Патент на изобретение №2342661

(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ГИПОКСИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЙ ЦНС У НОВОРОЖДЕННЫХ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, и касается способа ранней диагностики степени тяжести перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных. Способ заключается в том, что в пуповинной крови при рождении ребенка определяют относительное содержание CD56+CD95L+ лимфоцитов и при его значении, равном 7,1% или более, диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС легкой степени тяжести, а при значении показателя, равном 4,4% или менее, диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС средней степени тяжести. Использование способа позволяет при рождении ребенка выявить перинатальное гипоксическое поражение с высокой точностью. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и детской неврологии, и может быть использовано для диагностики легкой и средней степени тяжести перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных.

Актуальность разработки способа определяется ростом частоты перинатальных поражений ЦНС (ПП ЦНС), высокой летальностью и инвалидизацией при них [1]. Диагностика перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных детей нередко бывает затруднена вследствие не всегда четкой и ясной картины неврологических симптомов [2]. Клинические проявления патологии нервной системы у новорожденных не всегда отражают истинную тяжесть состояния, степень поражения ЦНС и дальнейший прогноз развития ребенка [3]. Поэтому разработка способа ранней дифференциальной диагностики ПП ЦНС гипоксического генеза легкой и средней степени тяжести у новорожденных является актуальной. Способ позволит диагностировать перинатальные поражения ЦНС с определением их степени тяжести в первые сутки жизни, назначать адекватную терапию церебральных нарушений и предотвратить инвалидизирующие последствия.

Недостатки способа:

1) уровень белка S-100 достоверно повышается только при тяжелых формах перинатальных поражений ЦНС, что не позволяет использовать его для диагностики перинатальных поражений ЦНС легкой и средней степени тяжести;

2) для осуществления метода требуется пятикратный забор крови, что наносит болевую травму новорожденному и может отрицательно сказаться на течении основного заболевания;

3) высокая экономическая стоимость способа (необходимость закупки дорогостоящих специальных наборов реактивов для определения уровня белка S-100 методом непрямого иммуноферментного анализа).

Недостатки способа:

3) не позволяет рано диагностировать перинатальные поражения ЦНС, т.к. требуется повторное исследование на 28 день жизни.

Недостатки способа:

1) высокая травматичность способа;

2) необходим забор ликвора и венозной крови;

3) не указывается день жизни, на который проводится исследование;

4) не указывается точность данного метода.

Данный способ выбран нами в качестве ближайшего аналога (прототипа). Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявляемого способа является ранняя диагностика перинатальных гипоксических поражений ЦНС легкой и средней степени тяжести у доношенных новорожденных путем определения в пуповинной крови при рождении относительного содержания CD56+CD95L+ лимфоцитов, при значении показателя, равном 7,1% или более, диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС легкой степени тяжести, а при значении показателя, равном 4,4% или менее, диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС средней степени тяжести с точностью 87,5%.

Новизна способа

Впервые предлагается ранняя (при рождении ребенка) диагностика перинатальных гипоксических поражений ЦНС легкой и средней степени тяжести у доношенных новорожденных по определению относительного содержания CD56+CD95L+ лимфоцитов в пуповинной крови. Известно, что популяция CD56+ лимфоцитов обладает слабовыраженным цитотоксическим действием, но является источником разнообразных цитокинов, таких как GM-CSF, IFN, TNF, IL-2, LIF, и такого важного регулятора роста, как TGF- [4]. Кроме того, TGF- обладает иммуносупрессивным действием [5; 6]. FasL, экспрессирующийся на поверхности эффекторных клеток, защищает их от запуска программы апоптоза [7]. По литературным данным, одним из возможных механизмов повреждения нервной ткани при перинатальных гипоксических поражениях ЦНС является синтез аутоантител против антигенов нервной ткани [8].

Учитывая эти данные, можно предположить, что высокое содержание CD56+CD95L+ лимфоцитов в пуповинной крови новорожденных детей с ПП ЦНС легкой степени тяжести снижает риск развития аутоиммунных реакций в ткани мозга. При этом у детей с ПП ЦНС средней степени тяжести этот механизм не реализуется, т.к. относительное содержание CD56+CD95L+ лимфоцитов в пуповинной крови у них значительно снижено.

