Патент на изобретение №2335293
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКОЙ, НООТРОПНОЙ, ПРОТИВОСУДОРОЖНОЙ, АНТИДЕПРЕССИВНОЙ, ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СПОСОБНОСТЬЮ НОРМАЛИЗОВАТЬ ПРОЦЕССЫ ПЕРЕДАЧИ В СИНАПСАХ МОЗГА
(57) Реферат:
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается применения средства растительного происхождения в качестве средства, обладающего анксиолитической, ноотропной, противосудорожной, церебропротекторной активностью и способностью нормализовать процессы передачи в синапсах мозга. Предложено применение водного или водно-спиртового или углекислотного экстракта растения рода незабудки (Myosotis) в качестве средства, обладающего анксиолитической, ноотропной, противосудорожной, церебропротекторной активностью и способностью нормализовать процессы передачи в синапсах мозга. Экстракт незабудки может быть использован в жидкой форме и в форме сухого экстракта. Средство обладает широким спектром терапевтического действия по заявленному фармакологическому назначению. 2 з.п. ф-лы, 9 табл.
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается применения средства растительного происхождения в качестве средства, обладающего анксиолитической, ноотропной, противосудорожной, церебропротекторной активностью и способностью нормализовать процессы передачи в синапсах мозга. Экстракты некоторых лекарственных растений с незапамятных времен использовались для снижения стресса и для избавления от страха во многих различных культурах во всем мире, и ряд анксиолитических и седативных принципов выделен из высших растений и охарактеризован в новейшее время. И в самом деле такие соединения транквилизатора бензодиазепина, как диазепам (“VALIUM”), оксазепам (“SERAX”) и лоразепам (“ATIVAN”), которые, как полагали, представляют собой наиболее существенные синтетические анксиолитические средства, оказывающие превосходные эффекты, теперь однозначно признаны встречающимися в природе соединениями растительного происхождения, обнаруженными в картофеле, соевых культурах, чечевице, кукурузе, пшенице, гречихе, рисе, овсе, ячмене и просе (см. Wildmann et al., J. Neural Transm. (1987) 70: 383-398; Wildmann, J. Biochem. Biophys. Res. Commun. (1988) 157: 1436-1443; Wildmann et al., Biochem. Pharmacol. (1988) 37: 3549-3559; Unseld et al., Biochem. Pharmacol. (1989) 38: 2473-2478; Klotz, U., Life Sci. (1991) 48: 209-215; Bringmann, G., J. Neural Transm. (1992) 88: 77-82). До настоящего времени неизвестно средство, обладающее столь широким фармакологическим действием, а именно анксиолитической, ноотропной, противосудорожной, антидепрессивной, церебропротекторной активностью и обладающего способностью нормализовать процессы передачи в синапсах мозга. Задачей настоящего изобретения является разработка средства, представляющего собой комплекс экстрактивных веществ, выделенных из растительного сырья, и проявляющего анксиолитическую, ноотропную, противосудорожную, антидепрессивную, церебропротекторную активность и, способностью нормализовать процессы передачи в синапсах мозга. Данная задача решена следующим образом. Предложено применение водного, или водно-спиртового, или углекислотного экстракта растения рода незабудки (Myosotis) в качестве средства, обладающего анксиолитической, ноотропной, противосудорожной, церебропротекторной активностью и способностью нормализовать процессы передачи в синапсах мозга. Экстракт незабудки может быть использован в жидкой форме и в форме сухого экстракта. Для подтверждения заявляемой активности были проведены исследования по влиянию заявляемого средства в сравнении с прототипом на устойчивость животных к действию судорожных ядов, на реакцию поведенческого отчаяния, на выработку и воспроизведение условного рефлекса при ее нарушении в результате блокады холинергической передачи в мозгу, на поведение крыс в условиях конфликтной ситуации, на ориентировочно-исследовательское поведение мышей с разным типом эмоционально-стрессового реагирования в условиях «открытого поля» и на выработку условного питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой. Заявляемое средство было исследовано в трех вариантах: 1) на основе сырья незабудки полевой (Myosotis arvensis. L) – заявляемое средство «Вариант 1» (далее по тексту В1), 2) незабудки лесной (Myosotis sylvatica L.) – заявляемое средство «Вариант 2» (далее по тексту В2), 3) незабудки болотной (Myosotis palustris L.) – заявляемое средство «ВариантЗ» (далее по тексту В3). Заявляемое средство и прототипы во всех приводимых ниже примерах использованы в максимально эффективных дозах, установленных в предварительных