Патент на изобретение №2359618

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ У ДЛИТЕЛЬНО КУРЯЩИХ ЛИЦ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к пульмонологии, и может быть использовано для оценки прогнозирования риска развития хронической обструктивной болезни легких. Способ обеспечивает повышение точности прогноза ХОБЛ у длительно курящих лиц. Проводят исследование мокроты пациента. При этом определяют уровень активности ₁-антитрипсина и дополнительно определяют уровень активности ₂-макроглобулина и при значениях ₁=341,17±41,77 мИЕ/мл и ₂=76,81±6,84 мИЕ/мл и выше прогнозируют риск развития ХОБЛ.

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии и пульмонологии, и может быть использовано для оценки прогнозирования риска развития ХОБЛ у длительно курящих лиц.

Известен способ прогнозирования развития ХОБЛ среди лиц, не имеющих признаков бронхообструкции [1]. Сущность известного способа заключается в том, что определяют клинические симптомы и факторы риска из анамнеза жизни: одышка, пассивное курение, продукция мокроты, кашель, свистящие хрипы, эпизоды кашля с мокротой, длящиеся больше 3-х недель, пол, храп. Устанавливают их градации и числовые значения. Затем определяют прогностические коэффициенты F₁, F₂, F₃, F₄ и при F₄ больше F₁, или F₂, или F₃ прогнозируют высокий риск возможности развития ХОБЛ, при значении F₂ больше F₁, или F₃, или F₄ – низкий риск возможности развития ХОБЛ.

Известен также способ прогнозирования развития хронической обструктивной болезни легких среди курящих лиц [2]. Его сущность заключается в том, что определяют клинические симптомы и факторы риска из анамнеза жизни: показатель пачко/лет – A₁; степень интенсивности курения – А₂, количество выкуриваемых сигарет в день – А₃; какие сигареты курит – А₄; стаж курения в годах – А₅; наличие одышки или хрипов – А₆; сколько выкуривает от длины сигарет – А₇; изменилось ли количество выкуриваемых сигарет за последние пять лет – A₈; вдыхание сигаретного дыма – А₉; наличие мокроты – А₁₀; как часто отделяется мокрота – А₁₀; степень никотиновой зависимости в баллах по тесту Фагерстрема – A₁₂. Устанавливают их числовые значения. Затем определяют прогностические коэффициенты F₁, F₂, F₃ и при F₃ или F₂ больше F₁ прогнозируют высокий риск возможности развития ХОБЛ, при величине F₁ больше F₂ или F₃ прогнозируют низкий риск возможности развития ХОБЛ.

Недостатками известных способов является то, что они разрабатывались, основываясь на оценке клинических симптомов и факторов риска из анамнеза жизни, которые выявлялись в результате опроса пациентов, больных ХОБЛ, и носили субъективный характер.

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения факторов риска развития и протекторных факторов хронической обструктивной болезни легких на основании изучения некоторых генно-фенотипических маркерных систем [3]. Способ заключается в оценке у больных ХОБЛ и здоровых людей антропометрических характеристик и признаков дисплазии соединительной ткани; изучении особенности распределения генетических маркеров (эритроцитарных антигенов систем АВ0, MN, Rh, типа ушной серы, цвета волос и радужной оболочки глаза); определении уровней активности ₁-антитрипсина и общего иммуноглобулина Е в сыворотке крови; изучении значимости фактора курения, особенностей никотиновой зависимости и их связи с генетическими маркерами у больных ХОБЛ.

Недостатком известного способа является то, что в качестве группы сравнения использовались практически здоровые некурящие добровольцы, а не длительно курящие люди с высоким риском развития хронической обструктивной болезни легких, что снижает точность способа.

Новая техническая задача заключается в повышении точности способа.

Для решения поставленной задачи в способе прогнозирования риска развития ХОБЛ у длительно курящих лиц путем исследования биологических жидкостей пациентов и определения уровня активности ₁-антитрипсина проводят исследование мокроты, дополнительно определяют уровень активности ₂-макроглобулина и при значениях _l=341,17±41,77 мИЕ/мл и ₂=76,81±6,84 мИЕ/мл и выше прогнозируют низкий риск развития ХОБЛ.

Новым в способе является то, что проводят исследование мокроты, дополнительно определяют уровень активности ₂-макроглобулина и при значениях ₁=341,17±41,77 мИЕ/мл и ₂=76,81±6,84 мИЕ/мл и выше прогнозируют низкий риск развития ХОБЛ.

Способ осуществляют следующим образом: производят забор мокроты у пациента и по методике [4] определяют уровень активности ₁-антитрипсина и уровень активности ₂-макроглобулина.

Определение уровня активности ₁-антитрипсина

Активность ₁-AT определяют по торможению аргинин-эстеразной активности трипсина.