Высокий уровень CD56+ лимфоцитов ассоциируется с противовирусным ответом [9]. Значительное повышение CD56+ лимфоцитов в периферической крови было выявлено у новорожденных с малыми аномалиями развития сердца [10]. Снижение относительного содержания CD56+лимфоцитов в периферической крови было выявлено у детей с впервые диагностированным сахарным диабетом 1-го типа [11]. Однако изменения содержания CD56+CD95L+ лимфоцитов в пуповинной крови для определения степени тяжести ПП ЦНС используется впервые.

Отличительные признаки способа:

установлен диагностический параметр относительного содержания CD56+CD95L+ лимфоцитов пуповинной крови, при значении которого, равном 7,1% или более, диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС легкой степени тяжести, а при значении показателя, равном 4,4% или менее, диагностируют перинатальное гипоксическое поражение ЦНС средней степени тяжести.

Способ осуществляется следующим образом.

1. При рождении ребенка производят забор в пробирку 0,5 мл пуповинной крови.

2. Выделение лимфоцитов из пуповинной крови осуществляется стандартным методом – центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина [8].

3. В 1 пробирку, содержащую 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×10⁶ кл/мл, добавляют 20 мкл моноклональных анти-СD56 AT, меченных FITC или РЕ, и 20 мкл моноклональных анти-СD95L AT, меченных FITC или РЕ (в зависимости от первой метки). Клетки инкубируют с моноклональными антителами в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки в пробирках ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора [9].

4. Учет реакции проводят на проточном цитофлуориметре, определяя в лимфоцитарном гейте процентное (относительное) содержание CD56+CD95L+ клеток.

5. Способ осуществляется в течение 1 часа 10 минут.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Ребенок Л. родился от III беременности, осложнившейся ОРВИ в 6-7 недель, угрозой прерывания в 25 и 36 недель, гестозом легкой степени тяжести. Своевременные III роды в 38-39 недель. Оценка по шкале Апгар 7-8 баллов. Масса тела при рождении 3000 г., рост 50 см. Большой родничок 1,5×1,5 см. В первые сутки жизни состояние ребенка удовлетворительное.

При рождении по заявляемому способу в пуповинной крови определялось относительное содержание CD56+CD95L+, равное 11,2%, что выше заявляемого (7,1%) уровня, как критерия ранней диагностики перинатального гипоксического поражения ЦНС легкой степени тяжести.

На 2 сутки жизни состояние ребенка ухудшилось до средней тяжести, появилась гипервозбудимость, тремор подбородка и рук, акроцианоз. На основании клинической картины и данных нейросонографии поставлен диагноз: хроническая внутриутробная гипоксия плода, перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия I степени гипоксически-ишемического генеза, гипертензивный синдром, синдром нейрорефлекторной возбудимости, что соответствует легкой степени тяжести.

Таким образом, способ ранней диагностики легкой степени тяжести перинатального гипоксического поражения ЦНС у новорожденных по предложенному методу подтвердился.

Пример 2. Ребенок Т. родился от I беременности, протекавшей без осложнений. Своевременные I роды в 38-39 недель. Оценка по шкале Апгар 7-8 баллов. Масса тела при рождении 3150 г., рост 49 см. Состояние ребенка при рождении удовлетворительное.

При рождении по заявляемому способу в пуповинной крови определялось относительное содержание CD56+CD95L+, равное 7,1%, что соответствует заявляемому (7,1%) уровню, как критерию ранней диагностики перинатального гипоксического поражения ЦНС легкой степени тяжести.

На 2 сутки жизни – тремор подбородка и рук, мышечная дистония. Большой родничок 2,5×2,5 см. На основании клинической картины и данных нейросонографии поставлен диагноз: перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия I степени гипоксически-ишемического генеза, гипертензивный синдром, синдром нейрорефлекторной возбудимости, что соответствует легкой степени тяжести.

Таким образом, способ ранней диагностики легкой степени тяжести перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных по предложенному методу подтвердился.

Пример 3. Ребенок Г. родился от IV беременности, протекавшей на фоне ожирения II, анемии I степени, осложнившейся гестозом средней степени тяжести. Своевременные I роды в 40 недель. Оценка по шкале Апгар 5-6 баллов. Масса тела при рождении 3600 г., рост 56 см. При рождении по заявляемому способу в пуповинной крови определялось относительное содержание CD56+CD95L+, равное 2,6%, что ниже заявляемого (4,4%) уровня.

Общее состояние ребенка при рождении средней степени тяжести. Двигательная активность снижена, крик громкий. В динамике наблюдения появилась мышечная дистония, больше в дистальных отделах конечностей, вздрагивания, акроцианоз. Большой родничок 2×2 см, напряженный.

На третьи сутки жизни проведена нейросонография. На основании полученных данных и с учетом клинической картины был поставлен диагноз: хроническая внутриутробная гипоксия плода, перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия II степени гипоксически-ишемического генеза, гипертензивно-гидроцефальный синдром, синдром угнетения. Заключение: диагностируется перинатальное гипоксическое поражение ЦНС средней степени тяжести.

Таким образом, способ ранней диагностики средней степени тяжести перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных по предложенному методу подтвердился.

Пример 4. Ребенок П. родился от VI беременности, протекавшей на фоне анемии II степени, гипертонической болезни и осложнившейся гестозом средней степени тяжести. Своевременные IV роды в 40 недель. Оценка по шкале Апгар 7-8 баллов. Масса тела при рождении 3600 г., рост 56 см. Общее состояние при рождении удовлетворительное.

При рождении по заявляемому способу в пуповинной крови определялось относительное содержание CD56+CD95L+, равное 4,4%, что соответствует заявляемому (4,4%) уровню. Заключение: диагностируется перинатальное гипоксическое поражение ЦНС средней степени тяжести.

На 2-е сутки жизни состояние ребенка ухудшилось. Появилась вялость, гиподинамия, общая мышечная гипотония, гипорефлексия, отмечалось снижение рефлексов сосания. Большой родничок 2×2 см.

На третьи сутки жизни проведена нейросонография. На основании полученных данных и с учетом клинической картины был поставлен диагноз: хроническая внутриутробная гипоксия плода, перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия II степени гипоксически-ишемического генеза, синдром угнетения. Заключение: диагностируется перинатальное гипоксическое поражение ЦНС средней степени тяжести.

Таким образом, способ ранней диагностики средней степени тяжести перинатальных гипоксических поражений ЦНС у новорожденных по предложенному методу подтвердился.

Пример 5. Ребенок Б. родился от II беременности, осложнившейся угрозой прерывания в 12 недель. Своевременные II роды в 38 недель. Оценка по шкале Апгар 8-9 баллов. Масса тела при рождении 3200 г., рост 51 см. Состояние ребенка при рождении оценено как удовлетворительное. При рождении по заявляемому способу в пуповинной крови определялось содержание CD56+CD95L+ лимфоцитов, равное 5,6%, что ниже заявляемого при диагностике ПП ЦНС легкой степени (7,1%) и выше заявляемого для диагностики ПП ЦНС средней степени тяжести (4,4%) уровня. Заключение: здоровый новорожденный.

На протяжении неонатального периода при осмотре неонатолога и невролога ребенок здоров.

Таким образом, способ ранней диагностики перинатальных поражений ЦНС у новорожденных по предложенному методу подтвердился.

Преимущества способа.

1. Возможность ранней (при рождении) диагностики степени тяжести перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных.

2. Высокая точность – 87,5%.

3. Простота, быстрота (1 час 10 минут) и доступность выполнения методики.

4. Исследуется малый объем крови (0,5 мл).

5. Предлагаемый способ нетравматичен.

6. Дает возможность своевременно провести лечебные мероприятия и скорректировать тактику лечения в зависимости от степени тяжести поражения ЦНС, что позволит предупредить тяжелые последствия перинатальной патологии ЦНС.

Указанным способом обследовано 40 новорожденных детей.

Группа обследованных	Общее количество обследованных	Количество обследованных с подтвердившимся диагнозом	Точность способа (%)	Коэффициент достоверности
Новорожденные дети с ПП ЦНС со значением CD56+CD95L+7,1 или 4,4%	40	35	87,5	Р<0,01

Использованная литератуза

4. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Хорева М.В., Соколова Е.В. Система цитокинов, комплемента и современные методы иммунного анализа. – М.: РГМУ, 2001. – 158 с.

9. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты: Руководство для врачей. – СПб, 1998. – 113 с.

10. Вторушина В.В. Иммунные аспекты формирования малых аномалий развития сердца: Автореферат дис. канд. мед. наук. – М., 2006. – 20 с.

Формула изобретения

Способ ранней диагностики степени тяжести перинатальных гипоксических поражений ЦНС у доношенных новорожденных путем исследования периферической крови, отличающийся тем, что в пуповинной крови определяют относительное содержание CD56+CD95L+ лимфоцитов и при его значении, равном 7,1% или более диагностируют легкую, а при значении показателя, равном 4,4% или менее среднетяжелую степень перинатального гипоксического поражения ЦНС.