Патент на изобретение №2350966

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАПРАВЛЕННОСТИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА ПРИ РАКЕ ЯИЧНИКОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии. Сущность способа заключается в том, что в крови женщин с опухолевидными образованиями яичников до операции определяют уровень тестостерона и при его содержании, равном или выше 2,5 нмоль/л, интраоперационно в ткани опухоли яичников определяют содержание тестостерона и при увеличении его показателя свыше 2 нмоль/г выполняют операцию полного объема. Использование способа позволяет ускорить и упростить вспомогательный интраоперационный диагностический этап при выборе вариантов лечения больных раком яичников I стадии. 1 табл.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”populational study. Gynecol Endocrinol, 1999, Dec, 13(6): 394-400, реф., PubMed PMID: 10685333, [он-лайн], [найдено 27.06.2008]. BERRIA R. Reduction in hematocrit level after pioglitazone treatment is correlated with decreased plasma free testosterone level, not hemodilution, in women with polycystic ovary syndrome. Clin Pharmacol Ther., 2006, Aug, 80(2): 105-14, реф., PubMed PMID: 16890572, [он-лайн], [найдено 27.06.2008].

Изобретение относится в медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для определения вариантов лечения больных раком яичников I стадии.

Однако при срочном гистологическом исследовании, необходимом при выполнении такого объема оперативного вмешательства, морфологи не всегда уточняют степень дифференцировки злокачественной опухоли. А хирурги зачастую ad oculus определяют степень распространенности процесса, в частности заинтересованность контрлатерального яичника и лимфатических узлов регионарного коллектора. Естественно это в достаточной мере ограничивает возможность объективного решения вопроса о дальнейшей тактике лечения таких пациенток.

Метод основан на изучении количества и локализации одного из основных составляющих межклеточного матрикса – гликопротеида тенасцина, обладающего антиадгезивными свойствами, матричных металлопротеиназ (ММР) и их ингибиторов.

Для иммуногистохимического исследования материал фиксируют нейтральным формалином в течение 24 часов, заливают в парафин, готовят срезы толщиной 4 мкм, которые наносят на высокоадгезивные свойства и высушивают при температуре 37°С. Используют моноклональные антитела к ММР1, ММР2, ММР9, TIMP1 и 2 (NovoCastra), тенасцину, бета-катенину и Е-кадгерину (Dako). Восстановление антигенной активности проводят в миниавтоклаве «2100Retrieval» (Pick Cell) при температуре 121°С в течение 20 мин и последующем остывании 60 мин. Восстановление проводят в цитратном буфере рН 6,0 для антител к ММР1, кадтерина и катенина и в ЭДТА-буфере рН 8,0 для остальных антител. В качестве детекционной системы применяли систему «En Vision» (Dako), в качестве хромогена использовали диаминобензидин. Интенсивность реакции оценивали полуколичественным способом по бальной шкале от 0 до 3+.

Собственные исследования авторы проводили на операционном материале протокового рака молочной железы, рака легкого и рака мочевого пузыря. Полученные результаты показали возможность оценки пролиферативной активности опухоли, позволили оценить клинически еще не реализованную биологическую агрессивность опухоли, ее инвазивный и метастатический потенциал. Полученные в результате исследования иммуногистохимические характеристики опухоли, по мнению авторов, должны учитываться для оценки индивидуального прогноза течения заболевания и назначения адекватной терапии. Проведение уточняющей морфологической диагностики с использованием панели антител позволит типировать карциномы разных локализаций и гистологических типов и поможет в определении объективного прогноза течения заболевания и выбора индивидуальной тактики лечения.

Однако применение этого способа ограничивают и затрудняют такие его недостатки, как длительность проведения исследования. Поэтому он не может быть использован для коррекции объема оперативного вмешательства при раке яичников и планирования специфической терапии в ближайшее ее время после операции. Кроме того, применение указанного метода требует большого количества оборудования и реактивов, что влечет за собой большие затраты.