Готовят две опытные пробы. Одна из которых содержит 1,9 мл 0,05 М трис HCl буфера рН 8.0 и 0,1 мл 0,01% раствора трипсина, а вторая – 1,8 мл 0,05 трис HCl буфера. 0,1 мл 0,01% раствора трипсина и 0,1 мл мокроты выдерживают 5 минут при 25°С, затем добавляют по 1 мл 1,5 мМ раствора БАЭЭ. Контрольная проба содержит 2 мл 0,05 М трис-HCl буфера и 1 мл 1,5 мМ раствора БАЭЭ. При длине волны 253 нм измеряют прирост оптической плотности опытных проб против контроля в течение 1 минуты. Расчет ингибиторной активности проводят по формуле:

₁-антитрипсин=(V₁-V₂)·2,73 мИЕ / мл,

где V₁, V₂ – прирост оптической плотности 1 и 2 опытных проб за 1 минуту;

2,73 – расчетный коэффициент.

Определение уровня активности ₂-макроглобулина

Активность ₂-макроглобулина определяют по сохраняющейся аргинин-эстеразной активности комплекса трипсин-₂-макроглобулин. Комплекс трипсин-₂-макроглобулин способен гидролизовать синтетический субстрат БАЭЭ, что выражается в увеличении оптической плотности при длине волны 253 нм.

К 1,8 мл 0,05 М трис-HCl буфера рН 8,0 добавляют 0,1 мл разведенной мокроты и 0,05 мл 0,1% раствора трипсина. Инкубируют 5 минут при 25°С для образования комплекса ингибитор-трипсин. После чего добавляют 0,1 мл 0,3% раствора ингибитора из сои, перемешивают и через 5 минут добавляют 1 мл 1,5 мМ раствора БАЭЭ. Измеряют прирост оптической плотности при длине волны 253 нм в течение 10 минут. Активность ингибитора рассчитывают по формуле:

₂-макроглобулин=Е₂₅₃·0,546 мИЕ / мл,

где Е₂₅₃ – прирост оптической плотности за 10 минут;

2,73 – расчетный коэффициент.

Вычисляют значения ₁ и ₂ и при значениях ₁=341,17±41,77 мИЕ/мл и ₂=76,81±6,84 мИЕ/мл и выше прогнозируют низкий уровень развития ХОБЛ.

Предлагаемый способ прогнозирования риска развития ХОБЛ у длительно курящих лиц поясняется конкретными примерами.

Пример 1. Мужчина К., 53 года. Обследование проводилось в порядке очередной диспансеризации. Профессия – электромонтажник. Стаж курения 30 лет. Предъявлял жалобы на кашель по утрам с отделением небольшого количества (2-3 мл) бесцветной мокроты. Объективное обследование органов дыхания: грудная клетка правильной формы, симметрично активна в дыхании, перкуторно над легкими легочный звук, дыхание везикулярное, хрипы не выслушиваются. Заключение: при физическом обследовании органов дыхания патологических изменений не вывялено. Общий анализ крови: лейкоциты – 6,7×10⁹/л; эритроциты – 5,32×10¹²/л; гемоглобин – 136 г/л; тромбоциты – 250×10⁹%; СОЭ – 6 мм/час; лейкоцитарная формула: палочкоядерные нейтрофилы – 4%, сегментоядерные нейтрофилы – 67%, эозинофилы – 1%, базофилы – 0%, моноциты – 1%, лимфоциты – 27%. Анализ мочи: цвет – соломенно-желтый, прозрачная, плотность – 1022, белок – не определяется, сахара – не определяются; микроскопия: лейкоциты 1-1-0, эритроциты 1-0-0 в поле зрения. Заключение: показатели общего анализа крови, мочи в пределах нормы. ЭКГ: ритм синусовый, правильный, ЧСС – 72 в 1 минуту, электрическая ось сердца не отклонена; заключение: ЭКГ в пределах нормы. По предлагаемому способу было проведено исследование мокроты на активность ингибиторов протеиназ и установлено, что уровень активности ₁-антитрипсина составил 341,17 мИЕ/мл и ₂-макроглобулина

76,81 мИЕ/мл, что позволяет прогнозировать у пациента низкий уровень риска развития ХОБЛ. При углубленном обследовании пациенту была проведена спирография, показатели которой составляли: ОФВ-1 – 86,2% от должных величин, индекс Тиффно – 78,6%, что соответствует норме. На этом основании сделано заключение об отсутствии хронической обструктивной болезни легких. При последующих диспансеризациях в течение 2 лет диагноз ХОБЛ также не был подтвержден.

