Патент на изобретение №2357756

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ГЕМОФИЛЕЗА, СТРЕПТОКОККОЗА И ПАСТЕРЕЛЛЕЗА СВИНЕЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida серовариантов А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров I и II, Streptococcus suis серовара II (штамм Касли), грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта. При этом в качестве продуцентов используют волов, а гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных тел с интервалом 2-3 дня. Грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных тел, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см³ гидроокиси алюминия. Способ нетрудоемок, прост в исполнении, позволяет увеличить выход сыворотки в 3,2-3,5 раза. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней. Известен способ изготовления гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, получаемой от продуцентов свиней (RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 – прототип).

Однако данный способ экономически нецелесообразен, т.к. срок эксплуатации свиней составляет 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Кроме того, процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Целесообразно использовать в качестве продуцентов волов, срок эксплуатации которых не менее 5 лет.

Технический результат заявляемого изобретения состоит в повышении выхода целевого продукта и упрощении способа, а также применении препарата одновременно против трех заболеваний.

Указанный технический результат предлагаемого способа достигается тем, что для создания грундиммунитета волам (не более один раз в пять лет) двукратно подкожно в разные участки тела вводят инактивированные и концентрированные гемофилезный, стрептококковый и пастереллезный антигены: сначала по 10-15 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см³ Al(ОН)³, а через 14 дней – по 20-25 млрд м.т.

Гипериммунизацию волов проводят 7-10-внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах инактивированных и концентрированных антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общей дозе каждого антигена 1800-2400 млрд микробных тел с интервалом 2-3 дня.

В процессе эксплуатации после каждого взятия крови (16-17 см³ крови на 1 кг массы тела) через 1-2 дня проводят очередные внутримышечные инъекции инактивированного концентрированного гемофилезного, стрептококкового и пастереллезного антигенов в дозе по 400-500 млрд м.т каждого, а через 8-10 дней после этого от продуцентов снова берут кровь.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. Гипериммунизацию волов проводили путем 10 внутримышечных инъекций в возрастающих дозах инактивированного и концентрированного гемофилезного, стрептококкового и пастереллезного антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общем количестве 2400 млрд м.т каждого антигена с интервалом 2-3 дня по схеме:

40-60-100-150-250-350-450 – 2-недельный перерыв – 200-300-500 млрд м.т.

Результаты определения активности

Титры полученной сыворотки составили:

		контроль (прототип)
к Pasteurella multocida	А 1:128	1:128
реакция пассивной	В 1:512	1:512
гемагглютинации (РПГА)	Д 1:128	1:128
Haemophilus pleuropneumoniae 5870	1:320	1:320
Реакция агглютинации (PA) ГУ-19	1:640	1:640
Streptococcus suis Касли
Реакция агглютинации (РА)	1:200	1:200

Пример 2. В сравнении с примером 1 увеличено количество инъекций и дозы антигенов при гипериммунизации. Проводят 11 инъекций в общем количестве 3000 млрд м.т каждого антигена по схеме: 40-60-100-150-250-350-450 – 2-недельный перерыв – 200-300-500-600 млрд м.т.

Результаты определения активности

Титры получаемой сыворотки составили:

			Контроль (прототип)
к P.multocida	A	1:128	1:128
РПГА	В	1:512	1:512
	Д	1:128	1:128
H.pleuropneumoniae 5870		1:320	1:320
РА	ГУ-19	1:640	1:640
Str. Suis (PA)		1:200	1:200

Увеличение числа инъекций больше 10 и общего количества антигенов больше 2400 млрд м.т не привело к дальнейшему повышению титра антител сыворотки. Увеличение количества антигенов и числа инъекций нецелесообразно, так как оказывает дополнительную нагрузку на иммунную систему продуцентов и не выгодно с экономической точки зрения.

Пример 3. Уменьшили количество инъекций до 7 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1800 млрд м.т:

40-60-100-200-300-500-600 млрд. м.т.

Титры полученной сыворотки составили:

			Контроль (прототип)
к P.multocida	A	1:128	1:128
РПГА	В	1:512	1:512
	Д	1:128	1:128
H.pleuropneumoniae	5870	1:320	1:320
PA	ГУ-19	1:640	1:640
Str. Suis (PA)		1:200	1:200

Уменьшение числа инъекций до 7 при уменьшении общего количества антигенов до 1800 млрд м.т не привело к снижению титра антител в сыворотке.

Пример 4. Уменьшили количество инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т по схеме:

40-60-150-250-350-450 млрд м.т.

Титры полученной сыворотки составили:

			Контроль (прототип)
к P.multocida	A	1:64	1:128
РПГА	В	1:256	1:512
	Д	1:64	1:128
H.pleuropneumonie	5870	1:160	1:320
PA	ГУ-19	1:320	1:640
Str. Suis (PA)		1:100	1:200

Уменьшение числа инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т каждого антигена привело к снижению титров антител в полученной сыворотке.

Предложенный способ апробирован с положительными результатами в лабораторных и производственных условиях.

Предложенный способ в отличие от известного обладает следующими преимуществами:

1. Увеличивается выход сыворотки в 3,2-3,5 раза (табл.2).

Таблица 2
Вид продуцента	Вес,	Кол-во крови с 1 кг живого веса	Выход,
	(кг)	животного,	(мл)
		(мл)
свиньи	150-160	13	1950-2080
волы	400-450	16	6400-7200

2. Более прост в исполнении и менее трудоемок.

Срок эксплуатации свиней 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Напротив, срок эксплуатации волов не менее 5 лет.

Отсюда вытекает, что грунд- и гипериммунизация свиней проводится раз в 5-6 месяцев, в то время как волов – раз в 5 лет.

3. Более экономически целесообразен, что вытекает из пунктов 1 и 2. Кроме того, данная сыворотка может использоваться для лечения и профилактики гемофилеза, стретококкоза и пастереллеза одновременно.

Формула изобретения

Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, включающий приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida серовариантов А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров I и II, Streptococcus suis серовара II (штамм Касли), грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцентов используют волов, при этом гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных тел с интервалом 2-3 дня, а грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных тел, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см³ гидроокиси алюминия.