Патент на изобретение №2359272
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗДЕЙСТВИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ВЕЩЕСТВА (БАВ) НА ТКАНЬ МОЗГА
(57) Реферат:
Изобретение относится к физиологии и фармацевтике и может быть использовано при изучении патофизиологических процессов в тканях мозга. Для осуществления способа подготавливают переживающие срезы мозга, регистрируют исходные и последующие параметры после инкубации срезов в среде с исследуемым веществом и определяют воздействие по сопоставлению параметров исходных и после воздействия тестируемого вещества. Для чего проводят исходное взвешивание срезов, инкубируют часть срезов в среде с десятипроцентным раствором альфа-Токоферол-ацетата объемом 0,7 мг/мл, нагретым до 37±0,2°С и растворенным в Tween-20 в инкубационной среде объемом 1 мл в течение 30 мин. Затем инкубируют все срезы в аутокрови в течение 360 мин. После чего взвешивают срезы, инкубировавшиеся только в аутокрови. Остальные срезы обсушивают фильтровальной бумагой и потом взвешивают. Определяют изменение веса срезов от воздействия только аутокровью и от воздействия альфа-Токоферол-ацетата, перед аутокровью. По изменениям веса определяют антивоспалительное воздействие альфа-Токоферол-ацетата при смоделированном геморрагическом инсульте. Использование изобретения позволяет определять нейропротективные, антивоспалительные свойства альфа-Токоферол-ацетата при моделировании геморрагического инсульта. 1 табл.
Изобретение относится к физиологии, в частности к способу определения воздействия белка на ткань мозга в эксперименте in vitro. Известен способ определения воздействия БАВ, белка на ткани мозга [1], принятый за прототип, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров, после инкубации в среде с исследуемым белком, и определению воздействия по сопоставлению параметров исходных и после воздействия. Цель – определение воздействия на ткань мозга БАВ – альфа-Токоферол-ацетат (витамин Е) при моделировании геморрагического инсульта. Сущность предложенного способа определения воздействия БАВ на ткань мозга, включающего подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в среде с исследуемым веществом и определение воздействия по сопоставлению параметров исходных с последующими, состоит в исходном взвешивании срезов, инкубации части срезов в среде с альфа-Токоферол-ацетатом десятипроцентного раствора объемом 0,7 мг/мл, нагретым до 37±0,2°С и растворенным в Tween-20 в инкубационной среде объемом 1 мл в течение 30 мин, последующей инкубации всех срезов в аутокрови в течение 360 мин, взвешивании срезов, инкубированных только в аутокрови, обсушивании остальных фильтровальной бумагой и взвешивании обсушенных срезов. При сопоставлении весов срезов, инкубированных только с аутокровью с исходными, определяют прибавку их веса. При сопоставлении обсушенных срезов с весами срезов, не подвергавшихся воздействию альфа-Токоферол-ацетатом, определяют способность альфа-Токоферол-ацетата защищать клетки мозга от развития в них воспалительного процесса при смоделированном геморрагическом инсульте. Установлено, что использование в клинических условиях альфа-Токоферол-ацетата в качестве нейропротективного вещества для лечения нервных клеток от последствий геморрагического и ишемического инсультов является неэффективным. Во всех случаях используется жирорастворимая форма альфа-Токоферол-ацетата, поскольку активность альфа-Токоферол-ацетата снижается в жирорастворимой форме за счет того, что плохо усваивается в организме и, соответственно, не проявляет нейропротективных качеств при развитии геморрагического инсульта. Способ поясняется примером определения воздействия на ткань мозга альфа-Токоферол-ацетата. 10% раствор альфа-Токоферол-ацетата нагревали до 37±0,2°С и растворяли в Tween-20 (неионный детергент) для получения водорастворимой формы. Срезы выдерживали в инкубационной среде с подготовленным альфа-Токоферол-ацетатом в течение 30 мин, это время установлено эмпирически. Срезы выдерживали в аутокрови в течение 360 мин, указанное время соответствует «терапевтическому окну», после которого наступают необратимые нарушения функционирования нервных клеток.
Как видно из представленных данных в таблице, кровь вызывает значительное набухание нервных клеток, что свидетельствует о развитии процессов воспаления в них. Однако предварительное воздействие на нервные клетки водорастворимой формы альфа-Токоферол-ацетата до действия аутокрови защищает их от набухания и, следовательно, от развития воспалительных процессов. Это свидетельствует о выраженных антивоспалительных свойствах этого вещества при моделировании геморрагического инсульта. Отметим, что действием альфа-Токоферол-ацетата процесс набухания и увеличения веса срезов ингибировали и он составлял не более 5% по сравнению с исходным весом. Статистически эти различия недостоверны: U=7, р Необходимо отметить, что альфа-Токоферол-ацетат имеет эндогенное происхождение, это качество придаст дополнительное преимущество этому веществу при его использовании в качестве антигеморрагического средства при моделировании геморрагического инсульта. Изобретение позволяет рекомендовать использование альфа-Токоферол-ацетата в качестве активного компонента к антигеморрагическому препарату для проведения преклинических испытаний. Литература
Формула изобретения
Способ определения воздействия биологически активного вещества (БАВ) на ткань мозга, включающий подготовку переживающих срезов мозга, регистрацию исходных и последующих параметров после инкубации срезов в инкубационной среде с тестируемым веществом, определение воздействия по сопоставлению параметров исходных и после воздействия веществом, отличающийся тем, что
|
||||||||||||||||||||||||||
3, с.419-422. RU 2005133737 А, 10.05.2007. SU 4884671 A1, 07.10.1992. FLECKENSTEIN AE et al Comparison of the efficacy of mechanistically differentantioxidants in the rat hemorrhagic shock model., Circ Shock. 1991 Dec; 35(4):223-30, PMID: 1777958 [PubMed – indexed for MEDLINE]. DAUGHTERS К et al. Anti-oxidant treatment for shock: vitamin E but not vitamin С improves survival., Am Surg. 1996 Oct; 62(10):789-92., PMID: 8813156 [PubMed – indexed for MEDLINE]. SAGACH VF et al The water-soluble vitamin E analogue Trolox protects against ischaemia/reperfusion damage in vitro and ex vivo. A comparison with vitamin E., Pharmacol Res. 2002 Jun; 45(6):435-9., PMID: 12162942 [PubMed – indexed for MEDLINE].
0,05. Следовательно, альфа-Токоферол-ацетат, подготовленный предложенным способом, является эффективным нейропротективным, антивоспалительным препаратом.