Патент на изобретение №2363956

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ МНОГОПЛОДНОЙ БЕРЕМЕННОСТИ ПРИ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОМ ОПЛОДОТВОРЕНИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования многоплодной беременности при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО). Для осуществления способа у женщин до проведения программ ЭКО и переноса эмбрионов (ПЭ) исследуют сыворотку крови на содержание -хорионического гонадотропина методом твердофазного иммуноферментного анализа. При концентрации -хорионического гонадотропина 30 МЕ/л и более прогнозируют развитие многоплодной беременности. При его значениях менее 30 МЕ/л прогнозируют развитие одноплодной беременности. Способ может применяться не только при экстракорпоральном оплодотворении, но и при физиологической беременности по желанию женщины. Тест на определение -ХГЧ в сыворотке крови женщин перед проведением программ ЭКО обладает высокой специфичностью и чувствительностью и позволяет с большой точностью предсказать развитие многоплодия.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования многоплодной беременности при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО).

Причины многоплодия до сих пор недостаточно исследованы. Частота монозиготных близнецов одинакова во всем мире. Частота дизиготных близнецов зависит от этнических факторов, возраста матери и порядка рождения. Чаще всего дизиготные близнецы рождаются у негроидной расы, реже – у желтой расы (Мастюкова Е.М., Московкина А.Г. Основы генетики. Клинико-генетические основы коррекционной педагогики и специальной психологии. М., «Владос», 2001, 367 с.). Частота рождения дизиготных близнецов с приближением возраста матери к максимуму между 35 и 40 годами становится выше (Ленц В. Медицинская генетика. М., Медицина, 1984, 447 с.). Повышение вероятности рождения дизиготных близнецов с увеличением возраста матери связывают с повышением уровня гонадотропина (фолликулостимулирующего гормона) в крови, приводящего к множественному созреванию яйцеклеток (полиовуляции). Причины повышения гонадотропина могут быть полигенно обусловлены. Гормональная обусловленность дизиготной близнецовости подтверждается более частым рождением близнецов этого типа у женщин, лечившихся от бесплодия или применявших оральные контрацептивы, вызывающие полиовуляцию.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа прогнозирования многоплодной беременности при экстракорпоральном оплодотворении.

Поставленная задача достигается тем, что у женщин до проведения программ экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ) исследуют сыворотку крови на содержание -хорионического гонадотропина методом твердофазного иммуноферментного анализа. При концентрации -хорионического гонадотропина 30 МЕ/л и более прогнозируют развитие многоплодной беременности, а при его значениях менее 30 МЕ/л прогнозируют развитие одноплодной беременности.

Новизна изобретения

У женщин до проведения программ ЭКО и ПЭ исследуют сыворотку крови на содержание -хорионического гонадотропина методом твердофазного иммуноферментного анализа. При концентрации хорионического гонадотропина 30 МЕ/л и более прогнозируют развитие многоплодной беременности.

Способ обладает высокой специфичностью, чувствительностью и позволяет до программы ЭКО и ПЭ предсказать многоплодие.

При этом предложенный способ не требует других условий забора крови, чем при определении большинства показателей, определяемых у женщин при ЭКО, а следовательно, уровень ХГЧ может быть определен в том же образце сыворотки крови, что и другие показатели. Способ может применяться не только при ЭКО, но и при физиологической беременности по желанию женщин.

Хорионический гонадотропин человека (-ХГЧ) является белком, вырабатываемым плацентой, и его физиологические и биохимические свойства достаточно изучены. Динамика этого белка, как и других плацентарных белков, оказалась точным и удобным в практике индикатором беременности. Резкое увеличение концентрации -ХГЧ в крови или моче после имплантации бластоциста явилось основой для разработки методов диагностики беременности, широко применяемых в практике. Уже с 1-3 недель беременности концентрация -ХГЧ в сыворотке беременной женщины повышается до 50-1000 МЕ/л, а к середине гестационного срока может достигать 200000 МЕ/л и более. Аномальное снижение уровня циркулирующего -ХГЧ через 6 недель беременности свидетельствует о внематочной или аномальной внутриматочной беременности (Dumps P., Meisser A., Pons D., Morales M.A., Anguenot J.L., Campana A., Bischof P. Accuracy of single measurements of pregnancyassociated plasma protein-A, human chorionic gonadotropin and progesterone in the diagnosis of early pregnancy failure. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. – 2002. – V100. – 2. – Р.174-180).

Показана тенденция к увеличению количества этого белка в циркуляции и после экстракорпорального оплодотворения (Bersinger N.A., Wunder D., Vanderlick F., Chanson A., Pescia G., Janecek P., Boillat E., Birkhauser M.H. Maternal serum levels of placental proteins after in vitro fertilisation and their implications for prenatal screening. Prenat Diagn. – 2004. – V.6. – P.471-477).

