Патент на изобретение №2364398

(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ДЕПРЕССИИ ЭРИТРОИДНОГО РОСТКА КРОВЕТВОРЕНИЯ ПРИ ЦИТОСТАТИЧЕСКОЙ МИЕЛОСУПРЕССИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для лечения депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатической миелосупрессии. Для этого вводят ципрогептадин в дозе 30 мг/кг за 30 минут до введения цитостатика. На следующие сутки после цитостатического воздействия вводят рекормон в дозе 10 ЕД/мышь 1 раз в сутки в течение 5 дней. Способ обеспечивает потенциирование эффекта и уменьшение побочного действия рекормона, способствуя нормализации содержания эритроидных элементов в периферической крови. 5 табл.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к гематологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции нарушений в системе крови, развивающихся при цитостатическом воздействии.

Показано, что эритроидные клетки как наиболее интенсивно делящаяся популяция нуклеаров костного мозга, особенно чувствительна к действию цитостатиков [1]. Известен, способ коррекции нарушений эритропоэза, вызванных цитостатиками, с помощью рекомбинантного эритропоэтина – рекормона [2].

Данный способ является наиболее близким к заявляемому по достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.

Недостатком способа являются осложнения цитостатической болезни при введении рекормона, которые заставляют отказаться от монотерапии [3]. Перспективным для лечения цитостатической анемии является комплексное влияние на кроветворную ткань – восстановление структурно-функциональной целостности костного мозга и воздействие на пул предшественников эритропоэза, что, предположительно, будет препятствовать развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения и усиливать эффект рекормона.

Задачей, решаемой данным изобретением, является повышение эффективности способа и уменьшение побочного действия рекормона.

Поставленная задача достигается тем, что ципрогептадин в дозе 30 мг/кг вводят за 30 мин до введения цитостатика, а на следующие сутки после цитостатического воздействия вводят рекормон в дозе 10 ЕД/мышь 1 раз в сут в течение 5 дней.

Совместное применение ципрогептадина и рекормона стало возможным благодаря выявленному авторами новому свойству ципрогептадина потенцировать действие рекормона и предотвращать развитие депрессии эритроидного ростка кроветворения, развивающейся при цитостатических миелосупрессиях.

Новым в предлагаемом изобретении является совместное использование ципрогептадина в дозе 30 мг/кг, цитостатического препарата и рекормона.

Ципрогептадин (перитол) проявляет антигистаминное, противоаллергическое, антисеротониновое действие, блокирует H₁ гистаминовые рецепторы (регистрационный номер П 012084/02). Применяют препарат при аллергических заболеваниях, мигрени, он оказывает выраженное седативное действие [4]. Известна, способность ципрогептадина, введенного внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг, блокировать постсинаптические серотониновые С₂-рецепторы [5].

Эпоэтин бета (-(1-165)-Эритропоэтин, рекормон) относится к группе стимуляторов гемопоэза как стимулятор эритропоэза. Показанием к его применению являются анемии различного генеза [4]. Однако при назначении рекормона могут наблюдаться: гипертонический криз с проявлениями энцефалопатии, тромбоцитопения, тромбоцитоз, повышение концентрации калия и фосфатов в сыворотке, аллергические реакции (сыпь, крапивница), что ограничивает применение препарата. Следует отметить, что одним из показаний к применению ципрогептадина являются аллергические реакции (в частности крапивница) [4].

Ярким представителем группы цитостатиков является фторпиримидиновый антиметаболит 5-фторурацил, активно используемый в химиотерапии злокачественных образований [4]. Исследование механизма действия препарата показало, что развитие миелосупрессии вследствие назначения 5-фторурацила, связано, в первую очередь, с нарушением структурно-функциональной целостности кроветворной ткани (гемопоэтические островки), где происходит созревание коммитированных кроветворных предшественников до зрелых клеток крови, и лимфоидных механизмов [6]. В основе стимулирующего действия на эритропоэз рекормона лежит усиление пролиферативной активности эритроидных клеток-предшественников и ускорение темпов их созревания [7]. Поэтому нарушение, прежде всего, процессов формирования гемопоэтических островков на фоне истощения коммитированных прекурсоров приводит к развитию осложнений цитостатической болезни при введении рекормона. Вместе с тем, обнаружена способность ципрогептадина, при применении 5-фторурацила, восстанавливать структурно-функциональную организацию костного мозга [8]. Перспективным для лечения цитостатической анемии может явиться комплексное воздействие на кроветворную ткань: одновременное восстановление структурно-функциональной целостности кроветворной ткани и стимуляция пролиферативной активности и интенсивности дифференцировки предшественников эритропоэза. Это позволит существенно повысить эффективность противоопухолевого лечения, снизить дозу рекормона, а также улучшить качество жизни больных.

