Патент на изобретение №2334986

(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ОПУХОЛЕЙ ЯИЧНИКОВ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, онкогинекологии, и может быть использовано для ранней диагностики опухолей яичников. Сущность способа: супернатант эндометриального смыва после предварительного определения в нем концентрации общего белка подвергают количественному тесту на содержание карбонильных групп белков. Уровень карбонильных групп белков 0-1,9 нмоль/мг соответствует нормальным значениям параметра, опухоли придатков нет. При уровне карбонильных групп белков 2,0-3,5 нмоль/мг судят о доброкачественных опухолях яичников. При уровне карбонильных групп белков 3,6-4,9 нмоль/мг – о злокачественных опухолях яичников. Использование способа позволяет повысить эффективность раннего выявления эпителиальных опухолей яичников у женщин из групп риска в короткие сроки, что позволяет своевременно провести органосохраняющее лечение.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”telopeptide of type I collagen (ICTP) in predicting prognosis in epithelial ovarian cancer. Gynecol Oncol. 2001, Jul; 82(1), p.110-115. реф. Найдено из БД PubMed, PMID: 11426971. [Найдено 18.01.2007] [он-лайн].

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, онкогинекологии, и может быть использовано для ранней диагностики опухолевых процессов яичников.

Несмотря на бурное развитие современных технических средств диагностики ОЯ, до сих пор не существует специфических тестов, позволяющих на начальных этапах, без проведения патогистологического исследования, дифференцировать доброкачественный и злокачественный процессы. Так, например, частота предоперационных ошибок для злокачественных ОЯ составляет 25-51%, для доброкачественных – 3-31,3%, для опухолевидных образований – 30,9-45,6% [Серов В.Н., Кудрявцева Л.И. Доброкачественные опухоли и опухолевидные образования яичников. – М.: Триада-Х. – 1999. – 149 с.]. Повышение точности дифференциальной диагностики важно, так как существуют принципиальные различия в тактике ведения больных доброкачественными и злокачественными ОЯ, особенно при планировании органосохраняющих операций с использованием эндоскопической техники.

Дополнительным методом ультразвуковой диагностики является цветное допплеровское картирование, которое позволяет визуализировать кровоток исследуемого органа с помощью ультразвуковой аппаратуры, снабженной допплеровским блоком.

Недостатками этих методов являются:

– необходимость наличия соответствующего оборудования, специально обученного персонала для ультразвуковой диагностики и условий для проведения исследования;

– сложность интерпретации эхо-картины больных с объемными процессами внутренних гениталий.

Другим методом лучевой диагностики, позволяющим установить топику и стадию распространения процесса, является компьютерная томография (КТ). В основе метода лежит математическая обработка данных о поглощающей способности тканей при прохождении через них пучка рентгеновских лучей, в результате чего получается дифференцированное рентгенологическое изображение «пироговского» анатомического среза. Серийное исследование патологического очага в различных плоскостях дает возможность судить о величине, распространенности ОЯ. Метод позволяет определить с большой вероятностью характер и стадию процесса. В связи с большой лучевой нагрузкой на пациента, дороговизной оборудования очевидно, что КТ целесообразна только при углубленном обследовании пациенток при неясности в диагнозе.

Магнитно-резонансная томография (МРТ) – более совершенный метод лучевой диагностики. В основе лежит эффект ядерно-магнитного резонанса, т.е. избирательного поглощения различными тканями электромагнитного излучения. В отличие от КТ МРТ позволяет получить изображение внутренних органов в любом сечении. Особенно высокая чувствительность проявляется в изображении мягких тканей. Низкая энергия излучения, используемая в МРТ, существенно снижает его вредное воздействие на организм. Таким образом, широкое применение этого метода ограничено только высокой стоимостью аппаратуры.

Недостатки метода:

– малая выраженность специфических изменений при некоторых формах роста опухоли;

– технические трудности проведения обследования в связи со спаечным процессом в малом тазу и/или брюшной полости;

– может осуществляться только в условиях специализированных отделений стационара, оснащенных дорогостоящим оборудованием.

Недостатками метода являются:

– трудность получения материала для исследования при отсутствии свободной жидкости в брюшной полости;

– опасность разрушения капсулы образования, что может привести к диссеминации ракового процесса.

Недостатками прототипа являются:

– невозможность применения его для скрининга, так как уровень маркера не повышается при доброкачественных опухолях;

– высокий процент ложноположительных заключений: уровень СА-125 повышается при эндометриозе, миоме матки, нормальной беременности, остром панкреатите, циррозе печени; у молодых женщин концентрация маркера также может колебаться в течение менструального цикла.

Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности раннего выявления эпителиальных опухолей яичников у женщин из групп риска.