Целью изобретения является ускорение и упрощение вспомогательного интраоперационного диагностического этапа при выборе адекватного лечения больных раком яичников I стадии.

Поставленная цель достигается тем, что в крови женщин репродуктивного возраста, имеющих по данным УЗИ и КТ опухолевидное образование в одном яичнике, до операции исследуют содержание тестостерона. Во время оперативного вмешательства женщинам, у которых в крови уровень гормона был повышен, при удалении яичника с опухолью после тщательной ревизии органов брюшной полости проводят срочное гистологическое исследование опухоли и параллельное определение в ее ткани уровня тестостерона. При гистологическом ответе – рак яичника и повышении уровня тестостерона в ткани опухоли свыше 2,5 нмоль/л (вне зависимости от фазы менструального цикла), что свидетельствует о высокой агрессивности злокачественного процесса, выполняют операцию радикального объема: надвлагалищную ампутацию матки с придатками и экстирпацию большого сальника. В послеоперационном периоде больным назначается индивидуальное химиотерапевтическое лечение. Все пациентки в дальнейшем остаются под сонографическим и маркерным мониторингом.

Анализ известных способов определения направленности патологического процесса при раке дает основания говорить о новизне предлагаемого способа, который представлен последовательным изучением одного из объективных показателей в крови и ткани эпителиальных опухолей яичников.

В отличие от прототипа предлагаемый «Способ определения направленности патологического процесса при раке яичников» осуществляется параллельно с выполнением срочного гистологического исследования и дает возможность проводить коррекцию лечебных мероприятий, включая объем оперативного вмешательства, в соответствии с исследуемым объективным показателем.

Разработанный способ обладает изобретательским уровнем, так как явным образом не следует для специалиста из известного уровня развития медицины и оценки биологической активности опухоли, определяющей направленность патологического процесса. В известных источниках информации России, стран СНГ и за рубежом подобный способ не обнаружен.

Изобретение является промышленно применимым, так как оно может быть многократно воспроизведено в лечебных учреждениях онкологического профиля, располагающих биохимическими лабораториями.

Способ осуществляется следующим образом.

В сыворотке крови больных, имеющих опухолевидное образование яичников, при поступлении в стационар исследуют уровень тестостерона стандартным радиоиммунологическим методом.

Во время оперативного вмешательства при удалении яичника с опухолью после тщательной ревизии органов брюшной полости проводят срочное гистологическое исследование опухоли и женщинам, у которых в крови уровень гормона был выше 2,5 нмоль/л, дополнительно параллельное определение в ткани опухоли уровня тестостерона.

Для этого 100 мг ткани опухоли быстро гомогенизируют с 1 мл физиологического раствора. Центрифугируют 5 мин при 3000 тыс.об/ мин. Пробу в объеме 500 мкл вносят в пробирку с закрытой пробкой, добавляют радиоактивную метку (¹²⁵I-тестостерон), перемешивают и инкубируют 30 мин при температуре 37°С. В течение 1 мин измеряют активность метки и рассчитывают содержание тестостерона методом интерполяции по калибровочной кривой. При гистологическом ответе – рак яичника (хирургическое стадирование – T₁N₀M₀) и повышении уровня тестостерона в ткани опухоли, равном или выше 2 нмоль/г ткани (вне зависимости от фазы менструального цикла), выполняют операцию радикального объема: надвлагалищную ампутацию матки с придатками и экстирпацию большого сальника. В послеоперационном периоде больной проводят химиотерапию по стандартным схемам.

Для доказательства приводим выписку из историй болезни, подтверждающих клинический эффект лечения предлагаемым способом.

Пример клинического применения №1.

Больная П., 36 лет, история болезни №19678/х была направлена в РНИОИ с диагнозом опухоль правого яичника.

В условиях онкологического стационара пациентка была комплексно обследована. Обследование включало: комбинированное ультразвуковое исследование (УЗИ) с использованием доплеровских методик, определение уровня онкомаркера СА-125 в сыворотке крови, исследование концентрации стероидных гормонов в периферической крови.

