Патент на изобретение №2342668

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОТОКСИКОЗА У НОВОРОЖДЕННЫХ ПРИ ВНУТРИУТРОБНОЙ ВИРУСНОЙ И ВИРУСНО-БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии. Предложен способ диагностики эндотоксикоза путем определения среднемолекулярных пептидов у новорожденных путем определения концентрации среднемолекулярных пептидов в надосадочной жидкости носоглоточного аспирата. По данному способу при концентрации среднемолекулярных пептидов 0,390-0,475 единиц оптической плотности определяют эндотоксикоз вирусной этиологии, обусловленный внутриутробным инфицированием вирусом гриппа A(H3N2), а эндотоксикоз вирусно-бактериальной этиологии (обусловленный внутриутробным инфицированием вирусом гриппа A(H3N2) и Staphylococcus aureus) определяют при значениях 0,476-0,625 единиц оптической плотности. Изобретение позволяет повысить точность диагностики эндотоксикоза при внутриутробной вирусной и вирусно-бактериальной инфекции и исключить травматизацию сосудов у новорожденных. 2 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии.

Известен способ диагностики эндотоксикоза у новорожденных на основании определения концентрации среднемолекулярных пептидов в крови из вены пуповины у новорожденных от матерей с гестозом. При легкой форме гестоза у матерей у их новорожденных возрастает концентрация среднемолекулярных пептидов до 0,312±0,024 ед.э. по сравнению с контролем, где она составляет 0,228±0,004 ед. э. (р<0,01)[1].

Недостатками вышеуказанного способа диагностики являются:

1. Использование инвазивного метода (пункции вены пуповины), который может давать осложнения в виде гематом или геморрагий.

2. Применение данного способа способствует потере части крови у новорожденного, что снижает его резистентность к инфекции, особенно в состоянии анемизации.

3. Технические сложности пункции вены пуповины (малый диаметр, извитость).

4. Не позволяет диагностировать эндотоксикоз вирусной и вирусно-бактериальной этиологии.

Задачей предлагаемого способа является повышение точности диагностики эндотоксикоза и исключение травматизации сосудов у новорожденных при внутриутробной вирусной и вирусно-бактериальной инфекции.

Сущность способа диагностики эндотоксикоза у новорожденных при внутриутробной вирусной и вирусно-бактериальной инфекции заключается в следующем:

1. Берут стерильный шприц, который присоединяют к зонду, выполненному, например, из полихлорвинила. Зонд осторожно вводят в полость носа новорожденному.

2. Шприцем медленно насасывают 2,5-3 мл биологической жидкости, содержащейся в носовых ходах и носоглотке у новорожденных.

3. Полученные 2,5-3 мл биологической жидкости носоглоточного аспирата центрифугируют на центрифуге при 1500 об/мин в течение 10 минут для получения ее надосадочной части.

4. Для определения среднемолекулярных пептидов экспресс-методом в центрифужную пробирку наливают 1,0 мл надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата, добавляют 0,5 мл 10% трихлоруксусной кислоты. Эту смесь встряхивают и центрифугируют в течение 30 минут при 3000 об/мин. Детекцию надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата, освобожденной от грубодисперсных белков, осуществляют после предварительного разведения, при котором к 0,5 мл надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата добавляют 4,5 мл дистиллированной воды. Измерения осуществляют на спектрофотометре, например СФ-16 или HITACHI -557(Япония), при длине волны 280 нм (Е₂₈₀).

5. Внутриутробная вирусная инфекция диагностируется при обнаружении четырехкратного роста титров антител к возбудителю с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) в парных сыворотках крови (из вены у матерей в родах и из вены пуповины у новорожденных) [2].

6. Выявление бактериальной кокковой микрофлоры в полости носа проводят с помощью забора материала стерильной металлической палочкой с ватным наконечником, заключенной в стерильную пробирку, с последующим посевом на питательные среды [3].

Показатели концентрации среднемолекулярных пептидов в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата и в плазме крови из вены пуповины у здоровых новорожденных (контрольная группа), у новорожденных с внутриутробным гриппом A(H3N2) (первая опытная группа) и у новорожденных с внутриутробным гриппом A(H3N2), ассоциированным с бактериальной кокковой микрофлорой (Staphylococcus aureus) (вторая опытная группа) представлены в таблице 1.