Поставленная цель в изобретении достигается тем, что супернатант эндометриального смыва после предварительного определения в нем концентрации общего белка подвергают количественному тесту на содержание карбонильных групп белков, уровень карбонильных групп белков 0-1,9 нмоль/мг соответствует нормальным значениям параметра, опухоли придатков нет, при уровне карбонильных групп белков 2,0-3,5 нмоль/мг судят о доброкачественных опухолях яичников, 3,6-4,9 нмоль/мг – о злокачественных опухолях яичников.

Установлено, что в основе механизма действия на организм большинства факторов среды и условий жизнедеятельности лежит избыточная продукция свободных радикалов, ведущая к нарушению свободнорадикального гомеостаза.

Исследования липидов, как основных объектов для «атаки» свободных кислородных радикалов, при целом ряде патологических процессов долгое время занимали лидирующее положение [Кашулина А.П. Особенности свободнорадикальных процессов при первично-множественных злокачественных заболеваниях у людей. Мед. консультация. – 2000. – №3. С.4-7].

Однако на сегодняшний день значительное место в патогенезе ряда заболеваний отводится последствиям окислительного повреждения белков (их агрегации, фрагментации), сопровождающихся необратимыми изменениями тканей. При этом одним из ранних показателей поражения тканей при формировании свободнорадикальной патологии являются маркеры окислительной модификации белков. Основным молекулярным механизмом окислительной модификации белков является появление в структуре белковой молекулы карбонильных групп [Фролова М.Ю. Возможности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови для оценки состояния «окислительного стресса» в клинической практике. Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. – СПб. – 2003. – 24 с.].

Следовательно, в сыворотке крови, а также в жидкости, непосредственно оттекающей из полости матки (в эндометриальных смывах), задолго до развития клиники заболевания появляются биологические маркеры в виде карбонильных групп белков.

Предлагаемым способом открываются перспективы использования биохимического исследования смывов из полости матки в комплексе диагностических мероприятий, направленных на раннее выявление опухолей яичников.

Указанный подход в диагностическом отношении оказался эффективнее, чем выявление этих же маркеров в сыворотке крови больных, где их концентрация была значительно ниже, особенно на начальных этапах формирования опухоли, и находилась под влиянием таких факторов, как возраст больных и наличие сопутствующей патологии. Полученный смыв из полости матки может быть использован для проведения одновременно иммунохимического, цитологического и кристаллографического методов исследования.

Способ осуществляется следующим образом. Эндометриальные смывы получают общепринятым способом. Ставятся две пробы: опытная и контрольная. В опытной пробе к 0,1 мл раствора белка добавляют 1 мл 20% ТХУ и 1 мл 2,4-ДНФГ. В контрольную пробу – 1 мл 20% ТХУ и 1 мл 2М HCl. Пробы с осажденным белком инкубируют 1 час при комнатной температуре, затем центрифугируют 15 минут при 3000 об/мин. Осадок промывают три раза смесью этанол-этил ацетата (1:1) по 1 мл до того момента, когда надосадочная жидкость станет бесцветной. Затем осадок подсушивают на кипящей водяной бане и растворяют в 2,5 мл 8М мочевины, добавляя одну каплю 2М HCl. На двухлучевом спектрофотометре записывают дифференциальные спектры поглощения 2,4-динитрофенилгидразонов белка [Фролова М.Ю. Возможности метода определения карбонильных групп белков сыворотки крови для оценки состояния «окислительного стресса» в клинической практике. Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. – СПб. – 2003. – с.50]. Концентрацию карбонильных групп белков рассчитывают по формуле ОП 363*113,6*10^-9/мг белка в исследуемом образце (ОП 363 – оптическая плотность раствора, измеренная при длине волны 363 нм).

Предлагаемый способ был успешно апробирован в гинекологических отделениях ООД, АМОКБ №1, КБ №2, ГКБ №5, г.Астрахани в 2004-2006 гг.

Обследовано 116 больных в возрасте от 17 до 73 лет с доброкачественными и злокачественными ОЯ. Контрольную группу составили 20 практически здоровых небеременных женщин различных возрастных групп.

Содержание карбонильных групп белков в эндометриальном смыве от 0 до 1,9 нмоль/мг соответствует нормальным значениям параметра, эти женщины в дальнейшем обследовании не нуждаются. Если концентрация окислительно модифицированных белков составила от 2,0 до 3,5 нмоль/мг, то судят о доброкачественных ОЯ; от 3,6 до 4,9 нмоль/мг – о злокачественных ОЯ. Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1

Больная Т., 52 года, поступила на оперативное лечение в гинекологическое отделение КБ №2 с диагнозом: опущение стенок влагалища, мочевого пузыря, прямой кишки.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 12 лет по 4 дня, цикл 28 дней, регулярные, умеренные. В анамнезе 2 беременности, из которых 1 завершилась родами, 1 – артифициальным абортом.

