась активность животного, шерсть гладкая, обменные процессы в норме.

Аналогично примеру 1 были проведены опыты на собаках с использованием физиологического раствора, содержащего 0,075×10⁶ и 0,20×10⁶ клеток/кг веса собаки. Получены положительные результаты.

Формула изобретения

Способ повышения активности обменных процессов у собак, заключающийся в введении стимулирующего агента, отличающийся тем, что в качестве стимулирующего агента используют мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты, взятые после нормальных родов, при этом осуществляют эндолимфотическое введение клеток путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,075-0,20·10⁶ клеток/кг веса вдоль позвоночника или лапы одномоментно 1-2 раза в год.