Патент на изобретение №2369871

(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ СИНДРОМА ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У БОЛЬНЫХ С ТЕРМИЧЕСКОЙ ТРАВМОЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской диагностике. Предложен способ оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больных с термической травмой. В образце крови определяют активность альдегиддегидрогеназы и по отклонению активности фермента при ожоге по сравнению с нормой судят о степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного: при уменьшении активности фермента от 3 до 15% определяют первую степень синдрома эндогенной интоксикации, от 15 до 30% – вторую степень синдрома эндогенной интоксикации, от 30 до 50% – третью степень синдрома эндогенной интоксикации и от 50 до 70% определяют четвертую степень синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой. Способ позволяет в короткие сроки выявить интоксикацию организма у больных с термической травмой. 1 табл.

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой.

В качестве прототипа выбран способ диагностики степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации (СЭИ), заключающийся в определении степени тяжести, течения, прогноза исхода заболевания подсчетом количества двулучепреломляющих кристаллов (ДЛПК) в образцах плазмы без- и с добавлением ингибитора протеаз (эпсилон-аминокапроновой кислоты – ЭАКК), в измерении площади дендрита ингибитора протеаз и последующей диагностике I^ой степени СЭИ при количестве ДЛПК в образцах цитратной плазмы от 15 до 300 и площади дендрита ЭАКК 243-291 мм², при ДЛПК от 301 до 1000 и площади дендрита ЭАКК 242-162 мм² – II^ой степени, при ДЛПК от 1001 до 5000, площади дендрита ЭАКК от 15 до 1000 – III^ей степени, при ДЛПК в образцах плазмы без ингибитора от 5000 до 15000 и в образцах с ингибитором от 1000 до 15000 и площади дендрита ЭАКК от 80 мм² до полного исчезновения – IV^ой степени СЭИ (см. патент 2158923, G01N 33/48, 2000 г.).

Однако известный способ является длительным, трудоемким, субъективным и не дает возможности ранней диагностики степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой.

Задача предлагаемого изобретения – раннее выявление интоксикации организма у больного.

Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем исследование крови, определяют активность альдегиддегидрогеназы и по разнице активности фермента при ожоге по сравнению с нормой судят о степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой: при уменьшении активности фермента от 3 до 15% определяют первую степень тяжести, от 15 до 30% – вторую степень тяжести, от 30 до 50% – третью степень тяжести и от 50 до 70% определяют четвертую степень тяжести синдрома эндогенной интоксикации.

Способ оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой осуществляют следующим образом: в течение первых шести часов после травмы у больного забирают кровь из вены (0,1 мл) в пробирку, содержащую 3,9 мл дистиллированной воды, получая гемолизат крови. Затем в спектрофотометрическую кювету помещают 2,8 мл 0,1 М глицин-щелочного буфера (pH 10), 0,05 мл 18 мМ ацетальдегида, 0,1 мл 0,8 мМ окисленного никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и добавляют в смесь 0,05 мл гемолизата крови. Содержимое кюветы (3 мл) быстро перемешивают, измеряют величину его оптической плотности при 340 нм с интервалом 15 с в течение 1 минуты и определяют активность фермента – альдегиддегидрогеназы (А, нмоль НАДН/мин) по формуле:

где

Е₃₄₀ – величина оптической плотности, измеренной при 340 нм и рассчитанной следующим образом: Е₃₄₀=(E₁–Е₂/2)+Е₂

E₁=Е₃₀-Е₀; Е₂=Е₆₀-Е₀;

3 – объем пробы в кювете в мл;

10⁹ – коэффициент пересчета моль в нмоль;

6,22×10⁶ – коэффициент молярной экстинкции для восстановленного никотинамидадениндинуклеотида (НАДН);

t – время, в течение которого измеряют активность альдегиддегидрогеназы в мин.

Затем вычисляют процент активности альдегиддегидрогеназы при ожоге от общей активности альдегиддегидрогеназы в норме математическим способом по правилу “креста”. Норма представлена кровью здоровых людей, которая составляет 7,04 нмоль НАДН/мин и принимается за 100%. По разнице процентов между активностью фермента – альдегиддегидрогеназы при ожоге по сравнению с нормой судят о степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой: при снижении активности альдегиддегидрогеназы на 3-15% по сравнению с нормой диагностируют I степень СЭИ; при снижении активности альдегиддегидрогеназы на 15-30% диагностируют II степень СЭИ; при снижении на 30-50% – определяют III степень СЭИ; при снижении активности фермента на 50-70% определяют IV степень синдрома эндогенной интоксикации.

Результаты исследования активности альдегиддегидрогеназы (нмоль НАДН/мин) в гемолизате крови 46 ожоговых больных представлены в таблице 1.