Предлагается способ диагностики индуцированной в программах ЭКО и ПЭ беременности и прогнозирования ее течения по количественному показателю сывороточного -ХГЧ уже на 13-й день после переноса эмбрионов, когда концентрация этого белка становится выше у женщин с благополучной беременностью по сравнению со спонтанными абортами (Porat S., Savchev S., Bdolah Y., Hurvvitz A., Haimov-Kochman R. Early serum beta-human chorionic gonadotropin in pregnancies after in vitro fertilization: contribution of treatment variables and prediction of long-term pregnancy outcome. Fertil. Steril. 2007. – V.88, N1, P.82-89; Carmona F., Balasch J., Creus M., Fábregues F., Casamitjana R., Civico S., Vidal E., Calafell J.M., Moreno V., Vanrell J.A. Early hormonal markers of pregnancy outcome after in vitro fertilization and embryo transfer. J. Assist. Reprod. Genet. 2003. – V.20. – 12. Р.521-526).

Известен способ выявления близнецовости в первом триместре беременности. Концентрация этого белка в сыворотке крови в этом сроке близнецовой беременности в два раза выше, чем у женщин с одной клинической беременностью (Mashiach R., Orr-Urtreger A., Yaron Y. A comparison between maternal serum free beta-human chorionic gonadotrophin and pregnancy-associated plasma protein A levels in first-trimester twin and singleton pregnancies. Fetal Diagn Ther. 2004 Mar-Apr; 19(2): 174-7).

Показатель -ХГЧ является важным диагностическим критерием для оценки развития спонтанной и индуцированной беременности, функциональной активности плаценты, а также дифференциальным критерием многоплодия при уже наступившей беременности, поскольку этот белок вырабатывается плацентой. Однако связь показателя концентрации этого белка в крови небеременных женщин с вероятностью рождения ими близнецов в настоящее время неизвестна.

Способ осуществляется следующим образом.

У женщин перед проведением программ ЭКО и ПЭ забирают не менее 5 мл крови из локтевой вены и оставляют до образования кровяного сгустка. Образовавшийся сгусток выбрасывают, а в оставшейся сыворотке крови определяют концентрацию -хорионического гонадотропина (-ХГЧ) методом твердофазного иммуноферментного анализа, например, с использованием стандартного набора реагентов фирмы ВЕКТОР-БЕСТ, Россия. При значениях концентрации -ХГЧ, равных 30 МЕ/л и более, прогнозируют вероятность развития многоплодия после проведения программ ЭКО и ПЭ, а при значениях менее 30 МЕ/л прогнозируют развитие одноплодной беременности.

При выполнении поставленной задачи было обследовано 30 женщин в возрасте от 26 до 38 лет, обратившихся в Зональный перинатальный центр г. Новокузнецка для проведения программ ЭКО и ПЭ. Из них 14 женщин забеременели и родили детей, а 16 – не забеременели. У 25 женщин в результате клинического и лабораторного обследования верифицирован диагноз трубного или трубно-перитонального бесплодия как следствия воспалительных заболеваний органов малого таза, т.е. острого клинического синдрома, развивающегося при восходящем инфицировании эндометрия, маточных труб и/или окружающих тканей, у четырех – диагноз бесплодия как следствия эндометриоза и у одной – синдрома поликистозных яичников. Для определения рационального подхода к ведению в программах ЭКО и ПЭ обследование пациенток до реализации программ проводилось в рамках стандартов: динамика концентраций гонадотропных и половых гормонов, клиническое и биохимическое обследования, гемостазиограмма, обследование и лечение инфекций, входящих в TORCH-комплекс, обследование на онко- и соматическую патологии. Выявленные нарушения корригировались. Показатель сывороточного -ХГЧ до проведения программ ЭКО варьировал у пациенток от 0 до 236 МЕ/л. Девять наступивших в результате программ ЭКО беременностей закончились рождением одного ребенка (сывороточный -ХГЧ варьировал от 1,5 до 11,37 МЕ/л), четыре – рождением двойни (сывороточный -ХГЧ варьировал от 32,84 до 236 МЕ/л) и одна – рождением тройни (сывороточный -ХГЧ составил 32,95 МЕ/л). У 16 незабеременевших женщин концентрация -ХГЧ в сыворотке крови варьировала от 0 до 90,8 МЕ/л, т.е. у трех женщин показатель -ХГЧ превышал 30 МЕ/л, а у 13 – был ниже 30 МЕ/л.

На основании полученных данных была выявлена достоверная положительная корреляционная связь между уровнем ХГЧ в сыворотке крови небеременных женщин перед проведением программ ЭКО и количеством рожденных у них в срок детей в результате проведения программ ЭКО (коэффициент корреляции Спирмена =0,7759, p=0,0172). Такая же связь наблюдалась и на 3-4 неделях клинической беременности, наступившей в результате проведения программ ЭКО и ПЭ (=0,6051, p=0,0078).

