Патент на изобретение №2359273

(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ФОРМ ХРОНИЧЕСКОГО АБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРОСТАТИТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно, урологии, и может быть использовано при дифференциальной диагностике форм хронического абактериального простатита. Сущность способа: в крови обследуемого определяют содержание оксида азота, высвобождаемого макрофагальной NO-синтазой. При содержании выработанного NO фагоцитирующими клетками крови от 23 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и выше диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при содержании от 16 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и ниже – ХАП невоспалительной формы. Использование способа позволяет проводить дифференциальную диагностику форм абактериального простатита с высокой достоверностью и информативностью.

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в урологии, в частности при дифференциальной диагностике форм хронического абактериального простатита.

По данным статистики за последние 20 лет заболеваемость простатитом возросла примерно вдвое и на сегодняшний день им страдает едва ли не половина мужского населения в возрасте от 20 до 50 лет, если учесть тот факт, что первые проявления болезни не особенно специфичны и не слишком выражены, а многие больные предпочитают не обращаться к врачу.

Хронический простатит относится к заболеваниям с высокой социальной значимостью, так как у многих мужчин, страдающих этой болезнью, возникают проблемы с половой жизнью, созданием семьи и репродуктивной функцией в целом.

Современная медицина не располагает углубленными и достоверными сведениями относительно причинных факторов и механизмов развития хронического простатита, особенно абактериального.

В большинстве случаев хронического простатита его этиология, патогенез и патофизиология остаются неизвестными (Nickel J.C.: Простатит: инфекционное заболевание? Infect Urol 2000a; 13: 31-38).

Наиболее распространенной на сегодняшний день в мире является предложенная Национальным Институтом Здоровья США (1995 г.) классификация, в которой особенно выделяется категория III – хронический абактериальный простатит с воспалительным компонентом и без оного (Лоран О.Б., Сегал А.С. Хронический простатит. В кн.: Х Российский съезд урологов. Материалы: Простатит. Москва, 1-3 октября 2002 г. М. 2004. 209-222).

В настоящее время основными методами диагностики хронического простатита являются микроскопические, бактериологические и иммунологические методы исследования мочи, секрета предстательной железы, эякулята, крови.

При изучении доступной медицинской и патентной литературы выявлены различные способы диагностики хронического простатита.

Так, в патенте РФ 2103691 (МПК G01N 33/53, 33/48, 1998 г., БИПМ 3) описан «Способ диагностики хронического простатита», предусматривающий определение уровня растворимого антигена лейкоцитов – 2 (РАЛ-2) в сперме. При его содержании 20 мкг/мл и выше диагностируют хронический простатит.

В патенте РФ 2210779 (МПК G01N 33/92, 2003 г., БИПМ 23) описан «Способ диагностики активности течения хронического простатита», при котором проводят исследование секрета предстательной железы, при этом в нем определяют концентрацию диеновых конъюгатов и шиффовых оснований, рассчитывают коэффициент активности воспаления. При уменьшении его значения активность течения хронического простатита увеличивается.

Недостатками указанных способов является неточность диагностики различных форм хронического простатита.

Наиболее близким техническим решением, взятым нами в качестве прототипа, является “Способ диагностики хронического абактериального простатита”, защищенный патентом РФ 2272294 (МПК G01N 33/573, 2006 г., БИПМ 8), предусматривающий клиническое обследование и исследование крови. В сыворотке крови определяют активность калликреина, и в зависимости от его значения диагностируют или воспалительную или невоспалительную формы ХАП.

Недостатком данного способа диагностики хронического простатита является его недостаточная достоверность в трудных для дифференциальной диагностики случаях определения форм хронического абактериального простатита.

Целью настоящего изобретения является повышение достоверности дифференциальной диагностики форм хронического абактериального простатита (ХАП).

Эта цель достигается путем клинического обследования и исследования крови, в которой определяют содержание оксида азота, высвобождаемого макрофагальной NO-синтазой. При содержании выработанного NO фагоцитирующими клетками крови от 23 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и выше диагностируют хронический абактериальный простатит воспалительной формы, а при содержании от 16 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и ниже – ХАП невоспалительной формы.

Клинические обследования добровольцев – здоровых мужчин позволили установить, что содержание оксида азота, освобождаемой макрофагальной NO-синтазой в крови составляет в среднем 18 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3.

1. – С.48-50) следующим образом. Для получения суспензии лейкоцитов гепаринизированную кровь отстаивают в течение двух часов, после чего аккуратно собирают автоматической пипеткой на 1 мл всю плазму, включая пограничный слой с эритроцитами, не затрагивая красные клетки крови. Плазму помещают в пробирку и центрифугируют 15 минут при скорости 1500 оборотов в минуту. Осевшие лейкоциты собирают автоматической микропипеткой на 0,1 мл, после чего помещают их в пробирку с 2 мл холодного физиологического раствора для отмывки клеток и центрифугируют 15 минут при скорости 1500 оборотов в минуту. Супернатант аккуратно удаляют, а из придонных клеток в небольшом количестве жидкости делают суспензию путем умеренного взбалтывания, не вызывая сильного пенообразования. Стандартизацию производят путем подсчета числа клеток в камере Горяева и соответствующего разведения материала физиологическим раствором, после чего получают рабочую суспензию лейкоцитов.

