Патент на изобретение №2355358

(54) СРЕДА ДЛЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СЕМЕНИ БЫКОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области животноводства. Среда включает лактозу, желток куриных яиц, глицерин и воду. Дополнительно среда содержит комплексонаты макро- и микроэлементов – кальциевый комплексонат этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА-кальций), цинковый комплексонат (ЭДТА-цинк), медный комплексонат (ЭДТА-меди) и антибиотики – пенициллин, стрептомицин и полимиксин, при следующих соотношениях компонентов: лактоза – 105-115 г, ЭДТА-кальций – 0,45-0,80 г, ЭДТА-цинк- 1,0-1,7 г, ЭДТА-меди – 0,45-0,80 г, глицерин – 40-70 мл, желток куриных яиц – 170-200 мл, пенициллин – 250-750 тыс.ед., стрептомицин – 250-750 тыс.ед., полимиксин – 1,0-2,0 млн ед., вода дистиллированная – до 1000 мл. Среда способствует повышению сохранности биологической полноценности сперматозоидов и улучшает показатель стельности коров после первого осеменения. 3 табл.

Изобретение относится к животноводству, в частности к способам размножения животных, а именно к средам для замораживания семени быков-производителей.

Известна унифицированная комплексонатная среда для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных. В се состав на 1000 мл дистиллированной воды входят:

– сахар-рафинад	100 г
– этилендиаминтетрауксусной кислоты
динатриевая соль, кальциевый комплексонат
6-водная	3 г
– этилендиаминтетрауксусной кислоты
дикалиевая соль, магниевый комплексонат,
водная	3 г
– натрий фосфорнокислый, 2-замещенный	0,7 г
– калий фосфорнокислый, 1-замещенный	1,5 г
– 2,6-ди-трет-бутил-1,4-крезол	0,5 г
– глицерин	40 мл
– желток куриного яйца, оранжевой
окраски	50 мл
– спермосан-3	500-700 ед.

(Животноводство, 1985, 7, с.39-41). Среда имеет преимущество над другими своей универсальностью. Она в определенной мере предохраняет от разрушения и обогащает макро- и микроэлементный комплекс семени, а соли ЭДТА снижают нуклеазную активность среды. Однако использование в этой среде сахарозы не обеспечивает в необходимой мере обменные процессы в плазматической мембране живчиков; наличие натриевых солей не обеспечивает оптимальных характеристик поверхностного электрического потенциала плазматических мембран живчиков; уменьшенное содержание желтка в среде вызывает недостаток лецитина и других веществ криопротекторного характера.

Известна среда для разбавления и замораживания семени быка, используемая в Литовской технологии содержания племенных быков (П.Пакенас. Литовская технология содержания и использования племенных быков. МСХ Литвы, 1993). Среда включает (на 100 мл дистиллированной воды):

– лактозу	10,5 г
– натрий лимоннокислый, 3-замещенный,
5-водный	0,2 г
– глицерин	5 мл
– желток куриного яйца	20 мл
– спермосан-3	50 ед.
или спермосан-ППК	50-100 ед.

Известна среда для разбавления семени сельскохозяйственных животных, состоящая из:

– сахар	101,1-101,3 г
– комплексная соль этилендиаминтетра
уксусной кислоты	5,9-6,1 г
– желток куриного яйца	49-51 мл
– глицерин	39-41 мл
– пенициллин	250-350 тыс.и.е.
– стрептомицин сернокислый	250-350 тыс.и.е.
– 2,3,5,7,8-Пента-гидрокси-
6-этил-1,4-нафто-хинон	0,0049-0,0051 г
– вода дистиллированная	до 1000 мл.

(SU 1080819 A, A61D 19/02,23.03.1984. Бюл. 11).

Данная среда, по сравнению с контрольной, обеспечила абсолютный показатель подвижности сперматозоидов выше на 1,9; полупериод подвижности и живучести на 4 часа, сохранность акросом – на 10%. Однако она содержит сравнительно небольшой удельный объем куриного желтка, что снижает ее криопротекторные свойства. Кроме того, сахароза обладает менее выраженными диэлектрическими свойствами в сравнении с лактозой, а это, в свою очередь, отрицательно влияет на распределение электрических зарядов по поверхности спермиев. В среде отсутствует источник макро- и микроэлементов.

