Патент на изобретение №2349917
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ СОСТОЯНИЯ БОЛЬНЫХ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ, ОСЛОЖНЕННОЙ ИШЕМИЧЕСКИМ ИНСУЛЬТОМ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и неврологии, и может быть использовано для оценки степени тяжести состояния пациентов с гипертонической болезнью, осложненной ишемическим инсультом. Для осуществления способа центрифугируют периферическую венозную кровь больного на градиенте плотности фиколл-верографин
(56) (продолжение): CLASS=”b560m”hypertension (or “Birmingham paradox”) revisited., Hypertension. 2003 Feb; 41 (2): 199-200. PMID: 12574081 [PubMed – indexed for MEDLINE].
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и неврологии, и может быть использовано для оценки степени тяжести состояния пациентов с гипертонической болезнью, осложненной ишемическим инсультом. Инсульт является ведущей причиной инвалидности у взрослых и одной из основных причин смертности. В развитых странах заболеваемость инсультом составляет 2400 случаев на 1 миллион населения в год. Существует несколько известных подходов к оценке степени тяжести состояния пациентов с инсультом на основании изучения клеточных и гуморальных параметров периферической крови. Существует способ прогнозирования функционального исхода ишемического инсульта у лиц в возрасте до 50 лет (Патент РФ №2312362; G01N 33/68, 10.12.2007) и состоит в том, что в венозной крови пациента определяют концентрацию гомоцистеина (Гц) и фибриногена (Фг), по которым рассчитывают уровень Y независимости от посторонней помощи: Y=132,3-8,5×Фг-2,5×Гц. При величине Y более 85 – прогнозируют полную независимость больного от посторонней помощи; при величине Y более 75 до 85 прогнозируют легкую зависимость больного от посторонней помощи; при величине Y более 55 до 75 прогнозируют умеренную зависимость больного от посторонней помощи; при величине Y от 35 до 55 прогнозируют выраженную зависимость больного от посторонней помощи; при величине Y менее 35 – прогнозируют полную зависимость больного от посторонней помощи. Авторами способа осуществлен оригинальный подход к оценке состояния повреждения клеток мозговой ткани и степени реперфузии ишемизированного очага, которые могут быть косвенно отражены концентрацией гомоцистеина и в параметре гемостаза – содержании фибриногена. Однако гомоцистеин и фибриноген достоверно не указывают на функциональное состояние сосудистой стенки и не отражают уровень окислительного стресса, состояние иммунной системы. Другой способ прогнозирования клинического течения ишемического инсульта (Патент РФ №2217754; G01N 33/49, G01N 33/68, 27.11.2003) заключается в том, что венозную кровь больного исследуют на предмет выявления таких параметров гемостатической активации, как продукты деградации фибриногена D-димер, растворимые комплексы фибрин-мономера (РКФМ), а также агрегационную активность тромбоцитов (AT). Измерения производят в течение всего острейшего и острого периодов ишемического инсульта. В случае даже однократного увеличения концентрации D-димера более 1 мкг/мл и/или концентрации РКФМ более 50 мг/% в сочетании со значительным снижением AT до 10-15% по сравнению со значениями AT в начале острейшего периода прогнозируют вероятность летального исхода течения ишемического инсульта. Недостатком способа является то, что несмотря на перечисленные факторы гемостатической активации, которые могут косвенно отображать степень поражения сосудистой стенки, не учитывается степень окислительного стресса и активация иммунной системы организма. Известен способ прогнозирования исхода мозгового инсульта (Патент РФ №2079287; А61В 10/00, 20.05.1997), заключающийся в том, что определяют агрегацию тромбоцитов периферической крови, вызванную раствором коллагена, и при наличии уменьшениям максимальной амплитуды и угла