Патент на изобретение №2371186

(54) СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ТРАВМАТОЛОГО-ОРТОПЕДИЧЕСКИХ ПАЦИЕНТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КУЛЬТУРЫ АУТОЛОГИЧНЫХ ЛИМФОЦИТОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии, ортопедии, и может быть использовано в качестве профилактических мероприятий по предотвращению гнойно-воспалительных осложнений у пациентов травматолого-ортопедического профиля. Для этого накануне оперативного вмешательства из любой центральной или периферической вены пациента осуществляют забор цельной крови в объеме 10 мл в шприц, предварительно промытый гепарином. Полученную цельную кровь отстаивают в течение 100-140 минут, отбирают лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5-1,5 мл с последующим введением в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и 5 мл собственной сыворотки пациента. Полученную клеточную взвесь разливают по 2 мл в стерильные емкости и вводят в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов размещают в термостате и выдерживают при температуре 37°С в течение 72 часов. Затем полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугируют 3-5 раз по 10 минут со скоростью вращения 800-1200 об/мин, при этом после каждого центрифугирования надосадочную жидкость сливают и в каждую емкость добавляют по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования. По окончании центрифугирования клеточную массу аутологичных лимфоцитов забирают из всех емкостей в шприц, куда добавляют 10 мл физиологического раствора с последующим введением полученной массы внутривенно в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 секунд. Введение полученной таким образом клеточной массы проводят до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно, или через 2-3 дня после оперативного вмешательства. Также введение клеточной массы аутологичных лимфоцитов можно осуществить повторно через 7-14 дней после первоначального введения. Способ позволяет обеспечить усиление иммунной реактивности организма в послеоперационном периоде за счет увеличения количества лимфоцитов в крови. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии, ортопедии и реабилитации, к способам профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов, и может быть использовано для профилактики гнойно-воспалительных осложнений у пациентов в условиях хирургических, травматологических и других стационаров.

Известен способ лечения гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов, включающий забор крови пациента, выращивание лимфоцитов и внутривенное введение их пациенту (см. Г.А.Кесян и др. Ремоделирование защитных свойств организма при обширных оперативных вмешательствах в травматологии и ортопедии. Медицинский вестник Эребуни, Национальная академия наук Армении, Ереван, 2006 г., 3 (27), с.140-141).

Однако известный способ при своем использовании обладает следующими недостатками:

– не обеспечивает надежного лечения и профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов после перенесенной высокой хирургической агрессии,

– не обеспечивает достаточно благоприятное течение травматической болезни,

– не обеспечивает необходимого и достаточного увеличения количества лимфоцитов в крови пациента после перенесенной высокой хирургической агрессии,

– не достаточно обеспечивает повышение клеточного иммунитета,

– не достаточно обеспечивает у пациента необходимое повышение иммуноглобулинов.

Задачей изобретения является создание способа профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов.

Техническим результатом является возможность обеспечения надежной профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов после перенесенного оперативного вмешательства, обеспечение необходимого и достаточного увеличения количества лимфоцитов в крови пациента после перенесенного оперативного вмешательства, а также обеспечение достаточно благоприятного течения травматической болезни пациента после перенесенной высокой хирургической агрессии. Кроме того, техническим результатом является обеспечение у пациента необходимого повышения иммуноглобулинов.

Технический результат достигается тем, что в предлагаемом способе профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов забор цельной крови пациента проводят накануне оперативного вмешательства из любой его центральной или периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл и отстаивают ее в течение 100-140 минут, отбирают лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5-1,5 мл и вводят в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента, разливают полученную клеточную взвесь в стерильные емкости по 2 мл и вводят в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640, емкости с культурой лимфоцитов размещают в термостате и выдерживают при температуре 37°С в течение 72 часов, затем полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугируют 3-5 раз при скорости вращения 1000 об/мин по 10 минут, при этом после каждого центрифугирования сливают надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляют по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования клеточной культуры аутологичных лимфоцитов, затем после окончания центрифугирования забирают из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов добавляют 10 мл физиологического раствора и вводят внутривенно пациенту в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 секунд, при этом внутривенное введение пациенту клеточной массы аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществляют до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно, или через 2-3 дня после оперативного вмешательства. При этом внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе дополнительно осуществляют повторно через 7-14 дней после ее первоначального введения.