экспериментах. Пример №1. Изучение влияния препаратов на проявление действия судорожных ядов Наиболее близким к заявляемому средству по противосудорожному действию (прототип) является экстракт водяники черной (Empetrum nigrum, L.) [1]. Было исследовано влияние заявляемого средства В1 и прототипа на судорожную активность тиосемикарбазида и коразола. При проведении исследований заявляемое средство и прототип применяли курсами по 5 введений. Заявляемое средство вводили в дозе 1 мл/кг и экстракт водяники черной вводили в дозе 200 мг/кг. При исследовании противосудорожного действия по отношению к судорогам, вызываемым коразолом, через 1 час после 5-го введения препаратов мышам в хвостовую вену дробно по 0.02 мл/10 сек вводили коразол в виде 1% раствора на изотоническом растворе хлористого натрия. Регистрировали суммарный объем введенного раствора до появления клонико-тонического судорожного припадка, заканчивающегося смертью животного. Количество раствора коразола в дальнейшем пересчитывали на его дозу в мг/кг массы тела мыши [2]. Судорожный эффект тиосемикарбазида основан на способности нарушать синтез гамма-аминомасляной кислоты. Его введение приводит через некоторое время к развитию генерализованного судорожного припадка и гибели животного. Способность препаратов отсрочивать наступление судорог или предотвращать гибель животных хорошо характеризует противосудорожные свойства вещества и свидетельствует о его положительном влиянии на обмен ГАМК или усиление активности ГАМК-ергических систем. В наших экспериментах тиосемикарбазид вводился внутрибрюшинно на физиологическом растворе в дозе 26 мг/кг. Регистрировали время наступления судорожного припадка и время гибели животных. Исходным моментом считали время введения тиосемикарбазида [3]. Проведенные исследования (табл.1) показали, что прототип в 200 мг/кг существенно повысил латентное время наступления судорог, вызываемых тиосемикарбазидом, и на 25% снизил гибель мышей при применении этого судорожного яда в использованной дозе, в то время как в контрольной группе при действии тиосемикарбазида наблюдалась 100%-процентная смертность. Прототип на 39,9% повысил смертельную дозу коразола. При применении заявляемого средства В1 произошло увеличение латентного времени наступления судорог после введения тиосемикарбазида на 147%, доля погибших животных снизилась до 42%. Заявляемое средство В1 вызвало увеличение смертельной дозы коразола на 83%.
Заявляемое средство В1 превосходит прототип по своему противосудорожному действию как по отношению к судорогам, вызываемым коразолом, так и по отношению к судорогам, вызываемым тиосемикарбазидом. Пример №2. Исследование влияния заявляемого средства В1 в сравнении с прототипом на реакцию поведенческого отчаяния. Исследования проводились в условиях модели, предложенной Порсольтом [4]. Данный тест является одним из наиболее распространенных исследовательских приемов при изучении веществ с антидепрессантным типом действия [5]. Тест основан на наблюдении, что при помещении мышей и крыс в неизбегаемую стрессовую ситуацию, например в цилиндры, заполненные водой, после ряда активных попыток избавления животные замирают в характерной позе, называемой «реакцией поведенческого отчаяния». Длительность иммобилизации считается критерием депрессивного состояния животных [6]. В наших экспериментах мышей по одной помещали в стеклянные цилиндры диаметром 80 мм, заполненные водой на 60 мм. Регистрировали продолжительность иммобилизации в первые 6 минут и в последующие 10 минут отдельно. Считается, что сокращение времени иммобилизации в первые 6 минут может служить основанием для прогноза антидепрессивных свойств препаратов, в то время как изменение этого показателя в последующие 10 минут отражает психостимулирующую активность [7]. В качестве прототипа по данному виду активности был взят препарат гинсана (фирма “Pharmaton”, Швейцария), созданный на основе стандартизованного экстракта женьшеня, обладающий атидепрессантной, психостимулирующей и ноотропной активностью. В частности, для него показано положительное влияние на обмен биогенных аминов мозга, что считается основой механизма фармакологической активности многих антидепрессантов [8, 9, 10]. Проведенные исследования показали, что прототип и заявляемое средство В1 увеличили латентное время первого эпизода иммобилизации, существенно снизили продолжительность иммобилизации в первый период исследования (с 1 по 6 минуты), уменьшили количество эпизодов иммобилизации как в первый, так и во второй (с 7 по 16 минуты) период исследования (табл.2). При этом заявляемое средство В1 существенно превосходило по активности прототип.