наклона агрегатограммы прогнозируют развитие ретромбоза при мозговом инсульте. Недостатком способа является невозможность дать полную оценку степени тяжести состояния пациента и, следовательно, подобрать необходимую патогенетическую терапию кроме направленной на коррекцию параметров гемостаза. Существует способ прогнозирования течения ишемического инсульта (Патент РФ №2236685; G01N 33/577, 20.09.2004), заключающийся в том, что на 1, 10, 21-й день от момента развития ишемического инсульта определяют средний уровень CD95-лимфоцитов, %, при значении уровня CD95-лимфоцитов на 1-й день более 7,2±2,8% и возврате к норме на 21-й день прогнозируют благоприятный исход, при уровне CD95-лимфоцитов выше 7,2±2,8% и сохранении среднего уровня показателя на 21-й день – прогнозируют благоприятный прогноз для жизни и неблагоприятный для восстановления неврологического дефицита, а при значении среднего показателя СD95-лимфоцитов выше 29,12±3,1% – прогнозируют неблагоприятный прогноз для жизни. Недостатком способа является неполноценная оценка процессов, отягощающих течение ишемического инсульта и период реабилитации, в частности эндотелиальной дисфункции и окислительного стресса. Наиболее близким к заявленному способу из описанных в уровне техники источников информации является способ диагностики степени тяжести ишемического инсульта (Патент РФ №2238566; G01N 33/577, 20.10.2004), заключающийся в том, что в венозной крови способом иммунофенотипирования определяют уровень антигенпозитивных клеток (СВ95-лимфоцитов) как процент флюоресцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом процента флюоресцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля. При повышении значения CD95-лимфоцитов до 9,6±3,65% диагностируют ишемический инсульт в легкой степени тяжести. При повышении значения СD95-лимфоцитов до 16,8±2,7% – ишемический инсульт в средней степени тяжести. При повышении значения СD95-лимфоцитов до 28,1±3,2% – ишемический инсульт в тяжелой степени тяжести. Задача изобретения: снижение инвалидизации и смертности за счет повышения достоверности определения степени тяжести состояния пациентов с ишемическим инсультом и артериальной гипертензией и обеспечения возможности проведения своевременной адекватной терапии. Поставленную задачу осуществляют за счет того, что после центрифугирования периферической крови больного на градиенте плотности фиколл-верографин Способ осуществляют следующим образом. Забор периферической крови в объеме 5 мл проводят толстой иглой из локтевой вены пациента в пластмассовую пробирку с рисками, содержащую 0,15 мл гепарина; затем тщательно перемешивают кровь с гепарином в пробирке. Допустимо хранение пробирки с кровью в холодильнике при +5С° в течение 3-4 часов. В условиях лаборатории проводят повторное ресуспензирование крови в пробирке. Для выделения лимфоцитарной фракции периферической крови используют градиент плотности фиколл-верографин. Для этого в отдельную пластмассовую пробирку вносят 2 мл фиколл-верографина (Pharmacia hemical, Uppsala, Sweden) плотностью После центрифугирования на границе раздела фаз пастеровской пипеткой собирают кольцо клеток в отдельную пластмассовую пробирку. Пробирку с выделенным клеточным кольцом центрифугируют при комнатной температуре в течение 5 минут со скоростью 3000 оборотов/мин. После центрифугирования убирают супернатант, к осадку добавляют 500 мкл PBS (фосфатный буфер) или раствора Хенкса, тщательно ресуспензируют дозатором с большим наконечником. Перед микроскопированием на предварительно обезжиренное предметное стекло наносят 50 мкл суспензии клеток, на покровное стекло – небольшое количество эмерсионного масла. Микроскопируют в 10 полях зрения с использованием фазово-контрастной насадки; увеличение ×900. В поле зрения микроскопа видны лимфоциты (клетки округлой формы размером 9-10 мкм). По морфологии