Пример 2. Пациент С., мужчина, 55 лет, преподаватель. Стаж курения 31 год. Наблюдался в течение 4-х лет. Предъявлял жалобы на продуктивный кашель в течение дня, больше в утренние часы. Последние 2 года стал отмечать одышку при повышенной физической нагрузке. Общий анализ крови: лейкоциты – 7,2×10⁹/л; эритроциты – 5,65×10¹²/л, гемоглобин – 155 г/л; тромбоциты 228×10⁹%; СОЭ – 8 мм/час, лейкоцитарная формула: палочкоядерные нейтрофилы – 2%, сегментоядерные нейтрофилы – 63%, эозинофилы – 2%, базофилы – 0%, моноциты – 1%, лимфоциты – 33%. Анализ мочи: цвет – желтый, прозрачная, плотность – 1024, белок – не определяется, сахара – не определяются; микроскопия: лейкоциты 0-1-0, эритроциты 0-1 в поле зрения. Заключение: показатели общего анализа крови, мочи в пределах нормы. ЭКГ: ритм синусовый, правильный, ЧСС – 66 в минуту, отклонение электрической оси сердца влево, ЭКГ в пределах нормы. За время наблюдения трижды проводилось исследование мокроты на активность ингибиторов протеиназ по предлагаемому способу. Активность ₁-антитрипсина составляла 92,8-78,0 мИЕ/мл и ₂-макроглобулина – 22,1-14,4 мИЕ/мл, что позволяло прогнозировать у С. высокий уровень риска развития хронической обструктивной болезни легких, учитывая большую длительность курения. В первые два года наблюдения показатели спирографии находились в пределах нормы: ОФВ-1 составлял 81-84% от должных величин, индекс Тиффно – был более 70%. На основании этого у пациента диагностировался хронический необструктивный бронхит. Четыре года спустя от начала обследования на спирограммах было выявлено снижение вентиляционных показателей: ОФВ-1 до 65,4% от должной величины, индекса Тиффно до 68,2%. Спирографическая проба с бронхолитиками была отрицательна, что свидетельствовало о необратимости бронхиальной обструкции. Указанные функциональные тесты в совокупности с клинической картиной заболевания (появление одышки при повышенной физической нагрузке, продуктивный кашель) соответствовали диагнозу: хроническая обструктивная болезнь легких 2 стадии, стабильная фаза. Таким образом, прогноз высокого риска хронической обструктивной болезни легких у пациента С., сделанный по предлагаемому способу, на основании стабильно низкой активности антипротеиназ в мокроте, был подтвержден развитием болезни.

Под наблюдением находилось 30 человек (группа длительно курящих). Они были обследованы (объективное обследование, общий анализ крови, спирография) на выявление ХОБЛ. После традиционного обследования у всех пациентов было выявлено наличие продуктивного кашля с небольшим количеством мокроты, преимущественно по утрам. По результатам на момент обследования у всех пациентов этой группы установлено отсутствие ХОБЛ, прогнозировать на основании традиционных тестов развитие ХОБЛ в дальнейшем не представлялось возможным. Одновременно с традиционным обследованием было проведено обследование согласно предлагаемому способу с определением уровня активности ₁-антитрипсина и ₂-макроглобулина. У 24 пациентов уровень активности ₁-антитрипсина составил 341,17±41,77, ₂-макроглобулина – 76,81±6,84, у 6 пациентов ₁-антитрипсина -80,24±10,51, ₂-макроглобулина – 19,44±5,11.

По результатам обследования по предлагаемому способу можно было прогнозировать возникновение ХОБЛ у пациентов в 20% случаев (6 пациентов). Пациенты наблюдались в течение 2,9-3,8 лет в рамках ежегодных медосмотров. В течение этого времени было подтверждено возникновение ХОБЛ у 6 пациентов с ранними (1-2) стадиями заболевания ХОБЛ, у остальных 24 пациентов в течение наблюдаемого периода времени признаков заболевания ХОБЛ не обнаружено, что позволяет говорить о более точном прогнозировании риска развития ХОБЛ у длительно курящих лиц при использовании предлагаемого способа.

Риск развития ХОБЛ у курильщиков зависит от активности системы «протеиназных ингибиторов» индивида. Уровень активности ₁-антитрипсина=341,17±41,77 мИЕ/мл и ₂-макроглобулина=76,81±6,84 мИЕ/мл и выше в мокроте свидетельствуют о низком риске развития хронической обструктивной болезни легких. Меньшая концентрация указанных антипротеиназ указывает на высокий риск формирования ХОБЛ.

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность повысить точность прогнозирования риска развития ХОБЛ у длительно курящих лиц, не имеющих функциональных признаков бронхиальной обструкции, что позволяет проводить раннюю профилактику этого заболевания.

Литература

1. RU 2303956 С1, Краснова Ю.Н. и др. «Способ прогнозирования развития хронической обструктивной болезни легких у лиц, не имеющих функциональных признаков болезни легких среди курящих лиц», 2007.08.10.

2. RU 2303957 С1, Гримайлова Е.В. и др. «Способ прогнозирования развития хронической обструктивной болезни легких среди курящих лиц», 2007.08.10.

3. Рыбас А.В. «Генно-фенотипические маркерные системы у больных хронической обструктивной болезнью легких», автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, Астрахань, 2007 г. (прототип).

4. Нартикова В.Ф., Пасхина Т.С. «Методика определения активности a₁-AT по торможению аргинин-эстеразной активности трипсина». Вопросы медицинской химии, 1979 г., 25, стр.499-502.

Формула изобретения

Способ прогнозирования риска развития хронической обструктивной болезни легких у длительно курящих лиц путем исследования биологических жидкостей пациентов, включающий определение уровня активности ₁-антитрипсина, отличающийся тем, что проводят исследование мокроты, дополнительно определяют уровень активности ₂-макроглобулина и при значениях ₁=341,17±41,77 мИЕ/мл и ₂=76,81±6,84 мИЕ/мл и выше прогнозируют риск развития ХОБЛ.