Патент на изобретение №2363001

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НАРУЖНОГО ГЕНИТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. Предложен способ диагностики наружного генитального эндометриоза. В перитонеальной жидкости, полученной при лапароскопии, и в сыворотке крови определяют содержание сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР), и если отношение содержания СЭФР в сыворотке крови к содержанию СЭФР в перитонеальной жидкости больше 4,35, диагностируют наличие наружного генитального эндометриоза. Способ позволяет с высокой точностью устанавливать диагноз наружного генитального эндометриоза у пациенток.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и найдет широкое применение для объективной диагностики наружного генитального эндометриоза (НГЭ).

Внедрение в последние 20-30 лет в практику инструментальных, эндоскопических, генетических, иммунологических методов расширило диагностические возможности при обследовании больных с эндометриозом. Частота выявления эндометриоза у гинекологических больных репродуктивного возраста колеблется от 7 до 50%. Наиболее частыми недостатками в диагностике являются: нераспознавание эндометриоза, ошибочное установление диагноза у некоторых онкологических и неврологических больных при отсутствии у них эндометриоза, запоздалая диагностика. «Золотым» стандартом диагностики эндометриоза являются лапароскопия и гистероскопия с последующим гистологическим исследованием биопсированных тканей. Однако частота гистологического подтверждения диагноза колеблется от 70 до 85%. Положительный результат биопсии подтверждает диагноз эндометриоза, в то время как отрицательный совершенно не исключает эндометриоидную болезнь, так как на исследование могут попасть лишь отдельные кусочки тканей, лишенные характерных морфологических признаков эндометриоза (В.П.Баскаков, Ю.В.Цвелев, Е.Ф.Кира. Эндометриоидная болезнь. Санкт-Петербург, 2002 г., 448 с.). Анализ патентной и научно-медицинской литературы позволил установить, что существующие способы диагностики НГЭ относятся в основном к инвазивным.

1. Известен способ ранней диагностики наружного генитального эндометриоза у женщин (заявка 2003113514, 2004 г.) по определению катепсина D при биопсии эндометрия при его значении 0,1 Ед.о.п./ч и менее.

2. Известен способ диагностики наружного генитального эндометриоза (патент 2219548, 2003 г.) по спектрофотометрическому определению уровня молекул средней массы в перитонеальной жидкости.

3. Известен способ диагностики наружного генитального эндометриоза (патент 2164687, 2001 г.) по исследованию периферической крови больного и определению спонтанной НСТ-активности нейтрофилов после их инкубации с ПАМГ-2.

4. Известен диагностический тест, при котором учитывается абсолютное количество макрофагов в перитонеальной жидкости – 13·10⁶3. – P.185-190).

6. Известен способ диагностики наружного генитального эндометриоза (патент 2265223, 2005 г.). Сущность изобретения состоит в том, что в пробе периферической венозной крови определяют относительное содержание CD45RO+ лимфоцитов и при его значении, равном 31% или менее, диагностируют наружный генитальный эндометриоз.

7. Известен способ диагностики наружного генитального эндометриоза у женщин с бесплодием (патент 2291439, 2007 г.) в периферической венозной крови которых определяют показатель относительного содержания CD16+ моноцитов в моноцитарном гейте и при его значениях, равных или меньших 45%, диагностируют наружный генитальный эндометриоз.

Ранее в качестве потенциальных маркеров эндометриоза было использовано определение в сыворотке крови СА-125, интерлейкина-6 (ИЛ-6), фактора некроза опухоли (ФНО-3, 2007, с.50-54).

Основными недостатками выше описанных способов диагностики НГЭ является прежде всего или инвазивность (4, 5), или необходимость использования дорогостоящей аппаратуры (1), что ограничивает применение методов в практической медицине. К существенным недостаткам в ряде случаев можно отнести сложность расчета или возможность частых ошибок из-за крайне низких значений экстинкций, используемых для расчета величин в единицах оптической плотности (1) и длительность их проведения (2, 4).

3, 2007, с.50-54).

Сущность способа-прототипа состоит в том, что в сыворотке крови и перитонеальной жидкости определяют содержание ФРФ-2, повышенные количества которого могут быть использованы для диагностики НГЭ.

Данный способ обладает рядом несовершенств:

2. Ограничение возможности применения метода (только в крупных перинатальных центрах).

3. Для выполнения метода необходим высококвалифицированный специалист. Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении.

Задача заявляемого изобретения: разработка специфического способа, позволяющего с высокой точностью диагностировать НГЭ.

Поставленная задача решается следующим образом. При лапароскопии получают перитонеальную жидкость, а также производят забор крови у пациентки из локтевой вены, определяют содержание сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР) (иммуноферментным методом наборами «Bender MedSystems» (Austria) по соответствующим протоколам) в сыворотке крови и в перитонеальной жидкости, после чего осуществляют расчет их соотношения, и если его значение больше 4,35, диагностируют НГЭ.

