Патент на изобретение №2338201

(54) СПОСОБ ФОРМИРОВАНИЯ ГРУПП РИСКА ПО РАЗВИТИЮ ОСТЕОПОРОЗА У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано при формировании групп риска по возникновению остеопороза с последующим мониторированием с целью осуществления профилактических мероприятий. Способ обеспечивает точный прогноз риска развития остеопороза у детей. Проводят остеоденситометрию, отбирают детей и подростков с наличием функциональной остеопении, исследуют активность протеолитических ферментов в сыворотке крови и при выявлении катепсин L-подобной активности фермента более 0,386 нмоль/мл в минуту регистрируют высокий уровень предрасположенности к остеопорозу и включают их в группу риска.

(56) (продолжение):

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для выявлении детей и подростков, предрасположенных к развитию остеопороза, с целью последующего мониторирования и проведения профилактических мероприятий.

Измерение минеральной плотности костной ткани (костная денситометрия) основана на определении минерального компонента костной ткани. Это наиболее чувствительный метод для выявления остеопороза и оценки степени его тяжести по Т и Z критериям, который признан в настоящее время «золотым стандартом». Основными показателями, измеряемыми при денситометрии, являются содержание минеральных компонентов кости в разных отделах скелета, выраженное в граммах минерала в одном см²

Задача изобретения: разработать способ формирования групп риска по развитию остеопороза на основе активности протеолитических ферментов.

При решении задачи достигается положительный лечебный и экономический эффект. Своевременное прогнозирование риска развития остеопороза у детей и подростков дает возможность проведения комплекса профилактических мероприятий в группах риска.

Технический результат достигается за счет того, что определяют активность протеолитического фермента – катепсина L, повышение секреции которого в сыворотке крови регистрируется еще до появления денситометрических признаков остеопороза. Усиление секреции лизосомальных гидролаз в сыворотку крови происходит в результате усиления катаболических процессов в костной ткани. Основной протеолитической протеазой в процессе деградации главных компонентов органического матрикса кости – коллагена и протеогликанов – являются катепсины К и L, причем только катепсин L секретируется в сыворотку крови в достаточно высоких концентрациях. Моментально получить результат позволяет спектрофлуориметрический метод исследования сыворотки.

Поставленная задача решается за счет того, что проводят остеоденситометрию, отбирают детей и подростков с наличием функциональной остеопении, исследуют активность протеолитического фермента в сыворотке крови и при выявлении катепсин L-подобной активности фермента более 0,386 нмоль/мл в мин регистрируют высокий уровень предрасположенности к остеопорозу и включают их в группу риска.

Способ осуществляется следующим образом. Проводят остеоденситометрию детям и подросткам, из них отбирают группу с наличием функциональной остеопении, у которой исследуют сыворотку крови для определения катепсин L-подобной активности. Забор крови производят в количестве 10 мл. Кровь центрифугируют при 3000 оборотов в мин в течение 20 мин. Затем отбирают пипеткой сыворотку крови и определяют активность ферментов. Для определения катепсин L-подобной активности в сыворотке крови используют субстрат Z-Phe-Arg-NMCA (НПО “Вектор”, Кольцове, Новосибирская обл.) с добавлением в инкубационную смесь селективного ингибитора катепсина В СА-074 (Sigma, USA). Инкубационная смесь содержит 200 мкл 12,5 мМ раствора субстрата, 100 мкл исследуемых образцов, 175 мкл 0,2 М фосфатного буфера, рН 5,5 и 25 мкл 200 мМ CA-074 [N-(L-3-транс-пропилкарбоилоксирин-2-карбонил)-L-изолейцин-L-пролин, “Sigma”, USA] в концентрации 1×10^-9. Смесь инкубируют 20 мин при 37°С, реакцию останавливают 2000 мкл раствора 0,1 М монохлоруксусной кислоты, 0,13 М NaOH и 0,1 М уксусной кислоты, рН 4,3. при 355 нм (возбуждение) и 460 нм (эмиссия) на спектрофлуориметре “Perkin Elmer” 650-10S, Япония. Удельную катепсин L-подобную активность выражают в нмоль /мл в минуту. При выявлении активности 0,386 нмоль/мл и более устанавливают высокий риск предрасположенности к развитию остеопороза и включают в группу риска для динамического наблюдения и проведения профилактических мероприятий.

Пример конкретного выполнения

Обследованы на остеоденситометре HOLOGIC (QDR, Discovery-A, USA) 486 детей и подростков школы №54 г.Новосибирска в возрасте от 7 до 17 лет (239 мальчиков и 247 девочек). По результатам денситометрического обследования всех детей разделили на три группы: здоровые 326 человек (68%) (с нормальными показателями минеральной плотности костной ткани), с остеопенией 107 человек (21%) (со снижением минеральной плотности костной ткани по всем отделам скелета по Z-критерию от 1,2 до – 2,5), с остеопорозом 54 человека (11%) (со снижением минеральной плотности костной ткани по всем отделам скелета по Z-критерию более – 2,5).

Для определения катепсин L-подобной активности у детей с остеопенией осуществлялся забор крови из вены объемом 10 мл для получения сыворотки. В этой группе катепсин L-подобная активность в сыворотке крови составила 0,386±0,112 нмоль/мл в минуту. У 78 детей этот показатель был выше 0,386 нмоль/мл в минуту. Эти дети включены в группу риска по развитию остеопороза.

Формула изобретения

Способ формирования групп риска по развитию остеопороза у детей и подростков путем биохимических исследований сыворотки крови, отличающийся тем, что проводят остеоденситометрию, отбирают детей и подростков с наличием функциональной остеопении, исследуют активность протеолитических ферментов в сыворотке крови и при выявлении катепсин L-подобной активности фермента более 0,386 нмоль/мл в минуту регистрируют высокий уровень предрасположенности к остеопорозу и включают их в группу риска.