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в проанализированной патентной и научно-медицинской литературе.

Способ может быть использован для повышения эффективности лекарственной химиотерапии. Исходя из вышеизложенного, заявляемое изобретение соответствует критериям патентоспособности изобретения «Новизна» и «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Предлагаемый способ изучен в экспериментах на мышах-самцах линии CBA/CaLac в количестве 220 штук, массой 20-22 г. Животные первой категории, конвенциональные линейные мыши, получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).

Способ осуществляют следующим образом.

У лабораторного животного (мыши) цитостатическую миелосупрессию моделировали однократным внутрибрюшинным введением в 1/3 МПД (76 мг/кг) фторпиримидинового антиметаболита 5-фторурацила (Украина, химфармобъединение Дарница). За 30 мин до цитостатического воздействия животным опытных групп однократно внутрибрюшинно вводили антисеротониновый препарат ципрогептадин (Serwa, Германия) в дозе 30 мг/кг. Непосредственно перед использованием препарат растворяли в стерильном физиологическом растворе. Контрольным животным во всех сериях экспериментов в аналогичных условиях вводили эквивалентный объем физиологического раствора (0,2 мл). На следующий день после введения цитостатика в течение пяти дней мыши опытных групп получали подкожные инъекции препарата рекомбинантного человеческого эритропоэтина (эпоэтин-) – рекормона (Hoffman-La Roche Ltd, Швейцария), в дозе 10 ЕД на мышь. В качестве фона использовали интактных животных.

На 2-7, 12-е сут после цитостатического воздействия у животных определяли показатели периферической крови и костномозгового кроветворения стандартными гематологическими методами, структурно-функциональную организацию костного мозга изучали путем ферментативного выделения гемопоэтических островков и последующей оценки их количественного и качественного состава [9].

Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием непараметрического U-критерия Уилкоксона-Манна-Уитни.

Пример

В ходе исследований установлено, что 5-фторурацил значительно снижает содержание эритрокариоцитов в костном мозге на протяжении всего периода исследования, вызывает развитие ретикулоцитопении в периферической крови на 2-6-е сут опыта (табл.1, 2). Указанные изменения эритроидного ростка кроветворения связаны с выраженными нарушениями со стороны структурно-функциональной организации костного мозга. Так на 2-7-е сут опыта отмечается подавление выхода клеточных комплексов ассоциированных с макрофагальными элементами (до 9-46%, Р<0,001). Изучение цитологических препаратов позволило выявить в этот период статистически достоверное снижение числа эритроидных и эритрогранулоцитарных (смешанных) гемопоэтических островков (табл.3).

Введение рекормона приводит к ускорению процессов восстановления эритропоэза, подавленного цитостатиком. Так, препарат увеличивает число эритроидных клеток в костном мозге на 4, 6, 7, 12-е сут эксперимента (табл.1). Прирост ретикулоцитов в периферической крови отмечался на 4-6-е и 12-е сут исследования (табл.2). Применение рекормона не влияет на процессы формирования макрофагпозитивных клеточных комплексов и эритроидных и эритрогранулоцитарных гемопоэтических островков в кроветворной ткани (табл.3, 4).

Последовательное использование ципрогептадина и рекормона увеличивает содержание эритрокариоцитов в костном мозге животных после цитостатической миелосупрессии, начиная с 3-х сут опыта (3-7, 12 сут) (табл.1). Увеличение содержания ретикулоцитов при действии препаратов наблюдается на 2, 5-7, 12-е сут эксперимента (табл.2). Следует отметить, что активация эритроидного ростка кроветворения при применении рекормона уступает таковой при последовательном использовании ципрогептадина и рекормона (табл.1, 2).

Показана способность ципрогептадина совместно с рекормоном восстанавливать структурно-функциональную целостность костного мозга у мышей, получавших

5-фторурацил (табл.3, 4, 5). Так, препараты способствуют накоплению числа макрофагпозитивных (2, 4-7-е сут), эритроидных (2-7-е сут) и эритро-гранулоцитарных (2, 4, 6, 7, 12-е сут) гемопоэтических островков (табл.3, 4, 5). При анализе данных обнаружено, что формирование дополнительных очагов эритроидного и смешанного кроветворения предшествует возрастанию числа эритрокариоцитов в костном мозге и ретикулоцитов в периферической крови под влиянием ципрогептадина и рекормона у животных, получавших 5-фторурацил.

Итак, введение ципрогептадина до моделирования цитостатической миелосупрессии с последующим введением рекормона препятствует разрушению структурно-функциональной целостности кроветворного ткани и развитию депрессии эритроидного ростка кроветворения, а также способствует интенсивному восстановлению содержания ретикулоцитов в периферической крови, вплоть до ретикулоцитоза. По всем показателям «положительный» эффект последовательного применения ципрогептадина и рекормона превосходит эффект коррекции нарушений эритропоэза рекормоном. Таким образом, повышается эффективность лечения цитостатической миелосупрессии рекормоном.