Таблица 1 Сравнительная характеристика среднемолекулярных пептидов у новорожденных (в единицах оптической плотности) в различных биологических жидкостях
Исследуемая биологическая жидкость	Статистический показатель	Показатели среднемолекулярных пептидов в исследуемых группах
		Контрольная группа (n=32)	Первая опытная группа (n=31)	Вторая опытная группа (n=30)
Надосадочная часть биологической жидкости носоглоточного аспирата	М m	0,330± 0,01 0,04	0,429± 0,006 0,03	0,545± 0,005 0,05
Р		–	<0,001	<0,001
Плазма крови из вены пуповины новорожденных	М m	0,270± 0,01 0,07	0,303± 0,006 0,03	0,309± 0,006 0,03
Р		–	<0,05	<0,05
Примечание: Р – степень достоверности различия между контрольной и опытной группами; n = количество случаев.

Как видно из таблицы 1, в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата у новорожденных эндотоксикоз вирусной этиологии диагностируется при концентрации среднемолекулярных пептидов 0,429±0,006 (0,390-0,475) единиц оптической плотности (р<0,001), а эндотоксикоз вирусно-бактериальной этиологии – при концентрации среднемолекулярных пептидов 0,545±0,009 (0,476-0,625) единиц оптической плотности (р<0,001).

Из таблицы 2 видно, что у новорожденных отмечается положительная корреляционная связь между концентрацией среднемолекулярных пептидов в плазме крови и в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата, величина и достоверность которой при внутриутробной вирусной инфекции возрастает до r=+0,71; р<0,001 и при вирусно-бактериальной инфекции до r=+0,73; р<0,001 по сравнению с контрольной группой, где она составляет r = + 0,51; р<0,01. Учитывая более высокую концентрацию среднемолекулярных пептидов в надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата и ее более значительное увеличение у новорожденных с внутриутробной вирусно-бактериальной инфекцией по сравнению с таковой в плазме крови (табл.1), а также меньшую травматичность метода, мы предлагаем использовать показатели концентрации среднемолекулярных пептидов надосадочной части биологической жидкости носоглоточного аспирата как диагностические маркеры эндотоксикоза.

Для иллюстрации приводим клинический пример 1.

Новорожденная Ш. Дата рождения 24.02.1993. Родилась от первой беременности, протекавшей на фоне раннего гестоза (тошнота, однократная рвота) до 8 недель. В 24 недели беременности перенесла грипп A(H3N2) с повышением температуры до 37,4°C, которая регистрировалась в течение 2 суток. У женщины наблюдались озноб, резко выраженная головная боль, потливость, умеренно выраженная боль при движении глазных яблок, слабость и адинамия. Длительность симптомов интоксикации 7 суток. Отмечались катаральные явления: серозные выделения из носа на 2-3 сутки, слизисто-гнойные выделения на 4-5 сутки, першение в горле и кашель с незначительным количеством мокроты. Возраст матери – 26 лет, служащая. В детстве страдала тонзиллитом с обострениями до 2 раз в год до 7 лет. Группа крови А(II), резус – положительный. В женской консультации наблюдалась регулярно с 11 недель. Роды первые, в срок, быстрые, через естественные родовые пути. Продолжительность 1-го периода 4 часа 20 минут, 2-го периода – 10 минут, а 3-го периода – 10 минут. Безводный период составлял 5 часов, околоплодные воды светлые. В родах у матери отмечалось дородовое излитие вод и разрыв шейки матки первой степени.

Клинический диагноз матери: Роды первые в срок, быстрые. Дородовое излитие околоплодных вод. Разрыв шейки матки первой степени. Эпизиотомия. Эпизиорафия.

Родилась девочка с массой 3250 г, ростом – 52 см, окружностью головы – 34 см и груди 33 см. В родильном зале оценка по Апгар 7/8 баллов. Группа крови А(II), резус – положительный. Серологический анализ крови с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) показал рост титра антител к вирусу гриппа A(H3N2) с 1:16 до 1:64 у ребенка по сравнению с таковым у матери. При бактериологическом исследовании содержимого полости носа – отрицательный результат.

Диагноз новорожденного: Внутриутробное инфицирование. Везикулез (вирус гриппа A(H3N2) 1:16-1:64).

При рождении состояние новорожденного удовлетворительное. На коже лица выявлялись мелкие везикулезные образования. Отмечался цианоз носогубного треугольника. Активность нормальная. Мышечный тонус и сухожильные рефлексы сохранены. Физиологические рефлексы не угнетены. Тоны сердца ясные, ритмичные до 140-150 ударов в 1 минуту. Частота дыхательных движений 56 в 1 минуту. Дыхание в легких проводилось над большей их поверхностью, пуэрильное.