Таким образом, данный диагностический подход может служить существенным фактором, позволяющим при разработке методов диагностики НГЭ у пациенток использовать данное отношение.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами.

Пример 1. Больная П-ая, 25 лет. История болезни 7880/2233. Поступила в гинекологическое отделение 1 РНИИАП 13.12.2005 г.Диагноз: Двусторонние эндометриоидные кисты яичников. Наружный генитальный эндометриоз 4 ст. 14.12.2005 г. проведена лапароскопия: удаление кист обоих яичников, биопсия брюшины, вапоризация очагов эндометриоза. В сыворотке крови и перитонеальной жидкости пациентки определено содержание СЭФР иммуноферментным методом набором «Bender Med Systems» (Austria).

Перед анализом стандарты и образцы исследуемых сывороток разбавляли рабочим буфером. Далее образцы и стандарты вносили в лунки, покрытые AT к исследуемому фактору. После соблюдения необходимых режимов инкубации и промывания в лунки вносили раствор хроматогенного субстрата. После инкубации смеси и развития окраски реакцию останавливали добавлением стоп-раствора, после чего на спектрофлюориметре («Wallac Оу», Финляндия) определяли оптическую плотность растворов. Расчет значений осуществляли по калибровочным кривым, выраженным в пг/мл. Полученные значения умножали на коэффициент разведения образцов.

Содержание СЭФР в сыворотке крови составило 150,5 пг/мл, в перитонеальной жидкости – 34,5 пг/мл. Отношение данных показателей составило 4,36, что позволило диагностировать НГЭ. Гистологическое исследование (17211-17213) подтвердило наличие у пациентки эндометриоза.

Пример 2. Больная Г-ва, 29 лет. История болезни 4693/1499. Поступила в гинекологическое отделение 1 РНИИАП 27.07.2005. Диагноз: Киста правого яичника. Ретроцервикальный эндометриоз. Полип эндометрия. Хронический двусторонний эндосальпингит. Гидатиды обеих маточных труб. 28.07.2005 г. произведена лапароскопия: хромогидротубация, овариолизис, Дренирование и электрокаутеризация капсулы кисты правого яичника. Биопсия брюшины, коагуляция очагов эндометриоза. Гидроперитонеум, дренирование брюшной полости. Выскабливание стенок полости матки.

В сыворотке крови и перитонеальной жидкости пациентки определено содержание СЭФР иммуноферментным методом набором «Вепаег Med Systems» (Austria). Содержание СЭФР в сыворотке крови составило 370,5 пг/мл, в перитонеальной жидкости – 85,2 пг/мл. Отношение данных показателей составило 4,35, что по нашим данным свидетельствовало об отсутствии у данной пациентки НГЭ. Гистологическое исследование 10663-64, 10659, 10660-62 не подтвердило наличие у больной наружного генитального эндометриоза.

Пример 3. Больная Д-ко, 23 лет. История болезни 3981/1244. Поступила в гинекологическое отделение 1 РНИИАП 28.06.2005 г. Диагноз: Наружный генитальный эндометриоз 2 ст. Ретроцервикальный эндометриоз. Киста правого яичника. 29.06.2005 г. произведена лапароскопия – вапоризация очагов эндометриоза, удаление кисты правого яичника.

В сыворотке крови и перитонеальной жидкости пациентки определено содержание СЭФР иммуноферментным методом набором «Bender Med Systems» (Austria). Содержание СЭФР в сыворотке крови составило 559,7 пг/мл, в перитонеальной жидкости – 113,3 пг/мл. Отношение данных показателей составило 4,9, что позволило диагностировать НГЭ. Гистоанализ 8774-79 подтвердил диагноз НГЭ.

По заявляемому способу обследовано 70 пациенток, среди которых у 55 отношение содержания СЭФР в сыворотке крови к СЭФР перитонеальной жидкости было от 4,35 до 4,9 и у 15 – 4,9-5,7. У всех пациенток с определяемым соотношением больше 4,35 имелось гистологическое подтверждение НГЭ.

Вышеизложенное подтверждает диагностическую ценность заявляемого метода.

Таким образом, заявляемый способ более эффективен по сравнению с известными и обладает рядом преимуществ:

1. Метод специфичен. Обладает высокой точностью. В 100% случаев был диагностирован наружный генитальный эндометриоз.

2. Исключает необходимость многократного проведения исследования.

3. Клиническое применение способа позволит своевременно диагностировать НГЭ даже при отрицательном результате гистологического заключения.

4. Метод клинически эффективен и может быть рекомендован к использованию в гинекологической практике.

Формула изобретения

Способ диагностики наружного генитального эндометриоза, включающий исследование сыворотки крови и перитонеальной жидкости, отличающийся тем, что в полученных образцах иммуноферментным методом определяют содержание сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР) и, если отношение содержания СЭФР в сыворотке крови к содержанию СЭФР в перитонеальной жидкости превышает значение 4,35, диагностируют наружный генитальный эндометриоз.