Патент на изобретение №2349308

(54) СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ УРОВНЯ ₂ АНТИПЛАЗМИНА У НОВОРОЖДЕННЫХ ПОРОСЯТ С АНЕМИЕЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ заключается в том, что назначают ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренил внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,06 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,05 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина. При этом дополнительно вводят гамавит 0,012 мл/кг внутримышечно один раз в день, восемь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина. Способ позволяет нормализовать уровень ₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией. 1 табл.

Изобретение относится к биологии и ветеринарии, а именно к гематологии.

Аналогов предлагаемого способа нормализации уровня ₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией не существует.

Имеются сведения о применении при анемии у поросят ферроглюкина (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М.Данилевского. М.: Агропромиздат, 1991. – 576 с.).

Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, фоспренила и гамавита, не применялся у новорожденных поросят с анемией с целью нормализации уровня ₂ антиплазмина.

Целью изобретения является повышение эффективности коррекции уровня ₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации уровня ₂ антиплазмина новорожденным поросятам с анемией назначаются ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренил внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,06 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,05 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина и гамавит 0,012 мл/кг внутримышечно один раз в день, восемь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.

Способ позволяет нормализовать уровень ₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией через 5 дней после завершения лечения, переводя его на уровень, близкий к таковому для здоровых поросят. При соблюдении рекомендаций заявляемого способа возможно поддержание в последующем активности уровня ₂ антиплазмина в оптимальном состоянии, что позволит у новорожденных поросят существенно снизить риск тромботических осложнений, оздоровить стадо, увеличить привесы, снизить падеж и повысить качество и объем получаемой мясной продукции.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для диагностики у новорожденных поросят с анемией нарушения уровня ₂ антиплазмина проводится его оценка по следующей методике.

₂ Антиплазмин (₂-АП) является наиболее важным ингибитором фибринолиза, в присутствии которого происходит быстрое формирование необратимого, лишенного активности комплекса “плазмин-₂-АП”. Метод основан на определении способности ₂-АП исследуемого образца плазмы инактивировать добавляемый в плазму очищенный плазмин. Содержание остаточного плазмина определяется по степени гидролиза хромогенного субстрата, специфичного по отношению к этому ферменту.

₂-АП_{образец}+плазмин_{избыток}=[₂-АП-плазмин]+плазмин_{остаток}

Используются реактивы: 1. Плазмин свиньи, лиофилизированный. Разводится в буфере до концентрации 0,1 СТА Е/мл. 2. Хромогенный субстрат D-Norvalylcyclohexylalanil-lysil-p-nitroanilide. Разводится в дистиллированной воде до концентрации 3 ммоль/л. 3. Раствор буфера: КН₂РО₄ (100 ммоль/л), NaCl 9 г/л, глицерин (250 г/л), рН 7,5.

Для выполнения исследования необходима также стандартная или контрольная нормальная плазма с известным содержанием ₂-АП или пулированная (взятая не менее чем от 10 здоровых поросят), активность ₂-АП в которой принимается за 100%.

Применяется следующее оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой. Температура реакции +37°С. Используемая длина волны 405 нм. Ширина оптического пути кюветы – 1 см.

Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.

Предварительно все смешиваемые реагенты подогреваются до +37°С. Ход определения приводится в таблице.

Таблица. Схема определения уровня 2 антиплазмина у обследуемого
Последовательность операций	Исследуемый образец	Контроль (плазмин)
1. Внести в кювету или пробирку:
исследуемую плазму	20 мкл (0,02 мл)	–
физиологический (0,15 М) раствор хлорида натрия	–	20 мкл (0,02 мл)
раствор плазмина	1,0 мл	1,0 мл
2. Перемешать и инкубировать при +37°С в течение 1 мин
3. Добавить хромогенный субстрат и включить секундомер	0,1 мл	0,1 мл
В течение 30 сек учитывают показатели поглощения и одновременно включают секундомер. Спустя 60 и 120 сек повторно определяют показатели поглощения.

Вычисляют скорость изменения поглощения за 1 мин (А/мин), которая пропорциональна активности ₂-АП. Для этого рассчитывают разницу поглощения при 405 нм между 0 и 60 секундами инкубации, а также между 60 и 120 секундами. Определяют среднюю величину из двух показателей А/мин.

Каждая серия анализов требует не менее одного значения для раствора плазмина (А/мин_{плазмин}) и одного референтного значения, определяемого с использованием контрольной нормальной плазмы (А/мин_{контроль}) с известным значением ₂-АП. Эти значения используют для вычисления внутрилабораторного коэффициента пересчета (К_п):

Содержание ₂-АП в исследуемом образце плазмы в виде % от нормы в дальнейшем вычисляется по формуле: ₂-АП_{образец} (% от нормы)=Кп×(А/мин_{плазмин}–А/мин_{образец})

В норме уровень ₂-АП в плазме крови составляет 80-120%.

Снижение активности ₂-АП может быть определено при активации фибринолиза, его повышение сопряжено с риском тромбоза.

При диагностике у новорожденных поросят с анемией повышения ₂-АП необходимо назначение лечения согласно заявленному способу.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации уровня ₂ антиплазмина новорожденным поросятам с анемией назначаются ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренил внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,06 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,05 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина и гамавит 0,012 мл/кг внутримышечно один раз в день, восемь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.

Пример 1. У новорожденного поросенка с анемией №18 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

У данного поросенка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 83,0 г/л, эритроцитов 4,12×10¹²/л, сидероцитов 1,2% при уровне железа в сыворотке 13,2 мкмоль/л с повышением общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 68,2 мкмоль/л.

При обследовании у поросенка была выявлена повышенная активность ₂-АП (146%). Животному был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней.

Через 5 дней после окончания лечения у поросенка нормализовалась красная кровь. Так, количество гемоглобина у него возросло до 116,0 г/л, эритроцитов – до 5,00×10¹²/л, сидероцитов до 7,2% при увеличении железа в сыворотке до 20,4 мкмоль/л и снижении общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 39,6 мкмоль/л. Однако у поросенка было достигнуто неполное снижение активности ₂-АП (128%), не достигшее нормальных значений.

Наблюдение за поросенком в последующем зарегистрировало слабую положительную динамику ₂-АП – через 1 месяц после окончания лечения ₂-АП составил 124%.

Пример 2. У новорожденного поросенка с анемией №19 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

У данного поросенка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 82,0 г/л, эритроцитов 4,10×10¹²/л, сидероцитов 1,0% при уровне железа в сыворотке 12,6 мкмоль/л с повышением общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 68,9 мкмоль/л.

При обследовании у поросенка была выявлена повышенная активность ₂-АП (145%). Животному был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренил внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,06 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,05 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина и гамавит 0,012 мл/кг внутримышечно один раз в день, восемь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.

Через 5 дней после окончания лечения у поросенка нормализовалась красная кровь.

Так, количество гемоглобина у него возросло до 120,6 г/л, эритроцитов – до 5,33×10¹²/л, сидероцитов до 8,4% при увеличении железа в сыворотке до 28,4 мкмоль/л и снижении общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 33,6 мкмоль/л.

У поросенка была достигнута полная нормализация активности ₂-АП (89%).

Наблюдение за поросенком в последующем не зарегистрировало отрицательной динамики ₂-АП.

Использование предлагаемого способа оптимизации активности ₂-АП в ветеринарии поможет избежать сосудистых нарушений у новорожденных поросят с анемией, оздоровить стадо, снизить падеж, увеличить привесы, повысить качество и объем получаемой мясной продукции и получать в последующем от этих поросят здоровое потомство.

Формула изобретения

Способ нормализации уровня ₂ антиплазмина у новорожденных поросят с анемией путем применения ферроглюкина по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренила внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,07 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,06 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,05 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина и гамавита 0,012 мл/кг внутримышечно один раз в день, восемь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.