В крови у ребенка при рождении наблюдался лейкоцитоз нейтрофильного характера с палочкоядерным сдвигом: 17,7·10⁹/л, п/я – 8%, с/я – 67%, лимфоциты – 25%. Концентрация среднемолекулярных пептидов в надосадочной жидкости назофарингеального аспирата составляла 0,415 единиц оптической плотности, а в плазме крови из вены пуповины – 0,298 единиц оптической плотности.

Клинический пример 2.

Новорожденный В. Дата рождения 27.01.1993 г. Родился от второй беременности, которая протекала с симптомами угрозы прерывания на 12 неделе с лечением в стационаре. В 24 недели перенесла грипп A(H3N2), который сопровождался повышением температуры до 38°C. Температурная реакция наблюдалась в течение 3 суток. Женщину беспокоили озноб, умеренно выраженная головная боль, потливость, боль в мышцах, слабость и адинамия. Длительность симптомов интоксикации составляла 8 суток. Отмечались признаки острого ринофарингита: серозные выделения из носа на 2-3 сутки, слизисто-гнойные выделения на 4-6 сутки, выраженное першение в горле и кашель с незначительным количеством слизисто-гнойной мокроты.

Бактериологическое исследование мазков из полости носа – Staphylococcus aureus. Возраст матери – 20 лет, служащая. В детстве острые респираторные инфекции до 3 раз в год. Наследственность не отягощена. В женской консультации наблюдалась регулярно с 9 недель. Группа крови А(II), резус – положительный. Роды вторые в срок, быстрые, через естественные родовые пути. Продолжительность 1-го периода родов 3 часа 30 минут, 2-го периода – 10 минут, 3-го периода – 10 минут. Безводный период 4,5 часа, околоплодные воды светлые. Во время родов отмечалась дородовое излитие околоплодных вод. Высокий разрыв плодного пузыря.

Клинический диагноз матери: Роды II в срок, быстрые. Поздний гестоз. Нефропатия 1 степени. Дородовое излитие околоплодных вод. Высокий разрыв плодного пузыря. Ожирение 1 степени.

Родился мальчик с массой 3350 г, ростом – 50 см, окружностью головы – 34 см и груди 33 см. В родильном зале оценка по шкале Апгар 7/8 баллов. Группа крови А(II), резус – положительный. При серологическом исследовании с помощью РТГА отмечался рост титра антител к вирусу гриппа A(H3N2) с 1:64 до 1:256 у ребенка по сравнению с таковым у матери. При бактериологическом исследовании выявлялся Staphylococcus aureus в полости носа.

Диагноз новорожденного: Внутриутробное инфицирование, везикулез (вирус гриппа A(H3N2) 1:64-1:256 и Staphylococcus aureus).

В родильном зале ребенку проводился туалет верхних дыхательных путей. Проводилась трехкратная обработка слизистой глаз 20% раствором сульфацила натрия через 10 минут. Состояние новорожденного удовлетворительное. На коже туловища определялись мелкие везикулезные образования. Наблюдался цианоз носогубного треугольника. Активность, мышечный тонус и сухожильные рефлексы нормальные. Физиологические рефлексы не угнетены. Тоны сердца ясные, ритмичные до 144-154 ударов в 1 минуту. Частота дыхательных движений 57 в 1 минуту. Дыхание в легких проводилось над большей их поверхностью, пуэрильное.

При рождении у ребенка наблюдался лейкоцитоз: 19,0·10⁹/л, п/я – 2%, с/я – 70%, лимфоциты – 16%, моноциты – 12%. Концентрация среднемолекулярных пептидов в надосадочной жидкости носоглоточного аспирата составляла 0,512 единиц оптической плотности, а среднемолекулярных пептидов в плазме крови – 0,310 единиц оптической плотности.

Для иллюстрации приводим клинический пример 3.

