Патент на изобретение №2361214
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДЕТОКСИКАЦИОННОЙ ФУНКЦИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ОЖОГАХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине. Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте заключается в нанесении ожога на 10% поверхности кожи животного, заборе крови и определении в гемолизате эритроцитов коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ка. В случае, если значение Ка при ожоге ниже показателя Ка здоровых животных, судят о снижении детоксикационной функции печени. Изобретение позволяет сделать вывод о детоксикационной функции печени. 1 табл.
Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте. В качестве прототипа выбран способ оценки функционального состояния печени, заключающийся в определении в крови количества альфа-глобулинов (А), альбуминов (В), бета-глобулинов (С) и определении по формуле диагностического критерия – коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота по формуле: Кфсп=А / (А+В+С) (см. патент РФ Однако известный способ является длительным, субъективным и не дает возможности ранней диагностики снижения детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте. Задача предлагаемого изобретения – раннее выявление нарушения детоксикационной функции печени при ожогах. Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем забор крови, в гемолизате эритроцитов измеряют оптическую плотность в течение 1 минуты при длине волны 340 нм и вычисляют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka (мкмоль/мин2) и, если показатель Ka у крыс с ожогом ниже величины Ka здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени. Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте осуществляют следующим образом. Исследования выполнены на 15 половозрелых крысах линии Вистар – самцах массой 180 – 200 г. Контрольная группа представлена животными, не подвергшимися ожогу. Животным опытной группы под тиопенталовым наркозом (30 мг/кг массы) наносят ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час после ожога после декапитации собирают вытекающую из шейных сосудов кровь, стабилизируют ее цитратом натрия (3,8%) в соотношении 9:1, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин, отделяют плазму от эритроцитов. Эритроцитарную массу промывают в 5 мл физиологического раствора. После осаждения (10 мин при 3000 об/мин) удаляют физиологический раствор с 10-15% поверхностно расположенных эритроцитов. Отмытые эритроциты гемолизируют в дистиллированной воде в соотношении 1:40. Затем в спектрофотометрическую кювету помещают 2,8 мл 0,1 М глицин-щелочного буфера (pH 10), 0,05 мл 18 мМ ацетальдегида, 0,1 мл 0,8 мМ окисленного никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и добавляют в смесь 0,05 мл гемолизата крови. Содержимое кюветы (3мл) быстро перемешивают, измеряют величину его оптической плотности при 340 нм с интервалом 15 сек в течение 1 минуты и определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka (мкмоль/мин2) по формуле:
3 – объем пробы в кювете в мл; 106 – коэффициент пересчета моль в мкмоль; 60 – 60 секунд; 6,22×106 – коэффициент молярной экстинкции для восстановленного НАД; t – время измерения, мин;
Ka эритроцитов крови интактных животных принимают за норму, которая составляет 1,70±0,01 мкмоль/мин2. Если показатель Ka у животных с ожогом ниже величины Ka здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени при ожогах. Результаты исследования коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции в гемолизате эритроцитов и печени представлены в таблице.
Из таблицы видно, что коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka в эритроцитах здоровых крыс составил 1,70±0,01 мкмоль/мин2 и идентичен Ka печени интактных крыс. Ka в печени интактных крыс равен 1,79:1:0,02 мкмоль/мин2. При термической травме коэффициент каталитической эффективности эритроцитов снижен и составил 1,34±0,01 мкмоль/мин2, в печени Ka соответственно тоже понижен и равен 1,23±0,01 мкмоль/мин2. Поэтому на основании изучения коэффициента каталитической эффективности эритроцитов можно судить о коэффициенте каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции и соответственно о детоксикационной функции печени животных. Пример конкретного выполнения исследования. Беспородной белой крысе (самец массой 200 г., в таблице
Рассчитывают величину оптической плотности при 340 нм: После этого рассчитывают коэффициент каталитической эффективности альдегид дегидрогеназной реакции по формуле:
Таким образом,
что свидетельствует о снижении детоксикационной функции печени. Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте простой и быстрый в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и большого количества биологического материала.
Формула изобретения
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте путем исследования крови, отличающийся тем, что в гемолизате эритроцитов определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka, и если значение Ka при ожоге ниже показателя Ka здоровых животных, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. – с.21-24. SUGATA К. et al. Determination of aldehydedehydrogenase isozyme activity in human liver. Alcohol. 1988 Jan-Feb; 5(1):39-43. реф., PubMed PMID: 3355667, [он-лайн], [найдено 02.07.2008].
, где
E1 – величина оптической плотности, измеренная за 30 сек.;