Литература

1. Эритроциты и злокачественные новообразования. / Новицкий В.В., Степовая Е.А., Гольдберг В.Е. и др. – Томск: STT, 2000. – С.171-217.

2. Удут Е.В. Коррекция анемического синдрома при миелоингибирующих воздействиях. – Автореф. дис д-ра мед. наук. – Томск, 2008. – С.8-37.

2.

4. Регистр лекарственных средств России РЛС Энциклопедия лекарств. – 15-й вып. / Гл. ред. Г.Л. Вышковский. – М.: РЛС-2007. – 2006. – С.955-956; 998-999; 1035-1036.

4496. – P.827-829.

6. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях. – Томск: STT, 1999. – С.61-84.

2. – 2007. – C.115-116.

1 – 2007. – С.86-91.

9. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематалогии. – Томск, 1992. – С.172-173, 208.

Таблица 1
Динамика содержания эритрокариоцитов (×106 клеток/бедро) в костном мозге мышей, получавших 5-фторурацил, 5-фторурацил совместно с рекормоном либо 5-фторурацил совместно с ципрогептадином и рекормоном
Сроки исследования, сутки	5-фторурацил	5-фторурацил + рекормон	Ципрогептадин + 5-фторурацил + рекормон
Интактный контроль	0,89±0,08	0,89±0,08	0,89±0,08
2	0,04±0,01	0,04±0,01	0,05±0,02
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
				Б
				В
3	0,04±0,01	0,03±0,01	0,12±0,01
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
			Р<0,002	Б
			Р<0,001	В
4	0,09±0,01	0,17±0,03	0,7±0,06
	Р<0,001	Р<0,001		А
		Р<0,05	Р<0,001	Б
			Р<0,001	В
5	0,31±0,03	0,22±0,02	1,24±0,19
	Р<0,001	Р<0,001		А
			Р<0,002	Б
			Р<0,002	В
6	0,49±0,07	0,82±0,04	0,81±0,07
	Р<0,02			А
		Р<0,02	Р<0,01	Б
				В
7	0,23±0,04	0,74±0,07	0,94±0,09
	Р<0,001			А
		Р<0,001	Р<0,001	Б
				В
12	0,35±0,06	0,66±0,05	0,74±0,13
	Р<0,002	Р<0,02		А
		Р<0,02	Р<0,02	Б
				В
Примечание. Р<0,002, Р<0,001 – отмечена достоверность различия показателя от его значения А – у животных в интактном контроле, Б – у животных той же модели без препарата, В – у животных той же модели с рекормоном

Таблица 2
Динамика содержания ретикулоцитов в периферической крови мышей, получавших 5-фторурацил, 5-фторурацил совместно с рекормоном либо 5-фторурацил совместно с ципрогептадином и рекормоном ()
Сроки исследования, сутки	5-фторурацил	5-фторурацил + рекормон	Ципрогептадин + 5-фторурацил + рекормон
Интактный контроль	29,4±1,86	29,4±1,86	29,4±1,86
2	3,83±0,6	11,5±1,48	3,0±0,45
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
		Р<0,001		Б
			Р<0,001	В
3	7,83±0,65	10,33±1,26	6,8±0,58
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
		Р<0,05		Б
			Р<0,05	В
4	7,6±0,51	17,0±1,75	7,6±0,93
	Р<0,001	Р<0,01	Р<0,001	А
		Р<0,001		Б
			Р<0,002	В
5	6,0±0,73	15,5±1,67	15,67±1,71
	Р<0,001	Р<0,002	Р<0,002	А
		Р<0,002	Р<0,002	Б
				В
6	9,33±1,17	35,17±4,2	55,67±6,17
	Р<0,001		Р<0,002	А
		Р<0,001	Р<0,001	Б
			Р<0,02	В
7	30,6±3,2	38,8±4,04	63,67±5,34
			Р<0,002	А
			Р<0,001	Б
			Р<0,001	В
12	31,6±2,6	51,6±6,6	38,6±3,66
		Р<0,02	Р<0,05	А
		Р<0,02		Б
				В
Примечание. Р<0,05, Р<0,02, Р<0,002, Р<0,001 – отмечена достоверность различия показателя от его значения А – у животных в интактном контроле, Б – у животных той же модели без препарата, В – у животных той же модели с рекормоном