цитоплазматической мембраны дифференцируют следующие виды лимфоцитов: 1) интактные клетки (с визуально неизмененной плазматической мембраной; круглой, ровной поверхностью); 2) клетки в состоянии начального блеббинга (мелкие везикулы на мембране – до 1/3 радиуса клетки); 3) клетки в состоянии терминального блеббинга (крупные пузыри мембраны – более 1/3 радиуса клетки); 4) некротизированные лимфоциты. На фиг.1. представлена фотография лимфоцита с выпячиваниями цитоплазматической мембраны в нижнем полюсе клетки (блеббинг), фазово-контрастная микроскопия, увеличение х900. При исследовании состояния плазматической мембраны лимфоцитов периферической крови выявлено преобладание лимфоцитов в состоянии блеббинга на 1-е сутки госпитализации в крови больных гипертонической болезнью, осложненной ишемическим инсультом, на 70% по сравнению с содержанием лимфоцитов в состоянии блеббинга у тех же пациентов на 20-е сутки госпитализации (35%). В периферической крови пациентов с гипертонической болезнью, не осложненной ОНМК, также содержались лимфоциты в состоянии блеббинга, что составило 20,9% из числа всех идентифицированных лимфоцитов по изменению наружной цитоплазматической мембраны. На фиг.2. представлена диаграмма содержания лимфоцитов с интактной мембраной (30% из всех идентифицированных категорий лимфоцитов на 1-е сутки госпитализации и 65% – на 20-е сутки госпитализации), лимфоциты в состоянии терминального блеббинга (на 1-е сутки – 48%; на 20-е сутки – 15%), лимфоциты в состоянии начального блеббинга (на 1-е сутки – 25%; на 20-е сутки – 20%). На фиг.3. представлена диаграмма содержания лимфоцитов в состоянии блеббинга у больных с гипертонической болезнью без сосудистых катастроф (контрольная группа): клетки с интактной мембраной – 83,7%; в состоянии начального блеббинга – 9,7%; в состоянии терминального блеббинга – 6,6%; некротизированные лимфоциты – 1%. С учетом полученных различий соотношения содержания лимфоцитов идентифицированных категорий у больных гипертонической болезнью, осложненной ОНМК, на 1 и 20 сутки госпитализации и больных гипертонической болезнью без ОНМК была разработана шкала оценки степени выраженности блеббинга лимфоцитов периферической крови, которая косвенно отображает степень тяжести состояния пациентов (табл.1).
Степень выраженности блеббинга в популяции лимфоцитов периферической крови была достоверно (р<0,05) выше у пациентов на 1 сутки госпитализации по сравнению с пациентами, находящимися в стационаре 20 сутки, и контрольной группой. При этом на 1 сутки госпитализации степень выраженности блеббинга, как правило, была III или IV, в то время как в дальнейшем наблюдалась тенденция к снижению степени выраженности блеббинга к 7 суткам госпитализации до II степени и к 20 суткам госпитализации до I степени. В контрольной группе преобладали пациенты с I степенью выраженности блеббинга лимфоцитов. Были выявлены высокие корреляционные отношения (0,87) между содержанием блеббингующих лимфоцитов периферической крови и высокочувствительным и специфичным гуморальным маркером эндотелиальной дисфункции sPECAM-1 (табл.2). Для расчета коэффициента корреляции использовали параметрический корреляционный анализ Пирсона. Выявлены корреляционные отношения средней силы межу содержанием лимфоцитов в состоянии блеббинга и нарушением системы гемостаза, липидного спектра крови (0,53), а также со степенью тяжести состояния пациентов (см. клинические примеры). Из этого вытекает, что блеббинг лимфоцитов отображает широкий спектр патологический состояний пациентов, связанный с эндотелиальной дисфункцией и окислительным стрессом вследствие ишемии. Следовательно, степень выраженности блеббинга лимфоцитов можно рассматривать в качестве достаточно надежного и доступного способа определения степени тяжести состояния пациентов с ишемическим инсультом и артериальной гипертензией.