Пример №3. Исследование влияния заявляемого средства (В1) в сравнении с прототипом на процессы памяти при нарушении передачи сигналов в холинергических синапсах. Нарушение процесса запоминания и воспроизведения навыка при нарушении холинергических механизмов высшей нервной деятельности, вызываемых введением скополамина, является одним из наиболее распространенных методических приемов в исследовании механизмов памяти [12]. Фармакологические манипуляции холиноактивными средствами дают неоднозначные результаты [13]. Однако современные исследователи придают большое значение таким изысканиям, так как нарушения регуляции когнитивных функций со стороны холинергической системы являются одним из основных предполагаемых звеньев в механизме развития болезни Альцгеймера, а коррекция данных нарушений агонистами холинергической системы дает положительные результаты в лечении данного заболевания [14, 15]. Амнестическое действие скополамина достигалась его введением в дозе 2,5 мг/кг подкожно за 20 минут до выработки рефлекса, через 1 час после последнего введения препаратов (животным интактного контроля вводили эквивалентное количество физиологического раствора). Строго через 20 минут после инъекции скополамина у мышей вырабатывался условный рефлекс пассивного избегания. Прототипом в данном эксперименте также служил препарат Гинсана. Методика условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) основана на подавлении врожденного рефлекса предпочтения темного пространства, имеющегося у грызунов [16]. Экспериментальная установка представляла собой камеру, состоящую из двух отсеков: большого – освещенного и малого – темного. Животное помещалось в светлый отсек и вскоре (через 10-20 секунд) в силу врожденного рефлекса предпочтения темного пространства переходило в малый отсек, после чего дверка, соединяющая оба отсека, перекрывалась и на пол темного отсека, состоящего из параллельных чередующихся электродов, подавали электрический ток импульсами продолжительностью 50 Mc, частотой 5 Гц и амплитудой 50 мА. Через 10 секунд дверку открывали и животное могло выскочить в светлый отсек с обычным полом. В результате описанной процедуры у животных вырабатывался условный рефлекс избегания темного пространства. При проверке воспроизводимости рефлекса животных помещали в светлый отсек в угол, противоположный от входа в темный отсек, и наблюдали в течение 3-х минут. Регистрировали время первого захода в темный отсек (латентное время захода), суммарное время пребывания в темном отсеке. Выработанным рефлекс считался, если в течение всех 3-х минут наблюдения животное ни разу не посетило темный отсек. О качестве рефлекса судили по доле животных с наличием рефлекса. Проверка рефлекса осуществлялась через 24 часа после выработки. Введение заявляемого средства и прототипа проводили курсом в течение 4-х дней, предшествовавших экспериментальному воздействию один раз в день зондом в желудок, и 5-й раз за 1 час до выработки условного рефлекса. Проведенные исследования (табл.3) показали, что скополамин существенно нарушил воспроизведение УРПИ. Заявляемое средство В1 полностью восстановило рефлекс, выработанный на фоне скополамина. При этом качество его воспроизведения было лучше, чем на интактном фоне. Однако этот факт носит относительный характер. Несмотря на статистически значимые различия, они не имели существенного значения. Прототип также вызвал улучшение воспроизведения рефлекса, однако по активности он существенно уступал заявляемому средству.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
; n=16)
; n=12)