Новорожденный 3. Дата рождения 4.02.1993. Родился от первой беременности. На сроке 12 недель отмечалась угроза прерывания на фоне обострения хронического обструктивного бронхита и гайморита, обусловленных вирусом гриппа A(H3N2) и Staphylococcus aureus. Предъявляла жалобы на повышение температуры до 37,8°C, которая наблюдалась в течение 4 суток, озноб, резко выраженную головную боль и потливость, умеренно выраженную боль при движении глазных яблок, слабость и адинамию. Симптомы интоксикации выявлялись в течение 12 суток. Наиболее характерными катаральными симптомами являлись заложенность носа, слизисто-гнойные выделения из носа с 4-5 суток заболевания и кашель со значительным количеством слизисто-гнойной мокроты в течение 10 суток. Возраст матери – 21 год, служащая. Лечилась в дневном стационаре клиники ГУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. В 18 и 30 недель отмечалось обострение хронического пиелонефрита, хроническая внутриутробная гипоксия и фетоплацентарная недостаточность. У больной диагностировалось ожирение 2 степени. Группа крови А(II), резус – положительный. В женской консультации наблюдалась регулярно с 9 недель. Роды первые, в срок, через естественные родовые пути. Продолжительность 1-го периода 9 часов 40 минут, 2-го периода – 20 минут, а 3-го периода – 10 минут. Околоплодные воды незначительно окрашены меконием. В родах у матери отмечался плоский плодный пузырь и нетугое обвитие пуповины вокруг шеи у плода.

Клинический диагноз матери: Роды первые в срок. Плоский плодный пузырь. Ожирение 2 степени. Хронический обструктивный бронхит в стадии ремиссии. Хронический пиелонефрит в стадии ремиссии. Хроническая внутриутробная гипоксия плода. Хроническая фетоплацентарная недостаточность. Однократное нетугое обвитие пуповины вокруг шеи плода. Асфиксия новорожденного. Везикулез. Эпизиотомия.

Родился мальчик с массой 3100 г, ростом – 51 см, окружностью головы – 34 см и груди 33 см. В родильном зале оценка по Апгар 5/6 баллов. Группа крови А(II), резус – положительный. Серологический анализ крови с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) показал рост титра антител к вирусу гриппа A(H3N2) с 1:16 до 1:64 у ребенка по сравнению с таковым у матери. При бактериологическом исследовании в полости носа выявляется Staphylococcus aureus.

Диагноз новорожденного: Внутриутробное инфицирование. Везикулез (вирус грипп A(H3N2) 1:16-1:64). Асфиксия среднетяжелой степени. Аспирация мекониальными околоплодными водами.

При рождении ребенку проводился туалет верхних дыхательных путей, с удалением слизи и мекония с помощью электроотсоса. Проводилась трехкратная обработка слизистой глаз 20% раствором сульфацила натрия через 10 минут. Состояние новорожденного средней степени тяжести. На коже туловища определялись мелкие везикулы. Отмечался акроцианоз. Активность и мышечный тонус снижены. Сухожильные рефлексы у ребенка ослаблены. Физиологические рефлексы неотчетливые. Тоны сердца приглушены, ритмичные до 150-168 ударов в 1 минуту. Частота дыхательных движений 40-58 в 1 минуту. Дыхание в легких проводилось над большей их поверхностью, пуэрильное. Однако встречались ограниченные участки ослабления дыхания.

Анализ крови ребенка при рождении: лейкоциты – 21,0·10⁹/л, с/я – 69%, п/я – 1%, лимфоциты – 24%, моноциты – 6%. Концентрация среднемолекулярных пептидов в надосадочной жидкости назофарингеального аспирата составляла 0,614 единиц оптической плотности, а в плазме крови из вены пуповины – 0,315 единиц оптической плотности.

Источники информации

2. А.с. 1516980 СССР, МКИ³ A1 G01N 33/53. Способ диагностики внутриутробной инфекции/ О.А.Аксенов, З.А.Осипова, Г.П.Курбатова, В.Ф.Мельникова (СССР). – №4249708 / 28-14. Заявлено 25. 05. 87. Опубл. 23.10.89. Бюл. №39, – 2 с.

3. Тец В.В. Справочник по клинической микробиологии: СПб.: Стройлеспечать, 1994, – 224 с.

Формула изобретения

Способ диагностики эндотоксикоза путем определения среднемолекулярных пептидов у новорожденных, отличающийся тем, что концентрацию среднемолекулярных пептидов определяют в надосадочной жидкости носоглоточного аспирата, при этом эндотоксикозу вирусной этиологии, обусловленному внутриутробным инфицированием вирусом гриппа A(H3N2), соответствуют значения 0,390-0,475 единиц оптической плотности, а эндотоксикозу вирусно-бактериальной этиологии, обусловленному внутриутробным инфицированием вирусом гриппа A(H3N2) и Staphylococcus aureus, соответствуют значения 0,476-0,625 единиц оптической плотности.