Приводим примеры – выписки из истории болезни. Пример 1 Больной М., 57 лет, и/б №19390-2005. ОНМК по ишемическому типу в бассейне правой средне-мозговой артерии с левосторонним гемипарезом. Фон: Гипертоническая болезнь III, риск 4. Из анамнеза: около 15 лет страдает гипертонической болезнью, максимальные цифры артериального давления 180/100 мм рт.ст., «среднее» артериальное давление 150/95 мм рт.ст. Регулярную гипотензивную терапию не получал. Осуществлял прием лекарственных средств (капотен, коринфар) по потребности (выраженная головная боль, тошнота, головокружение, «мушки перед глазами»). Поступил в тяжелом состоянии через 1 час после возникновения неврологической симптоматики. На момент поступления: артериальное давление 210/100 мм рт.ст., ритм синусовый с ЧСС 80 в мин, левосторонний гемипарез, гипестезия лица слева. В биохимическом анализе крови: гиперхолестеринемия (8,3 ммоль/литр), гиперфибриногенемия (6,22), резкая тромбинемия, угнетение фибринолиза. По содержанию блеббингующих лимфоцитов диагностируется 4 степень выраженности блеббинга, что соответствует 4 степени тяжести состояния. На 7 сутки госпитализации: на фоне стандартной нейротропной и гипотензивной терапии (периндоприл 4 мг 1 табл. ×2 раза/день, гипотиазид 12,5 мг/день) состояние средней степени тяжести, артериальное давление 130/80 мм рт.ст., ЧСС 75 в мин, сила в левой руке восстановлена (5 баллов), в левой ноге – 3 балла. По лабораторным анализам: 3 степень тяжести состояния по выраженности блеббинга лимфоцитов. 20 сутки госпитализации: состояние удовлетворительное, неврологическая симптоматика регрессировала, АД 130/70 мм рт.ст., ЧСС 70 в мин. Лабораторные показатели: 2 степень тяжести состояния (по выраженности блеббинга лимфоцитов периферической крови). Эти результаты свидетельствуют об обратимости дисфункции эндотелия, снижении уровня окислительного стресса при патогенетической гипотензивной терапии, а также о том, что репарационный период после действия окислительного стресса не ограничивается 20 днями госпитализации. Пример 2 Больная С., 52 года, и/б №30482-2005. ОНМК по ишемическому типу в бассейне правой среднемозговой артерии с левосторонним гемипарезом. Фон: Гипертоническая болезнь III, риск 4. Из анамнеза: гипертоническая болезнь более 10 лет, АД максимальное 160/100 мм рт.ст., АД «среднее» 130/80 мм рт.ст. Регулярно принимала эналаприл в дозе 10 мг 1 таб. ×2 раз/день. При поступлении в стационар: АД 140/90 мм рт.ст., ритм синусовый с ЧСС 76 в мин, головная боль, левосторонний гемипарез, гипестезия слева, сглажена левая носогубная складка. Биохимический анализ крови: дислипидемия за счет увеличения концентрации Лабораторные показатели: 4 степень выраженности блеббинга (= степень тяжести состояния пациентки). Проводили стандартную нейротропную терапию, гипотензивную – периндоприл 4 мг 1 табл. в день, гипотиазид 12,5 мг /день. 7 сутки госпитализации: состояние средней степени тяжести. Сохраняется снижение силы в левой нижней конечности до 4 баллов, АД 120/80 мм рт.ст., ЧСС 70 в мин. Лабораторно: 2 степень тяжести состояния по степени выраженности блеббинга. 20 сутки госпитализации: состояние удовлетворительное, неврологическая симптоматика полностью регрессировала, АД 120/70 мм рт.ст., ЧСС 70 в мин. По лабораторным показателям: 1 степень тяжести состояния по степени выраженности блеббинга. Таким образом, после восстановления больной, неврологическая симптоматика регрессировала. Пример 3. Больная Б., 60 лет, и/б №31687-2004. Повторное ОНМК по ишемическому типу в бассейне правой среднемозговой артерии с левосторонним гемипарезом. Фон: гипертоническая болезнь III, риск 4. Дисциркуляторная энцефалопатия III (смешанного генеза: гипертонического, дисметаболического). Поступила в крайне-тяжелом состоянии: оглушение I-II ст., контакт затруднен, дизартрия, адверсия взора вправо, левосторонний гемипарез; АД 180/100 мм рт.