Наиболее близкой по технической сущности и достигаемому результату является синтетическая среда для разбавления и замораживания семени быка (в форме гранул) в составе:

Среда была рекомендована для работы станций и предприятий по искуственному осеменению сельскохозяйственных животных («Инструкция по организации и технологии работы станций и предприятий по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных», МСХ СССР, Гл. упр. животноводства. М., Колос, 1981, 159 с.).

Данная среда содержит лактозу, достаточное количество желтка куриных яиц и глицерина. Однако в ней отсутствуют комплексонаты макро- и микроэлементов и компоненты, в достаточной мере обеспечивающие ее бактериостатические свойства.

Техническим результатом настоящего изобретения является повышение сохранности биологической полноценности сперматозоидов и улучшение показателя стельности коров, осемененных семенем с использованием предложенной среды.

Технический результат изобретения достигается тем, что предложена среда для замораживания семени быков, включающая лактозу, желток куриных яиц, глицерин и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит комплексонаты макро- и микроэлементов – кальциевый комплексонат этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА-кальций), цинковый комплексонат (ЭДТА-цинк), медный комплексонат (ЭДТА-меди) и антибиотики: пенициллин, стрептомицин и полимиксин – при следующем соотношении компонентов:

В предложенной среде наличие комплексонатов металлов обеспечивает стабилизацию макро- и микроэлементного состава и снижение ее нуклеазной активности. Наличие ионов меди в комплексе с антибиотиками повышает бактериостатические свойства предлагаемой среды.

Изотонические концентрации компонентов среды найдены криоскопическим (расчетным) методом с последующим уточнением по подвижности и выживаемости живчиков.

Оптимальное соотношение компонентов определяли с использованием биологического метода, то есть по показателям подвижности и выживаемости сперматозоидов после замораживания в том или ином варианте сред (таблица 1).

При испытании разных вариантов состава среды применяли метод так называемого расщепленного эякулята, то есть для всех вариантов использовали семя из одного и того же эякулята.

Нуклеазную активность сред в связи с включением в них комплексонатов определяли по степени деградации контрольного образца ДНК (таблица 2).

Из представленных в таблице 2 данных следует, что добавление комплексонатов в рекомендуемых количествах способствует снижению нуклеазной активности и меньшей степени деградации контрольного образца ДНК (5000-6000 пар нуклеотидов вместо 400-500 в контроле).

Для замораживания использовали общепринятую технологию. Гранулы замораживали на сухом льду, соломинки – в парах жидкого азота.

Пример 1. В лабораторных условиях ВИЖ было проведено испытание качества бычьего семени, замороженного в предлагаемой среде. Согласно полученным результатам качество семени, замороженного в предлагаемой среде, было выше, чем качество семени, замороженного в известной среде, при всех вариантах степеней разбавления (таблица 3).

Как видно из данных таблицы 3, при всех вариантах степени разбавления лабораторные показатели качества семени, замороженного в предлагаемой среде, выше, чем в семени, замороженном в среде-прототипе. Причем при использовании предлагаемой среды (в сравнении со средой-прототипом) увеличение степени разбавления до 25 раз не вызывает снижения показателей качества оттаянного семени.

Пример 2. На фермах экспериментального хозяйства ВИЖ «Кленово-Чегодаево» было осеменено 205 коров с использованием предлагаемой среды и 183 коровы – с использованием среды-прототипа. При использовании предложенной, лактозо-комплексонатной, среды стельность коров после первого осеменения была на 8% выше по сравнению с использованием среды-прототипа.

Изобретение применимо на станциях и предприятиях по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных.

Формула изобретения

Среда для замораживания семени быков, включающая лактозу, желток куриных яиц, глицерин и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит комплексонаты макро- и микроэлементов – кальциевый комплексонат этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА-кальций), цинковый комплексонат (ЭДТА-цинк), медный комплексонат (ЭДТА-меди) и антибиотики – пенициллин, стрептомицин и полимиксин при следующих соотношениях компонентов: