Патент на изобретение №2348985

(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ТРАВМЫ ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО НЕРВА И МЫШЦ

(57) Реферат:

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для моделирования травмы периферического нерва и окружающих его мышц. Для моделирования травмы используются экспериментальные животные, например крысы. Под общим обезболиванием производится доступ к периферическому нерву путем разреза в области его проекции. Нерв подвергают однократному механическому повреждению путем передавливания хирургическим зажимом типа Москит до первого щелчка кремальеры в течение 1 секунды. Далее окружающие мышцы с обеих сторон подвергают повреждению аналогичным способом на трех уровнях – на уровне травмы поврежденного нерва, на 5 мм выше и на 5 мм ниже травмы. Способ обеспечивает адекватное воспроизведение модели. 10 ил.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”изолированных периферических нервов и скелетных мышц при действии гипербарии в эксперименте, 1990 г. DEVKOTA P. et al. “Effect of tension on force of contraction of muscle and nerve conduction velocity of the repaired nerve in a rat model”. Nepal Med Coll J. 2006 Dec; 8 (4): 227-9. AYDIN MA et al. “The influence of continuous exposure to 50 Hz electric field on nerve regeneration in a rat peroneal nerve crush injury model”. Bioelectromagnetics. 2006 Jul; 27 (5): 401-13.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ, предложенный Х.Г.Сулеймановой и Г.М.Патаховым (заявка №2002131081/14, Дагестанская государственная медицинская академия, 2002), который заключается в перерезке седалищного и бедренного нервов, после чего концы перерезанных нервов сопоставляют и перекрестно сшивают центральный конец седалищного нерва с периферическим концом бедренного нерва, а также центральный конец бедренного нерва с периферическим концом седалищного нерва. Способ позволяет исследовать функции восстановления нижней конечности при травме поясничных сегментов спинного мозга ниже места поражения.

Недостатком данного способа является техническая сложность выполнения, требующая навыков использования операционного микроскопа; кроме того, способ связан не с травмой периферического нерва как таковой, а с топической диагностикой травмированного спинного мозга.

Задача изобретения: создание способа моделирования травмы периферического нерва, наиболее приближенного к реальным условиям клиники.

Поставленная задача достигается тем, что после обнажения нерва у животного (например, крысы) при помощи хирургического зажима воспроизводится травма нерва и окружающих его мягких тканей, а затем методом стимуляционной электромиографии и в ходе гистологического исследования доказываются его дегенеративные изменения.

Изобретение поясняется фигурами 1-10. На фигуре 1 изображена схема нанесения травмы нерва и окружающих групп мышц, на фигуре 2 – фиксация животного на рабочем столе, на фигуре 3 – разрез по задней поверхности бедра, на фигуре 4 – обнажение седалищного нерва, на фигуре 5 – нанесение травмы нерва, на фигуре 6 – нанесение травмы мышц, на фигуре 7 – формы М-ответа, зарегистрированные на пораженной стороне, на фигуре 8 – фиброз нервного волокна (окр. Пикро-сириус красным, ув. 8×20), на фигуре 9 – патологические изменения в задней группе пораженных мышц (окр. гемотоксилин-эозином, ув. 8×20), на фигуре 10 – ретикулярные и коллагеновые волокна новообразованной соединительной ткани (окр. Пикро-сириус красным, ув. 8×20).

Способ осуществляется следующим образом. Зажимом типа Москит наносится травма седалищного нерва путем его передавливания до первого щелчка кремальеры в течение 1 секунды. Далее идентично травмируются латеральная и медиальная группы мышц на 5 мм выше, на 5 мм ниже места травмы нерва и на его уровне (это обусловлено тем, что в реальной клинической практике чаще встречается сочетанная травма нерва и мышц). Через 14 суток фиксируются дегенеративные изменения нервного волокна и окружающих его групп мышц с помощью метода стимуляционной миографии и гистологического исследования препаратов травмированных тканей.

Пример конкретного выполнения. Для модели травмы нерва использовали крыс линии Wistar без признаков заболеваний, прошедших карантин и содержащихся в рациональном пищевом и питьевом рационе в условиях вивария. По задней поверхности бедра от коленного сустава в проксимальном направлении в проекции седалищного нерва производили разрез, затем тупо разъединяли группы мышц и обнажали седалищный нерв. С помощью зажима типа Москит наносили дозированную травму нерва и аналогичным способом – на медиальную и латеральную группы мышц – на 5 мм выше, на 5 мм ниже места травмы нерва и на его уровне.

В послеоперационном периоде вели динамическое наблюдение за животными. Особое внимание обращалось на темпы восстановления движений и чувствительности.

У серии животных через 14 дней под общим наркозом исследовали электрофизиологическую активность и проводимость нервного волокна, затем животные выводились из эксперимента передозировкой наркоза. Для морфологического исследования участка нерва препарат фиксировался в 10%-ном нейтральном растворе формалина. Из полученного материала по общепринятой методике изготавливали срезы. Препараты окрашивали гематоксилином и эозином, по Маллори, пикро-сириус красным и импрегнировали по Футу. Препараты изучали в световом микроскопе при разных увеличениях. Результаты гистологического исследования сопоставлялись с данными клинических наблюдений.

Для диагностики повреждения седалищного нерва методом стимуляционной электромиографии под общим эфирным наркозом определяли параметры двигательного ответа (М-ответа) икроножной мышцы животных. Для усиления и регистрации М-ответа использовали четырехканальный миограф MG-42 (“Medicor”). Электроды вводили в область проекции седалищного нерва. Исследуемый нерв стимулировали прямоугольными импульсами длительностью 0,2 мс и интенсивностью от 0,1 до 50 В. Отведение М-ответа проводили игольчатыми электродами, которые вводили под прямым углом в брюшко икроножной мышцы. При электромиографической (ЭМГ) диагностике исследовались мышцы, иннервированные пораженным нервом, а также симметричные мышцы на непораженной стороне для контроля. Сравнивали значение амплитуды, длительности и латентного периода М-ответа икроножных мышц. По степени денервационных процессов в мышцах судили о степени поражения нерва.

На пораженной стороне зарегистрировали отличия, которые проявлялись в значительно более низкой амплитуде негативного и негативно-позитивного пиков М-ответа.

Амплитуда негативного пика М-ответа (А1) мышц пораженной конечности была снижена по сравнению с непораженной на 83%.

Амплитуда негативно-позитивного пика (А2) М-ответа уменьшилась на 64,1%.

Общая длительность М-ответа на стороне травмы нерва снизилась на 63,5%.

Таким образом, электрофизиологический показатель, характеризующий состояние нервных двигательных волокон, свидетельствует о том, что эфферентная иннервация мышцы существенно нарушена.

При гистологическом исследовании в периферических нервах (в данном случае седалищный нерв) наблюдается сочетание миелиновых и безмиелиновых нервных волокон.

При гистологическом исследовании в области травмы нервного волокна наблюдаются изменения тинкториальных свойств миелиновой оболочки, которая приобретает красно-оранжевый и даже светло- и темно-фиолетовый оттенок, диаметр миелиновых нервных волокон и осевого цилиндра расширен. Наблюдается сочетание нервных пучков ацидофильной и базофильной окраски, причем преобладают пучки с базофильной окраской. Нервные пучки отстоят от эпиневрия на значительном расстоянии, с одновременным нарушением целостности эндоневрия, наличием в нем небольших пустых футляров базальных пластинок и коллагеновых волокон, обильным развитием капиллярной сети кровеносных сосудов.

При гистологическом исследовании мышечной ткани отмечаются выраженные ишемические изменения. Появляются фокусы базофилии, более отчетливые в периферической части окружающих нерв мышц.

Нервное волокно окружено обширным воспалительным инфильтратом с обилием плотно расположенных тонких волокон, предположительно ретикулярных, уплотненных и утолщенных коллагеновых волокон новообразованной соединительной ткани.

Таким образом, разработанный нами способ моделирования травмы нерва позволяет получить в эксперименте повреждение нерва с характерными электрофизиологическими и гистологическими признаками нарушения проводимости и нервно-мышечной передачи. Об этом свидетельствуют изменения в нервном волокне, участки ишемии в мышечной ткани и образование соединительной ткани вокруг нерва и изменения М-ответа.

Разработанный метод позволяет воссоздать травму нерва, наиболее приближенную к клиническим условиям, когда чаще наблюдается сдавление и размозжение нервной и мышечной тканей, нежели их разрыв. Использование данного метода в медицине позволяет более точно изучить патоморфологию и патофизиологию восстановления нервно-мышечного аппарата после травмы, полученной в реальных условиях клиники (например, при ДТП), разработать адекватные методы диагностики и лечения нейротравматологической патологии.

Формула изобретения

Способ моделирования травмы периферического нерва и окружающих его мышц, отличающийся тем, что нерв подвергают однократному механическому повреждению путем передавливания хирургическим зажимом типа Москит до первого щелчка кремальеры в течение 1 с, окружающие мышцы с обеих сторон подвергают повреждению аналогичным способом на трех уровнях – на уровне травмы поврежденного нерва, на 5 мм выше и на 5 мм ниже травмы.

РИСУНКИ