Таблица 3
Влияние 5-фторурацила на качественный состав гемопоэтических островков (×103/ бедро) в костном мозге мышей
Сроки исследования, сутки	Макрофагпозитивные островки	Эритроидные островки	Эритрогранулоцитарные островки
Интактный контроль	12,88±1,29	3,52±0,43	14,33±1,47
2	5,92±0,47	1,46±0,13	4,38±0,58
	Р<0,001	Р<0,01	Р<0,001	А
3	3,7±0,47	1,57±0,17	2,81±0,19
	Р<0,001	Р<0,01	Р<0,001	А
4	1,33±0,54	0,82±0,18	1,56±0,33
	Р<0,001	Р<0,01	Р<0,001	А
5	1,85±0,37	0,64±0,04	2,63±0,14
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
6	1,11±0,5	0,35±0,04	1,12±0,15
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
7	2,96+0,47	1,24+0,1	3,1+0,37
	Р<0,001	Р<0,01	P<0,001	А
12	5,33±0,54	0,47±0,04	4,11±0,28
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
Примечание. Р<0,01, Р<0,001 – отмечена достоверность различия показателя от его значения А – у животных интактного контроля

Таблица 4
Влияние рекормона на качественный состав гемопоэтических островков (×103/ бедро) в костном мозге мышей, получавших 5-фторурацил
Сроки исследования, сутки	Макрофагпозитивные островки	Эритроидные островки	Эритрогранулоцитарные островки
Интактный контроль	12,88±1,29	3,52±0,43	14,33±1,47
2	3,33±0,5	1,1±0,14	2,54±0,16
	Р<0,001		Р<0,02	А
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0001	Б
3	2,96±0,47	1,67±0,26	2,32±0,39
	Р<0,001	Р<0,02	Р<0,001	А
				Б
4	2,96±0,47	1,35±0,16	2,65±0,31
	Р<0,001	Р<0,01	Р<0,001	А
	Р<0,02		Р<0,02	Б
5	1,11±0,5	0,33±0,04	1,45±0,16
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
		Р<0,001	Р<0,001	Б
6	2,59±0,37	1,16±0,18	2,25±0,23
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
		Р<0,01	Р<0,01	Б
7	4,44±0,81	1,9±0,12	4,77±0,18
	Р<0,001	Р<0,01	Р<0,001	А
		Р<0,01	Р<0,001	Б
12	2,66±0,44	0,6±0,1	4,08±0,47
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
	Р<0,01			Б
Примечание. Р<0,02, Р<0,01, Р<0,001 – отмечена достоверность различия показателя от его значения А – у животных интактного контроля, Б – у животных той же модели без препарата

Таблица 5
Влияние ципрогептадина и рекормона на качественный состав гемопоэтических островков (×103/ бедро) в костном мозге мышей, получавших 5-фторурацил
Сроки исследования, сутки	Макрофагпозитивные островки	Эритроидные островки	Эритрогранулоцитарные островки
Интактный контроль	12,88±1,29	3,52±0,43	14,33±1,47
2	11,47±1,56	4,88±0,15	8,5±0,69
		Р<0,02	Р<0,01	А
	Р<0,02	Р<0,001	Р<0,01	Б
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	В
3	3,55±0,54	3,1±0,41	2,89+0,29
	Р<0,001		Р<0,001	А
		Р<0,002	Р<0,02	Б
		Р<0,02		В
4	4,0±0,44	2,51±0,27	3,08±0,39
	Р<0,001		Р<0,001	А
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,02	Б
		Р<0,01		В
5	3,33±0,5	0,93±0,07	2,84±0,28
	Р<0,001	Р<0,001	Р<0,001	А
		Р<0,01		Б
	Р<0,01	Р<0,001	Р<0,01	В
6	4,07±0,89	1,51±0,19	3,08±0,45
	Р<0,002	Р<0,001	Р<0,001	А
		Р<0,001	Р<0,001	Б
				В
7	7,4±0,74	1,69±0,16	7,98±0,87
	Р<0,02	Р<0,05	Р<0,02	А
	Р<0,001	Р<0,05	Р<0,001	Б
	Р<0,02		Р<0,01	В
12	6,66±0,99	0,7±0,1	5,94±0,59
	Р<0,002	Р<0,001	Р<0,001	А
			Р<0,02	Б
	Р<0,01		Р<0,01	В
Примечание. Р<0,02, Р<0,01, Р<0,001 – отмечена достоверность различия показателя от его значения А – у животных интактного контроля, Б – у животных той же модели без препарата, В – у животных той же модели с рекормоном

Формула изобретения

Способ лечения депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатической миелосупрессии, заключающийся во введении через сутки после цитостатика рекормона в дозе 10 ЕД/мышь 1 раз в сутки в течение 5 дней, отличающийся тем, что дополнительно за 30 мин до введения цитостатического препарата вводят ципрогептадин в дозе 30 мг/кг.