Патент на изобретение №2360295
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗДЕЙСТВИЯ БЕЛКА НА ТКАНИ МОЗГА
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а именно к физиологии и фармацевтике, и может быть использовано при изучении патофизиологических процессов в тканях мозга. Подготавливают переживающие срезы мозга, исходно взвешивают их. Инкубируют часть срезов в инкубационной среде с концентрацией белка 5-10 мг/мл в течение 30 мин. Инкубируют все срезы в аутокрови в течение 360 мин. Обсушивают срезы, инкубировавшиеся только в аутокрови, фильтровальной бумагой и взвешивают их. Обсушивают срезы, инкубировавшиеся в инкубационной среде с белком и в аутокрови, фильтровальной бумагой и взвешивают их. Определяют прибавки веса при сопоставлении веса срезов после инкубации с исходными. Сопоставляют прибавки веса срезов после инкубации только в аутокрови и срезов после инкубации в инкубационной среде с белком и в аутокрови с исходным весом срезов. Способ позволяет определить противовоспалительное воздействие белка на ткань мозга при моделировании геморрагического инсульта. 2 табл.
Изобретение относится к физиологии, в частности к способу определения воздействия белка на ткани мозга в эксперименте in vitro. Известен способ определения воздействия белка на ткани мозга [1], принятый за прототип, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации в срезе с исследуемым белком и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных и после воздействия. Цель – определение воздействия белка на ткани мозга при моделировании геморрагического инсульта. Сущность предложенного способа определения воздействия белка на ткани мозга, включающего подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в среде с исследуемым белком и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных с последующими, состоит в исходном взвешивании срезов, инкубации части срезов в среде с белком в концентрации 5-10 мг/мл в течение 30 мин, последующей инкубации всех срезов в аутокрови в течение 360 мин, взвешивании срезов, инкубированных только в аутокрови, обсушивании остальных фильтровальной бумагой и взвешивании обсушенных срезов. При сопоставлении веса срезов, инкубированных только с аутокровью, с исходными определяют прибавку их веса. При сопоставлении обсушенных срезов с весом срезов, не подвергавшихся воздействию белка, определяют способность белка защищать клетки мозга от развития в них воспалительного процесса при смоделированном геморрагическом инсульте. Способ поясняется примером определения воздействия на ткани мозга белка теплового шока с молекулярным весом 70 кДа (БТШ70) и дипептида L-карнозина. Пример 1. Определение воздействия белка БТШ70 на ткани мозга. Все переживающие срезы нервных клеток мозга крыс после их приготовления взвешивают на торсионных весах ВТ-500, часть срезов помещают в стеклянные виалы с БТШ70 в концентрации 10 мг/мл, растворимым в физиологическом растворе объемом 1 мл, и выдерживают в нем 30 мин. Виалы устанавливают в аппарате Варбурга “WA-0110” с температурой водяной бани 37±0,2°С и с частотой горизонтального качания 120/мин. Затем инкубационную среду заменяют на аутокровь объемом 2 мл и все срезы в ней выдерживают 360 мин, что моделирует геморрагический инсульт, а 360 мин – продолжительность “терапевтического окна”, после которого наступают необратимые нарушения функционирования нервных клеток. Затем срезы извлекают из аутокрови, обсушивают фильтровальной бумагой и снова взвешивают. При сопоставлении веса срезов после инкубации только с аутокровью с исходными определяют прибавку их веса, их набухание и, соответственно, воспаления. При сопоставлении веса срезов, прошедших предварительную инкубацию с БТШ70, а затем уже с аутокровью определяют способность белка защищать клетки мозга от развития в них воспалительного процесса при смоделированном геморрагическом инсульте. Результаты взвешиваний и сопоставление прибавок веса приведены в таблице 1.
Как видно из представленных данных в таблице, аутокровь вызывает значительное набухание нервных клеток, эти данные статистически достоверно отличаются (U=12, n=8 – контроль, n=12 – аутокровь; p Отметим, что при действии БТШ70 процесс набухания срезов ингибировался и составлял не более 18% по сравнению с исходным весом. Следовательно, БТШ70 является надежным нейропротективным, антивоспалительным препаратом при моделировании геморрагического инсульта. Пример 2. Определение воздействия белка дипептида L-карнозина на ткани мозга. Все подготовленные переживающие срезы нервных клеток мозга крыс взвешивают исходно на торсионных весах ВТ-500, затем помещают часть срезов в виалы с L-карнозином в концентрации 5 мг/мл, растворенным в физиологическом растворе объемом 1 мл, и выдерживают в нем 30 мин. Затем все срезы выдерживают 360 мин – продолжительность “терапевтического окна” – в аутокрови. После этого срезы, не инкубировавшиеся в L-карнозине, взвешивают, а остальные – обсушивают фильтровальной бумагой и уже после этого взвешивают. При сопоставлении веса срезов после инкубации с аутокровью и исходного определяли прибавку веса за счет их набухания, характерного для воспаления. При сопоставлении веса срезов, прошедших предварительную инкубацию с L-карнозином, а затем уже с аутокровью, определяют способность дипептида L-карнозина защищать клетки мозга от развития в них воспалительного процесса при смоделированном геморрагическом инсульте. Результаты взвешиваний и сопоставлений прибавок веса приведены в таблице 2.
Как видно из представленных данных в таблице, аутокровь вызывает значительное набухание нервных клеток, что свидетельствует о развитии процессов воспаления в них. Различия в весе срезов после инкубации в крови достоверно отличаются от контрольных значений (U=27, n=8 – контроль, n=12 – аутокровь; p Предварительное воздействие на нервные клетки L-карнозина до действия аутокрови протестирует их от сильного набухания и, следовательно, от развития в них воспалительных процессов. Эти данные статистически достоверно отличаются от контроля (U=19, n=8 – контроль, n=16 – L-карнозин; p Необходимо отметить, что БТШ70 и L-карнозин имеют эндогенное происхождение и, следовательно, не будут вызывать негативных побочных эффектов, кроме того, известно, что дипептид L-карнозин выполняет функции антиоксиданта [2, 3, 4]. Эти качества придают дополнительные преимущества этим веществам при их использовании в качестве антигеморрагического терапевтического средства при моделировании геморрагического инсульта. Источники информации
2. Болдырев А.А. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине. М.: Изд-во МГУ, 1998. 320 с. Формула изобретения
Способ определения противовоспалительного воздействия белка на ткань мозга при моделировании геморрагического инсульта, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в инкубационной среде с белком, и определение воздействия по сопоставлению исходных параметров и параметров после воздействия белком, отличающийся тем, что
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2, 2005, с.3-26. ЕКИМОВА И.В. и др. Белок теплового шока 70 кДа ускоряет восстановление цикла бодрствование-сон и ослабляет эпилептиформную активность мозга при гиперактивации глутаматныхрецепторов. Актуальные проблемы сомнологии, тезисы докладов V Всероссийской конференции 23-24 ноября 2006 г., с.35-36 SUGA S et al., Postischemic hyperthermia increases expression of hsp72 mRNA after brief ischemia in the gerbil, Neurosci Lett, 1998 Feb, 243(1-3), p.57-60.
0,05), что свидетельствует о развитии процессов воспаления в них. Предварительное воздействие на нервные клетки БТШ70 до действия крови протектирует их от сильного набухания и, следовательно, от развития воспалительных процессов в них, различия в весе при этом являются недостоверными (U=25, n=8 – контроль, n=16 – БТШ70; p
0,05). Это свидетельствует о выраженных антивоспалительных свойствах БТШ70.