ст., ритм синусовый с ЧСС 90 в мин. Со слов родственников, страдает гипертонической болезнью около 20 лет, АД максимальное 220/120 мм рт.ст., АД «среднее» 160/100 мм рт.ст. Предыдущее ОНМК в 2003 году на фоне АД 220/120 мм рт.ст. За АД не следила, гипотензивные препараты (адельфан) принимала редко. Биохимический анализ крови: гиперхолестеринемия (8,7 ммоль/литр), гиперфибриногенемия (7,2 мг/литр), гипертромбинемия, выраженное угнетение фибринолиза. Лабораторно: 4 степень выраженности блеббинга. Проводили интенсивную нейротропную терапию, инфузионную сердечно-сосудистую (поляризующая смесь с магнезией), через установленный желудочный зонд – эналаприл 20 мг 1 табл. ×2 раза/день. 7 сутки госпитализации: отрицательная динамика состояния больной, оглушение III ст., нарастание общемозговых симптомов, выраженный эндотоксикоз, АД 140/100 мм рт.ст., ЧСС 100 в мин, глубокий левосторонний гемипарез. Лабораторно: 4 степень выраженности блеббинга. 20 сутки госпитализации: АД 140/90 мм рт.ст., ЧСС 66 в мин, оглушение III ст., взор не фиксирует, прежняя очаговая и общемозговая симптоматика, менингиальных знаков нет. Лабораторно: 4 степень выраженности блеббинга. На 23 сутки госпитализации больная скончалась. Патолого-анатомический диагноз: Повторное ОНМК по ишемическому типу. Инфаркт до 2/3 объема правой гемисферы в височно-затылочной области. Отек головного мозга, дислокация ствола головного мозга. Генерализованный атеросклероз сосудов. В случае больной изначально и на протяжении стационарного лечения диагностировали 4 степень выраженности блеббинга лимфоцитов периферической крови, что соответствовало тяжелому состоянию пациента. Использование заявляемого способа позволяет эффективно и с небольшими затратами оценить степень тяжести состояния пациентов с гипертонической болезнью, осложненной ишемическим инсультом, что дает возможность начать раннюю патогенетическую гипотензивную терапию, направленную на коррецию артериального давления и дисфункции эндотелия, окислительного стресса, а также оценить динамику восстановления пациента и эффективность применяемой терапии по степени выраженности блеббинга лимфоцитов периферической крови в конечном счете способ позволяет снизить риск инвалидизации и смертности за счет повышения достоверности определения степени тяжести состояния пациентов с ишемическим инсультом и артериальной гипертензией и обеспечения возможности проведения своевременной адекватной терапии.
Формула изобретения
Способ диагностики степени тяжести состояния больных гипертонической болезнью, осложненной ишемическим инсультом, включающий забор периферической крови из локтевой вены больного в объеме 5 мл, отличающийся тем, что после центрифугирования периферической крови больного на градиенте плотности фиколл-верографин
РИСУНКИ
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||
=1,077, с помощью фазово-контрастной микроскопии осуществляют подсчет в 10 полях зрения 100 лимфоцитов с идентификацией по везикуляции наружной цитоплазматической мембраны. Определяют степень выраженности блеббинга лимфоцитов, которая соответствует степени тяжести пациента. Использование изобретения повышает достоверность определения степени тяжести пациента и обеспечивает возможность проведения своевременной адекватной терапии. 3 ил., 2 табл.
-липопротеидов; фибриногенемия (4,66 мг/л), нарушение фибринолиза.