Из протокола УЗИ: матка и левый яичник без особенностей. Правый яичник не лоцируется, в его проекции визуализируется полостное образование неправильной формы, стенки уплотнены до 2 мм, эхонеоднородной структуры с внутриполостными эхо (+) перегородками и пристеночными включениями, размерами 70×56×38 мм. В режиме ЭД и ЦДК фиксируются сосуды со скоростью до 14-15 см/с, индексом ПИ 0,67; РИ – 0,480. Васкуляризация неравномерная. Заключение: объемное образование правого яичника.

Уровень СА-125 составил 30 Ед/мл.

Уровень тестостерона в крови равнялся 2,7 нмоль/л.

Таким образом, данные дополнительных инструментальных методов исследования не позволили говорить однозначно о злокачественной природе новообразования яичника, но заставили насторожиться хирургов и обговорить с больной все возможные объемы хирургического вмешательства в случае морфологического подтверждения рака яичников при срочном гистологическом исследовании.

От предложенной радикальной операции в объеме надвлагалищной ампутации матки с придатками, экстирпации большого сальника пациентка категорически отказалась, обосновывая это решение желанием сохранить фертильность. О потенциальном риске развития рецидива заболевания женщина была информирована.

Больная взята на чревосечение, произведена правосторонняя аднексэктомия, резекция левого яичника, экстирпация большого сальника. Проводилось цитологическое исследование мазков отпечатков с краев резекции не пораженного яичника, смывов из Дугласова пространства (опухолевые клетки в мазках не выявлены). Выполнялось срочное гистологическое исследование пораженного и не измененного контрлатерального яичника. Заключение экспресс биопсии и планового морфологического исследования следующее: в правом яичнике высокодифференцированная серозная цистадено-карцинома, в левом – фолликулярные кисты.

Определялся уровень тестостерона в ткани опухоли, который составил 2,3 нмоль/г ткани.

В адъювантном режиме больная по поводу рака яичников I A стадии, состояния после радикальной органосохраняющей операции получила 5 курсов полихимиотерапии с препаратами платины.

Через 9 месяцев на этапе мониторинга выявлен рецидив заболевания в малом тазу, по поводу чего произведена релапаротомия, оптимальная операция полного объема и начата 2 линия полихимиотерапии.

Пример клинического применения №2.

Больная X., 30 лет, история болезни №17561/ц была направлена в РНИОИ по поводу быстрого увеличения размеров живота и наличия опухоли в брюшной полости.

Протокол УЗИ, выполненного в РНИОИ, показал: размеры тела матки 66×42×52 мм. Матка в anteflexio. М-эхо 6 мм. Левый яичник не визуализируется. Весь малый таз с переходом в мезогастрий выполняет образование кистозно-солидного строения, диаметром до 20 см, с ровными контурами, с выраженной капсулой и перегородками, с неоднородной внутренней структурой (с жидкостным и солидным компонентом). Вероятнее всего, образование исходило из правых придатков матки. Свободной жидкости в брюшной полости нет. Заключение: опухоль правых придатков матки. Яркая картина УЗИ указывает на малигнизацию новообразования яичника.

Уровень маркера СА-125 в сыворотке крови пациентки на момент поступления в РНИОИ составил 49 Ед/мл (относительно достоверное повышение).

Концентрация тестостерона в периферической крови составила 2,9 нмоль/л.

После трактовки больной результатов выполненных исследований, укладывающихся в картину злокачественного поражения гениталий и возможного прогноза течения данной патологии, пациентка дала сознательное согласие на операцию полного объема.