Способ осуществляется следующим образом. Накануне оперативного вмешательства выполняют забор цельной крови пациента из любой его центральной или периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл. Забранную цельную кровь пациента отстаивают в течение 100-140 минут. Отбирают лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5-1,5 мл и вводят в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента. Полученную клеточную взвесь разливают в стерильные емкости по 2 мл и вводят в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов размещают в термостате и выдерживают при температуре 37°С в течение 72 часов. Полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугируют 3-5 раз при скорости вращения 800-1200 об/мин в течение 10 минут каждое центрифугирование. При этом после каждого центрифугирования сливают надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляют по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования клеточной культуры аутологичных лимфоцитов. После окончания центрифугирования забирают из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов добавляют 10 мл физиологического раствора и вводят внутривенно пациенту в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 секунд. При этом внутривенное введение пациенту клеточной массы аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществляют до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно, или через 2-3 дня после выполнения оперативного вмешательства. Внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе дополнительно осуществляют повторно через 7-14 дней после ее первоначального введения.

Среди существенных признаков, характеризующих предложенный способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов, отличительными являются:

– осуществление забора цельной крови пациента накануне оперативного вмешательства из любой его центральной или периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл и отстаивание ее в течение 100-140 минут,

– отбор лимфоцитарной фракции пациента в количестве 0,5-1,5 мл и введение в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента,

– разливание полученной клеточной взвеси в стерильные емкости по 2 мл и введение в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640,

– размещение емкостей с культурой лимфоцитов в термостате и их выдерживание при температуре 37°С в течение 72 часов,

– выполнение центрифугирования полученной в каждой емкости клеточной культуры аутологичных лимфоцитов 3-5 раз при скорости вращения 800-1200 об/мин в течение 10 минут для каждого центрифугирования,

– удаление после каждого центрифугирования надосадочной жидкости и добавление в каждую емкость по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования клеточной культуры аутологичных лимфоцитов,

– забор после окончания центрифугирования из всех емкостей в шприц клеточной массы аутологичных лимфоцитов, добавление в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов 10 мл физиологического раствора и введение содержимого шприца внутривенно пациенту в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 секунд,

– выполнение внутривенного введения пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно, или через 2-3 дня после оперативного вмешательства,

– выполнение дополнительного повторного внутривенного введения пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе через 7-14 дней после ее первоначального введения.

Экспериментальные исследования предложенного способа профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов в клинических условиях показали его высокую эффективность. Способ при своем использовании обеспечивает необходимое и достаточное увеличение количества лимфоцитов в крови пациента после перенесенного оперативного вмешательства, а также обеспечивает достаточно благоприятное течение травматической болезни пациента после перенесенной высокой хирургической агрессии. Кроме того, достигнуто обеспечение у пациента необходимого повышения иммуноглобулинов, отсутствует реакция отторжения, а также отсутствуют аллергические реакции организма пациента.

Реализация предложенного способа профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент А., 47 лет, поступил в 8 травматолого-ортопедическое отделение ФГУ ЦИТО с диагнозом «Сочетанная травма. Закрытая черепно-мозговая травма. Сотрясение головного мозга. Закрытый оскольчатый перелом правой бедренной кости со смещением отломков». Анализ иммунного статуса показал: общее количество лимфоцитов 1,0×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов 0,68×10⁹/л.

Пациенту на 7 сутки после травмы выполнили оперативное вмешательство – остеосинтез правой бедренной кости пластиной.

Накануне оперативного вмешательства выполнили забор цельной крови пациента из его центральной вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл. Забранную цельную кровь пациента отстаивали в течение 100 минут. Отобрали лимфоцитарную фракцию в количестве 1,5 мл и ввели в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента. Полученную клеточную взвесь разлили в стерильные емкости по 2 мл и ввели в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов разместили в термостате и выдержали при температуре 37°С в течение 72 часов. Полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугировали 5 раз с использованием высокоскоростной центрифуги типа Т-24 при скорости вращения 800 об/мин по 10 минут каждое центрифугирование. После каждого центрифугирования сливали надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляли по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования. После окончания центрифугирования забрали из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, добавили в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов 10 мл физиологического раствора и содержимое шприца ввели внутривенно пациенту в кубитальную вену предплечья в течение 70 секунд, причем внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе провели через 2 дня после выполнения оперативного вмешательства. При этом осуществили дополнительное повторное внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе через 12 дней после ее первоначального введения.

Послеоперационный период – гладкий. Заживление послеоперационной раны первичное. Показатели клеточного иммунитета нарастали уже на следующий день после введения культуры аутологичных лимфоцитов. К 3-5 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациента составило 1,3×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило 0,8×10⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,013×10⁹/л. К 10 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациента составило 1,4×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило 1,0×10⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,018×10⁹. Определено увеличение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A.

Швы сняты на 14 сутки. В результате лечения гнойно-воспалительных осложнений у пациента не наблюдалось. Перелом сросся. Аллергические реакции отсутствуют.

Пример 2. Пациентка К., 65 лет, поступила в 8 травматолого-ортопедическое отделение ФГУ ЦИТО с диагнозом «Правосторонний гонартроз 3-4 степени, выраженная вальгусная деформация нижней конечности, анкилоз правого тазобедренного сустава». Анализ иммунного статуса показал: общее количество лимфоцитов 0,95×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов 0,64×10⁹/л.

Пациентке выполнили оперативное вмешательство – надмыщелковая остеотомия бедра и надкостный остеосинтез из расширенного латерального доступа.

До оперативного вмешательства выполнили забор цельной крови пациентки из ее центральной вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл. Забранную цельную кровь пациентки отстаивали в течение 120 минут. Отобрали лимфоцитарную фракцию в количестве 1,0 мл и ввели в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациентки. Полученную клеточную взвесь разлили в стерильные емкости по 2 мл и ввели в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов разместили в термостате и выдержали при температуре 37°С в течение 72 часов. Полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугировали 4 раза с использованием высокоскоростной центрифуги типа Т-24 при скорости вращения 1200 об/мин по 10 минут каждое центрифугирование. После каждого центрифугирования сливали надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляли по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования. После окончания центрифугирования забрали из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, добавили в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов 10 мл физиологического раствора и содержимое шприца ввели внутривенно пациентке в кубитальную вену предплечья в течение 50 секунд, причем внутривенное введение пациентке клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществили интраоперационно.

Послеоперационный период – гладкий. Заживление послеоперационной раны первичное. Показатели клеточного иммунитета нарастали уже на следующий день после введения культуры аутологичных лимфоцитов. К 3-5 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациентки составило 1,25×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило 0,75×10⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,012×10⁹/л. К 10 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациентки составило 1,4×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило

1,0×10⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,017×10⁹. Определено увеличение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A.

Швы сняты на 16 сутки. В результате лечения гнойно-воспалительных осложнений у пациентки не наблюдалось. Аллергические реакции отсутствуют.

Пример 3. Пациентка Д., 69 лет, поступила в 8 травматолого-ортопедическое отделение ФГУ ЦИТО с диагнозом «Левосторонний гонартроз 3-4 степени, выраженная вальгусная деформация нижней конечности, анкилоз левого тазобедренного сустава». Анализ иммунного статуса показал: общее количество лимфоцитов 0,9×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов 0,60×10⁹/л.

Пациентке выполнили оперативное вмешательство – надмыщелковая остеотомия бедра и надкостный остеосинтез из расширенного латерального доступа.