В соответствии с рекомендациями Р.Флетчера и Э.Вагнера (Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины. «Медиа Сфера», М., 1998, 347 с.) чувствительность предлагаемого теста на многоплодие (доля лиц с многоплодной беременностью среди лиц с показателем -ХГЧ>30 МЕ/л) составила 63%. Специфичность (доля лиц с отсутствием многоплодия, т.е. лиц с одноплодной беременностью и незабеременевших женщин, среди лиц с показателем -ХГЧ<30 МЕ/л) составила 100%. Распространенность лиц с показателем -ХГЧ>30 МЕ/л среди всех обследованных женщин составила 27%. Распространенность лиц с показателем -ХГЧ<30 МЕ/л среди всех обследованных женщин составила 73%. Прогностическая ценность положительного результата (вероятность показателя -ХГЧ>30 МЕ/л при многоплодии) составила 100%, прогностическая ценность отрицательного результата (вероятность показателя -ХГЧ<30 МЕ/л в отсутствие многоплодия) составила 88%.

Таким образом, тест на определение -ХГЧ в сыворотке крови женщин перед проведением программ ЭКО обладает высокой специфичностью, чувствительностью и прогностической ценностью и позволяет с большой точностью предсказать развитие многоплодия. При осуществлении теста используется иммуноферментный метод анализа, внедренный в большинстве лабораторных баз и не требующий дополнительного обучения персонала.

Пример 1.

Больная У., 26 лет. Обратилась в Зональный перинатальный центр г.Новокузнецка для проведения программ экстракорпорального оплодотворения. Установлен диагноз: Трубно-перитонеальное бесплодие как следствие хронического аднексита. В сыворотке крови определена концентрация хорионического гонадотропина. Показатель равен 8,72 МЕ/л. После индукции суперовуляции с использованием диферелина (Ipsen, 0,1 мг) и пурегона (Оrganon, 100-300 ME) или менопура (Ferring, 2-4 мг), стандартного забора ооцитов, оплодотворения и получения зигот осуществляли перенос эмбрионов в матку. Наступление клинической беременности оценивали через 3-4 недели после переноса эмбрионов по наличию плодного яйца в полости матки, визуализированного при УЗИ.

Беременность закончилась родами одного ребенка.

Пример 2.

Больная Щ., 38 лет. Обратилась в Зональный перинатальный центр г.Новокузнецка для проведения программ экстракорпорального оплодотворения. Проведены клиническое и лабораторное обследования. Показатель -ХГЧ в сыворотке крови равен 9,92 МЕ/л. Установлен диагноз: Трубно-перитонеальное бесплодие как следствие хронического аднексита. По стандартным протоколам проведены ЭКО и ПЭ. Наступившая беременность закончилась родами одного ребенка.

Пример 3.

Больная Б., 34 года. Обратилась в Зональный перинатальный центр г.Новокузнецка для проведения программ экстракорпорального оплодотворения. Проведены клиническое и лабораторное обследования. Показатель -ХГЧ в сыворотке крови равен 32,84 МЕ/л. Установлен диагноз: Трубно-перитонеальное бесплодие как следствие хронического аднексита, пел/нит. По стандартным протоколам проведено ЭКО и ПЭ. Наступившая беременность закончилась родами двойни.

Пример 4.

Больная П., 37 лет. Обратилась в Зональный перинатальный центр г.Новокузнецка для проведения программ экстракорпорального оплодотворения. Проведены клиническое и лабораторное обследования. Показатель -ХГЧ в сыворотке крови равен 233 МЕ/л. Установлен диагноз: Трубно-перитонеальное бесплодие как следствие хронического аднексита. По стандартным протоколам проведено ЭКО и ПЭ. Наступившая беременность закончилась родами двойни.

Пример 5.

Больная А., 32 года. Обратилась в Зональный перинатальный центр г.Новокузнецка для проведения программ экстракорпорального оплодотворения. Проведены клиническое и лабораторное обследования. Показатель -ХГЧ в сыворотке крови равен 32,95 МЕ/л. Установлен диагноз: Трубно-перитонеальное бесплодие как следствие хронического аднексита. По стандартным протоколам проведено ЭКО и ПЭ. Наступившая беременность закончилась родами тройни.

Таким образом, тест на определение -ХГЧ в сыворотке крови женщин перед проведением программ ЭКО обладает высокой специфичностью и чувствительностью и позволяет с большой точностью предсказать развитие многоплодия.

Способ может применяться не только при ЭКО, но и при физиологической беременности по желанию женщин.

Формула изобретения

Способ прогнозирования многоплодной беременности при экстракорпоральном оплодотворении, включающий обследование женщин с определением содержания гонадотропина в крови, отличающийся тем, что у женщин до проведения программ экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов исследуют сыворотку крови на содержание -хорионического гонадотропина методом твердофазного иммуноферментного анализа и при его концентрации 30 МЕ/л и более прогнозируют развитие многоплодной беременности, а при значениях менее 30 МЕ/л прогнозируют развитие одноплодной беременности.