Произведена лапаротомия. При вскрытии брюшной полости выявлено, что весь малый таз и вся свободная брюшная полость выполнены кистозно-солидным образованием. Через раневое отверстие из брюшной полости выведена опухоль, исходящая из правого яичника на толстой ножке и на зажимах отсечена. Операция завершена надвлагалищной ампутацией матки с придатками, экстирпацией большого сальника. Опухоль заполнена мутноватой тягучей муцинозной жидкостью. Наружная поверхность ее была гладкая, внутренняя – местами покрыта серой распадающейся тканью. При гистологическом исследовании выявлена высокодифференцированная муцинозная аденокарцинома в правом яичнике, в левом – текоматоз.

При исследовании уровня тестостерона в ткани, пораженного опухолью яичника, его концентрация составила 2,7 нмоль/г ткани.

В дальнейшем больная по поводу рака яичников I А стадии, состояния поле радикальной операции полного объема получила 5 курсов платиносодержащей полихимиотерапии. Спустя 3 года состояние пациентки хорошее, без признаков прогрессирования заболевания.

Таким образом, данные клинических наблюдений показывают, что определение уровня тестостерона в крови и ткани опухоли может служить критерием, определяющим направленность патологического процесса при раке яичников.

Предлагаемым способом было проведено исследование 32 больных, имеющих по данным УЗИ и КТ опухолевидное образование в одном из яичников. Все женщины находились в репродуктивном возрасте и желали иметь детей. Средний возраст пациенток составил 31,5±2,2 года. У всех женщин была сохранена менструальная функция. Опухолевидные образования были обнаружены при самостоятельном обращении женщин в поликлинику РНИОИ либо по направлению из лечебных учреждений города и области. Как правило, эти женщины обращались за врачебной помощью к специалистам различного профиля, однако при обязательном осмотре гинеколога и целенаправленном проведении УЗ исследования (а затем и КТ) поступали в стационар гинекологического отделения института для дальнейшего оперативного лечения. У всех больных распространение опухоли было в пределах одного яичника. При хирургическом стадировании, подкрепленном обязательным срочным гистологическим исследованием ткани пораженного и непораженного яичников, а также образцов тканей, полученных из органов на путях возможного распространения процесса, женщинам была выставлена I (а – 19 человек; b – 13 человек) стадия рака яичников.

При анализе прогностических факторов пациентки, имеющие злокачественные опухоли, были отнесены к группе с низким риском рецидива и прогрессии заболевания: высокая и умеренная дифференцировка опухоли (G1 и G2), несветлоклеточный гистотип. По принятой в РНИОИ программе у всех пациенток, подлежащих оперативному лечению, в крови исследовали уровень половых гормонов. У всех 32 женщин уровень тестостерона в крови и в ткани яичников оказался выше 2 нмоль/л.

Части больных – 23 женщинам с Ia и Ib стадией рака яичников была выполнена операция полного объема: надвлагалищная ампутация матки с придатками, экстирпация большого сальника. Остальным 9 женщинам по их настоятельной просьбе (условия оговаривались до операции) была выполнена односторонняя аднексэктомия, резекция контрлатерального яичника с удалением большого сальника. В послеоперационном периоде все больные получили химиотерапевтическое лечения. Результаты 5-летней выживаемости больных раком яичников представлены в таблице.

Анализ результатов, представленных в таблице, показывает, что уровень тестостерона в ткани яичников может служить независимым прогностическим фактором для определения возможного поведения конкретной опухоли и для корректирования лечения.

Техническо-экономическая эффективность “Способа определения направленности патологического процесса при раке яичников” заключается в том, что:

– удается индивидуализировать для каждой больной специфическое лечение;

– увеличивается продолжительность жизни больных;

– объективизировать показания для выбора специфической терапии.

Формула изобретения

Способ определения направленности патологического процесса при раке яичников, включающий биохимическое исследование, отличающийся тем, что в крови женщин с опухолевидными образованиями яичников до операции определяют уровень тестостерона и при его содержании, равном или выше 2,5 нмоль/л, интраоперационно в ткани опухоли яичников определяют содержание тестостерона и при увеличении его показателя свыше 2 нмоль/г выполняют операцию полного объема.