До оперативного вмешательства выполнили забор цельной крови пациентки из ее периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл. Забранную цельную кровь пациентки отстаивали в течение 100 минут. Отобрали лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5 мл и ввели в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациентки. Полученную клеточную взвесь разлили в стерильные емкости по 2 мл и ввели в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10% раствора фитогемоагглютинина в культуральной среде RPMI-1640. Емкости с культурой лимфоцитов разместили в термостате и выдержали при температуре 37°С в течение 72 часов. Полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугировали 3 раза с использованием высокоскоростной центрифуги типа Т-24 при скорости вращения 1000 об/мин по 10 минут каждое центрифугирование. После каждого центрифугирования сливали надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляли по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования. После окончания центрифугирования забрали из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, добавили в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов 10 мл физиологического раствора и содержимое шприца ввели внутривенно пациентке в кубитальную вену предплечья в течение 30 секунд, причем внутривенное введение пациентке клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществили за один день до выполнения оперативного вмешательства.

Послеоперационный период – гладкий. Заживление послеоперационной раны первичное. Показатели клеточного иммунитета нарастали уже на следующий день после введения культуры аутологичных лимфоцитов. К 3-5 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациентки составило 1,25×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило 0,78×10⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,011×10⁹/л. К 10 дню после введения общее количество лимфоцитов в крови пациентки составило 1,3×10⁹/л, абсолютное количество Т-лимфоцитов составило

0,9×10⁹/л, количество Т-супрессоров составило 0,017×10⁹. Определено увеличение содержания иммуноглобулинов классов G, M и A.

Швы сняты на 14 сутки. В результате лечения гнойно-воспалительных осложнений у пациентки не наблюдалось. Аллергические реакции отсутствуют.

Предложенный способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов применен при лечении 40 пациентов с различной патологией и переломами трубчатых костей скелета. Случаев гнойно-воспалительных осложнений у пациентов не наблюдалось. Переломы срослись у всех пациентов. При этом отмечено обеспечение усиления иммунной реактивности организма пациентов. Предложенный способ не вносит чужеродной информации, так как основывается на вызванных собственными клетками реакциях.

Формула изобретения

1. Способ профилактики гнойно-воспалительных осложнений у травматолого-ортопедических пациентов с использованием культуры аутологичных лимфоцитов, включающий забор крови пациента, выращивание лимфоцитов и внутривенное введение их пациенту, отличающийся тем, что забор цельной крови пациента осуществляют накануне оперативного вмешательства из любой его центральной или периферической вены в предварительно промытый гепарином шприц в количестве 10 мл и отстаивают ее в течение 100-140 мин, отбирают лимфоцитарную фракцию в количестве 0,5-1,5 мл и вводят в нее 5 мл культуральной среды RPMI-1640, а также 5 мл собственной сыворотки пациента, разливают полученную клеточную взвесь в стерильные емкости по 2 мл и вводят в каждую емкость по 5 мл культуральной среды RPMI-1640 и по 0,01 мл 10%-ного раствора фитогемоаглютинина в культуральной среде RPMI-1640, емкости с культурой лимфоцитов размещают в термостате и выдерживают при температуре 37°С в течение 72 ч, затем полученную в каждой емкости клеточную культуру аутологичных лимфоцитов центрифугируют 3-5 раз при скорости вращения 800-1200 об/мин по 10 мин, при этом после каждого центрифугирования сливают надосадочную жидкость и в каждую емкость добавляют по 5 мл физиологического раствора для повторения центрифугирования клеточной культуры аутологичных лимфоцитов, затем после окончания центрифугирования забирают из всех емкостей в шприц клеточную массу аутологичных лимфоцитов, в шприц с набранной клеточной массой аутологичных лимфоцитов добавляют 10 мл физиологического раствора и вводят внутривенно пациенту в любую центральную или периферическую вену в течение 30-70 с, при этом внутривенное введение пациенту клеточной массы аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе осуществляют до выполнения оперативного вмешательства, или интраоперационно или через 2-3 дня после оперативного вмешательства.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что внутривенное введение пациенту клеточной культуры аутологичных лимфоцитов в физиологическом растворе дополнительно осуществляют повторно через 7-14 дней после ее первоначального введения.