Сопутствующая патология.

Гипертоническая болезнь I ст.

Объективно: Молочные железы без патологии.

Status gynaecologicus. Наружные половые органы развиты правильно. Половая щель зияет. Пролабируют стенки влагалища и шейка матки. Тело матки не увеличено. Придатки отдельно не определяются. Своды свободные. Выделения слизистые.

Уровень карбонильных групп белков в смыве из полости матки 0 нмоль/мг, что соответствует нормальным значениям показателя. Опухоли придатков нет.

Пример 2

Больная М., 37 лет, при амбулаторном обследовании уровень карбонильных групп белков в смыве из полости матки составил 1,9 нмоль/мг, что соответствует нормальным значениям показателя.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 12 лет по 5 дней, через 28 дней, регулярные, умеренные. В анамнезе 3 беременности, из которых 2 завершились родами, 1 – самопроизвольным абортом.

Объективно: Молочные железы без патологии.

Status gynaecologicus. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища бледно-розового цвета. Шейка матки цилиндрическая, эпителий не изменен. Наружный зев щелевидный, закрыт.Тело матки не увеличено, придатки пальпируются.

УЗИ органов малого таза от 28.03.2006 г. Матка размером 50×38×54 мм. М-эхо 9 мм. Толщина эндометрия 6 мм. Яичники Д=25 мм. Свободной жидкости нет.

Пример 3

Больная К., 48 лет, поступила на оперативное лечение в гинекологическое отделение областного онкологического диспансера с диагнозом: опухоль правых придатков матки. В 1985 году перенесла оперативное лечение опухоли левого яичника (аднексэктомия). Опухоль правых придатков матки выявлена I/2006 г.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 14 лет по 4 дня, цикл 28 дней, регулярные, умеренные. В анамнезе 4 беременности, из которых 3 завершились родами, 1 самопроизвольный аборт.

Сопутствующая патология.

Гипертоническая болезнь I ст. Эутиреоидная струма I ст.

Объективно: Молочные железы без патологии.

Status gynaecologicus. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища бледно-розового цвета. Шейка матки цилиндрическая, эпителий не изменен. Наружный зев щелевидный, закрыт. Тело матки, придатки слева не пальпируются. Справа – ограниченно подвижное образование тугоэластической консистенции, верхний полюс которого находится в эпигастрии. Своды свободные. Выделения слизистые.

УЗИ органов малого таза от 28.03.2006 г. Матка размером 5×38×54 мм. Эндометрий 6 мм. Правые придатки – многокамерное жидкостное образование, верхний полюс – выше пупка на 12 см.

20.04.2006 г. выполнена надвлагалищная ампутация матки с придатками, резекция большого сальника.

Гистологическое исследование №7615-29 от 25.04.2006 г.

Матка – обычного строения, эндометрий в фазе пролиферации. Сальник – полнокровие с очаговой инфильтрацией.

Яичник – муцинозная цистаденома (доброкачественный процесс).

Карбонильные группы белков в смыве из полости матки 2,0 нмоль/мг белка, что соответствует доброкачественным опухолям яичников.

Пример 4

Больная С., 65 лет, при амбулаторном обследовании уровень карбонильных групп белков в смыве из полости матки составил 3,5 нмоль/мг белка, что соответствует доброкачественным опухолям яичников.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 14 лет по 4 дня, цикл 28 дней, регулярные, умеренные, безболезненные. В анамнезе 5 беременностей, из которых 4 завершились родами, 1 – самопроизвольным абортом.

Объективно: молочные железы без патологии.

Сопутствующая патология.

Атеросклероз аорты, сосудов головного мозга, сердца. Симптоматическая гипертония НК I.

Status gynaecologicus. Наружные половые органы развиты правильно. Влагалище емкое. В малом тазу пальпируется плотная неподвижная бугристая опухоль соответственно 16 нед. беременности. Инфильтратов нет. Выделения слизистые.

Больная поступила на оперативное лечение в гинекологическое отделение областного онкологического диспансера. 15.05.2006 г. выполнена экстирпация матки с придатками.

Гистологическое исследование №1037-58.

Матка – эндометрий атрофичный, железисто-фиброзный полип. В шейке матки – плоский эпителий. В яичниках – фиброз тека-ткани, белые тела, гиалиноз стенок сосудов. Фиброма левого яичника (доброкачественный процесс).