Выделенную по вышеописанному методу рабочую суспензию лейкоцитов смешивают в равных объемах с раствором L-аргинина гидрохлорида в физиологическом растворе (2:1) и помещают в специальный инкубатор-термостат; инкубируют при температуре 37 градусов Цельсия в течение 24 часов. О выработке NO судят по качественной реакции на нитриты с помощью реактива Грисса. Количество, т.е. содержание, выражают в [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3.

При содержании выработанного NO фагоцитирующими клетками крови от 23 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и выше диагностируют хронический абактериальный простатит воспалительной формы, а при содержании от 16 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и ниже – ХАП невоспалительной формы.

Практическая реализуемость предлагаемого способа иллюстрируется примерами из клинической практики.

Пример 1.

Больной Ф., 27 лет. Жалобы: боли в промежности и паховых областях. Анамнез: считает себя больным в течение года. Полгода назад был проведен курс консервативного лечения с положительным эффектом. Повторное появление болей отметил 4 месяца назад.

Больному было проведено обследование согласно заявляемому способу.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании – железа тестоватой консистенции, симметрична, обычной формы, болезненна.

Индекс простатических симптомов (ИПС) – 21.

Лабораторная диагностика: простато-специфический антиген (ПСА) – 0,13 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey:

1 – порция мочи (ПМ) – 0-1 лейкоцитов в поле зрения, уропатогенная микрофлора не была обнаружена.

2-ПМ – 0-1 лейкоцитов в поле зрения, уропатогенная микрофлора не была обнаружена.

Секрет простаты (СП) – до 30 лейкоцитов в поле зрения, уропатогенная микрофлора не была обнаружена.

3-ПМ – до 50 лейкоцитов в поле зрения, уропатогенная микрофлора не была обнаружена.

Содержание выработанного NO фагоцитирующими клетками крови оксида азота, определенное по методу Шебзухова Ю.В. и соавт. (1998) составило 28,7 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3.

Больному был поставлен диагноз: хронический абактериальный простатит воспалительной формы, назначено соответствующее лечение, результаты которого подтвердили правильность поставленного диагноза.

Пример 2.

Больной К., возраст: 29 лет. Жалобы: на боли в промежности, крестцовой области. Анамнез: считает себя больным около 5 месяцев. К урологу не обращался.

Больному было проведено обследование согласно заявляемому способу.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании – предстательная железа незначительно увеличена в размерах, болезненная.

ИПС-29.

Лабораторная диагностика: ПСА – 0,09 нг/мл. Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey:

1-ПМ – 0-1 лейкоцитов в поле зрения, уропатогенная микрофлора не была обнаружена.

2-ПМ – 0-1 лейкоцитов в поле зрения, уропатогенная микрофлора не была обнаружена.

СП – 1-2 лейкоцитов в поле зрения, уропатогенная микрофлора не была обнаружена.

3-ПМ – 4-5 лейкоцитов в поле зрения, уропатогенная микрофлора не была обнаружена.

Содержание выработанного NO фагоцитирующими клетками крови оксида азота, определенное по методу Шебзухова Ю.В. и соавт. (1998) составило 13,2 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3.

Больному был поставлен диагноз: хронический абактериальный простатит невоспалительной формы, назначено соответствующее лечение, результаты которого подтвердили правильность поставленного диагноза.

Преимущество предлагаемого способа по сравнению с прототипом состоит в том, что он позволяет более достоверно проводить дифференциальную диагностику форм хронического абактериального простатита, и в зависимости от поставленного диагноза определять тактику лечения.

В макрофагах, нейтрофилах, гепатоцитах, мезангиальных и гладкомышечных клетках синтез оксида азота определяет индуцибельная NO-синтаза, при стимуляции которой продукция оксида азота может возрастать в десятки раз, при этом оксид азота приобретает цитотоксические свойства, превращаясь в пероксинитрит. Образовавшийся оксид азота в условиях оксидативного стресса с наибольшей скоростью реагирует с супероксидным анион-радикалом и переходными металлами: гемовыми комплексами железа и меди, железосерными структурами. Реакция оксида азота с супероксидом протекает с большой скоростью, при этом образуется пероксинитрит.

Пероксинитрит окисляет железосерные активные центры, тиолы и нитрозилирует белки по остаткам тирозина. В нейтральной среде пероксинитрит достаточно нестабилен и после протонирования разлагается с образованием гидроксильного радикала – короткоживущего и исключительно реакционно-способного интермедиата.

Цитотоксическое действие оксида азота подобно эффекту других активных форм кислорода может проявляться и в отношении собственных клеток организма.

Предлагаемый способ был апробирован на 33 больных и показал высокую информативность и достоверность дифференциальной диагностики форм хронического абактериального простатита.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики форм хронического абактериального простатита, предусматривающий клиническое обследование и исследование крови, отличающийся тем, что в крови определяют содержание оксида азота, высвобождаемого макрофагальной NO-синтазой и при содержании выработанного NO фагоцитирующими клетками крови от 23 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и выше диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при содержании от 16 [н/М 2·10⁵ клеток]·10^-3 и ниже – ХАП невоспалительной формы.