Таблица 1 Активность альдегиддегидрогеназы (нмоль НАДН/мин) в гемолизате крови в норме и при ожоге
	Норма	I	% от нормы	II	% от нормы	III	% от нормы	IV	% от нормы
1	6,85	6,83	97%	5,70	81%	4,58	65%	3,17	45%
2	7,14	6,34	90%	4,93	70%	4,72	67%	2,39	34%
3	7,12	6,41	91%	5,42	77%	3,94	56%	2,60	37%
4	6,90	6,55	93%	5,21	74%	4,08	58%	2,75	39%
5	6,82	6,76	96%	5,14	73%	3,73	53%	3,10	44%
6	6,99	6,27	89%	5,50	78%	3,80	54%	3,38	48%
7	7,17			5,28	75%	4,22	60%
8	6,63			4,99	71%	4,29	61%
9	7,46			5,07	72%	4,36	62%
10	7,35			5,21	74%	3,66	52%
11	7,01			5,28	75%	3,80	54%
12	7,08			5,07	72%	4,01	57%
13	7,07			5,35	76%	4,15	59%
14				5,56	79%	3,73	53%
15				5,63	80%	3,87	55%
16				4,99	71%	3,59	51%
17				5,63	80%	3,52	50%
M±m	7,04±0,06	6,53±0,09		5,29±0,06		4,00±0,08		2,90±0,15
Примечания: I – активность альдегиддегидрогеназы при I степени СЭИ у больного с термической травмой (6 больных); II – активность альдегиддегидрогеназы при II степени СЭИ (17 больных); III – активность фермента при III степени СЭИ (17 больных); IV – активность фермента при IV степени СЭИ (6 больных).

Клинический пример 1.

Будилов М.П., 25 лет, истории болезни 200473, получил ожог пламенем на площади 45% поверхности тела. Спустя несколько часов после травмы взяли 0,1 мл крови, приготовили гемолизат, 0,05 мл которого поместили в спектрофотометрическую кювету и измерили величину оптической плотности при длине волны 340 нм (Е₃₄₀) в течение 1 минуты с интервалом 15 секунд:

Рассчитали величину оптической плотности при 340 нм за мин по формуле: Е₃₄₀=(E₁–Е₂/2)+Е₂, где E₁ – величина оптической плотности, измеренная за 30 с, Е₂ – величина оптической плотности, измеренная за 1 мин. Таким образом, Е₃₄₀=(0,005-0,0045)+0,009=0,0095.

После этого рассчитали активность фермента – альдегиддегидрогеназы – по формуле:

, где

Е₃₄₀ – величина оптической плотности, измеренной при 340 нм за мин;

3 – объем пробы в кювете;

10⁹ – коэффициент пересчета моль в нмоль;

6,22×10⁶ – коэффициент молярной экстинкции для восстановленного никотинамидадениндинуклеотида;

t – время, в течение которого измеряют активность фермента в мин.

Таким образом,

Затем определили по правилу “креста”, какой процент от общей активности здоровых людей составила активность альдегиддегидрогеназы крови данного больного. Норма составляет 7,04 нмоль/мин, которую принимают за 100%:

7,04 – 100%

4,58 – х%

х=65%

Затем вычислили разницу между активностью фермента при ожоге и нормой: 100%-65%=35%.

Активность альдегиддегидрогеназы крови у Будилова М.П. снижена на 35% по сравнению с нормой, что свидетельствует о развитии у него III степени синдрома эндогенной интоксикации.

Клинический пример 2.

Соколов А.П., 35 лет, истории болезни 201059, получил термический ожог на площади 20% поверхности тела. Сразу после поступления в ННИИТО взяли 0,1 мл крови, приготовили гемолизат, 0,05 мл которого поместили в спектрофотометрическую кювету, и измерили величину оптической плотности при длине волны 340 нм (Е₃₄₀) в течение 1 минуты с интервалом 15 секунд:

Рассчитали величину оптической плотности при 340 нм за мин по формуле: Е₃₄₀=(E₁–Е₂/2)+Е₂, где E₁ – величина оптической плотности, измеренная за 30 с, Е₂ – величина оптической плотности, измеренная за 1 мин. Таким образом, Е₃₄₀=(0,004-0,003)+0,006=0,007

После этого рассчитали активность фермента – альдегиддегидрогеназы – по формуле:

, где

Е₃₄₀ – величина оптической плотности, измеренной при 340 нм за мин;

3 – объем пробы в кювете;

10⁹ – коэффициент пересчета моль в нмоль;

6,22×10⁶ – коэффициент молярной экстинкции для восстановленного никотинамидадениндинуклеотида;

t – время, в течение которого измеряют активность фермента в мин.

Таким образом,

Затем определили по правилу “креста”, какой процент от общей активности здоровых людей составила активность альдегиддегидрогеназы крови данного больного. Норма составляет 7,04 нмоль/мин, которую принимают за 100%:

7,04 – 100%,

3,38 – х%,

х=48%.

Затем вычислили разницу между активностью фермента при ожоге и нормой: 100%-48%=52%.

Активность альдегиддегидрогеназы крови у Соколова А.П. снижена на 52% по сравнению с нормой, что свидетельствует о развитии у него IV степени синдрома эндогенной интоксикации.

Способ оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой простой и быстрый в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и большого количества биологического материала.

Формула изобретения

Способ оценки степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой путем исследования крови, отличающийся тем, что определяют активность альдегиддегидрогеназы и по разнице активности фермента при ожоге по сравнению с нормой судят о степени тяжести синдрома эндогенной интоксикации у больного: при уменьшении активности фермента от 3 до 15% определяют первую степень синдрома эндогенной интоксикации, от 15 до 30% – вторую степень синдрома эндогенной интоксикации, от 30 до 50% – третью степень синдрома эндогенной интоксикации и от 50 до 70% определяют четвертую степень синдрома эндогенной интоксикации у больного с термической травмой.