Пример 5

Больная Э., 47 лет, поступила в гинекологическое отделение областного онкологического диспансера на оперативное лечение по поводу опухоли придатков матки. Диагноз был впервые поставлен в Х/2005 г.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 14 лет по 5 дней через 21 день, регулярные, умеренные, безболезненные. В анамнезе 5 беременностей, из которых 2 завершились срочными родами, 3 – артифициальным абортом.

Сопутствующая патология.

Хронический бронхит. НЦД.

Объективно: Молочные железы – патологии не выявлено.

Status gynaecologicus. Наружные половые органы развиты правильно. Влагалище емкое, слизистая не изменена. Шейка матки цилиндрическая, эпителий не изменен. Матка плотная, нормальных размеров. Придатки с обеих сторон не пальпируются. В заднем своде – плоский инфильтрат.

19.11.2005 г. выполнена надвлагалищная ампутация матки с придатками. Резекция большого сальника.

Гистологическое исследование №2484-5000.

Матка обычного строения, эндометрий фазы пролиферации. В яичниках – фиброз тека-ткани, белые тела, гиалиноз стенок сосудов, группы раковых клеток в состоянии дистрофии (злокачественный процесс). Сальник – mts рака.

Карбонильные группы белков в смыве из полости матки 3,6 нмоль/мг белка, что соответствует злокачественным опухолям яичников.

Пример 6

Больная С., 50 лет, при амбулаторном обследовании содержание карбонильных групп белков в смыве из полости матки составило 4,9 нмоль/мг белка, что соответствует злокачественным опухолям яичников.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 13 лет по 5 дней, цикл 28 дней. В анамнезе 4 беременности, из которых 1 завершилась родами, 3 – артифициальным абортом.

Сопутствующая патология.

Атеросклероз аорты, сосудов головного мозга и сердца.

Объективно: молочные железы без патологии.

Status gynaecologicus. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища бледно-розового цвета. Шейка матки цилиндрическая, эпителий не изменен. В малом тазу пальпируется единый конгломерат, нижний полюс которого определяется через задний свод. Задний свод сглажен и инфильтрирован. Выделения слизистые.

УЗИ органов малого таза от 1.10.2006 г. Матка размерами 50×40×55 мм. М-эхо 2 мм. В матке полость 27×16 мм с неоднородным содержимым. Правый яичник 37×28×34 мм, левый яичник 77×46×67 мм. Левые придатки диффузно-неоднородной структуры, расположены над маткой. За правыми придатками – осумкованная жидкость 41×23 мм.

Больная поступила в гинекологическое отделение областного онкологического диспансера на оперативное лечение. 23.10.2006 г. выполнена надвлагалищная ампутация матки с придатками, резекция большого сальника.

Гистологическое заключение №22416-06 – эндометрий стадии пролиферации, яичник – белые тела, фиброз тека-ткани, железы умеренно-дифференцированной аденокарциномы (злокачественный процесс).

Предлагаемый способ диагностики ОЯ (скрининг – тест) позволяет в короткие сроки, в амбулаторных условиях, на малых объемах биологических жидкостей, с минимальными материальными затратами установить опухолевые процессы в яичниках. Материал для исследования (смыв из полости матки) может быть получен при амбулаторном обследовании женщин из групп риска в рамках программ скрининга. Способ достаточно прост в исполнении, не требует применения дорогих или токсичных реактивов, может быть выполнен в любой лаборатории, оснащенной спектрофотометрическим оборудованием. Интерпретация результатов возможна через 2-2,5 часа, однако необходимо отметить, что биохимические свойства препарата сохраняются и после воздействия низкой температуры (нами проведены сравнительные исследования), что позволяет хранить полученный материал в холодильной камере при t° -18°C в течение длительного времени.

Диагностическая ценность предлагаемого способа исследования значительно возрастает при сочетании его с ультразвуковой томографией.

Предполагается, что данная методика будет способствовать повышению эффективности ранней диагностики ОЯ у женщин из групп риска. Своевременное выявление данного контингента больных, особенно репродуктивного возраста, позволит рассчитывать на проведение органосохраняющего лечения, в том числе с использованием минимальных хирургических технологий, что приведет к снижению финансовых затрат на лечение и сохранению репродуктивной функции женщины.

Формула изобретения

Способ ранней диагностики опухолей яичников, основанный на исследовании биологических жидкостей, отличающийся тем, что супернатант эндометриального смыва после предварительного определения в нем концентрации общего белка подвергают количественному тесту на содержание карбонильных групп белков, уровень карбонильных групп белков 0-1,9 нмоль/мг соответствует нормальным значениям параметра, опухоли придатков нет, при уровне карбонильных групп белков 2,0-3,5 нмоль/мг судят о доброкачественных опухолях яичников, 3,6-4,9 нмоль/мг – о злокачественных опухолях яичников.