Патент на изобретение №2333771
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ГЕМОФИЛЕЗА И ПАСТЕРЕЛЛЕЗА СВИНЕЙ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida сероваров A, B и D и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров 1 и П, грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта. При этом в качестве продуцентов используют волов. Гипериммунизацию продуцентов проводят 7-10 – кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных клеток с интервалом 2-3 дня. А грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных клеток, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных клеток с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Способ нетрудоемок, прост в исполнении, позволяет увеличить выход сыворотки в 3,2-3,5 раза. 3 табл.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики гемофилеза и пастереллеза свиней. Известен способ изготовления гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, получаемой от продуцентов свиней (RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 – прототип). Однако данный способ экономически нецелесообразен: во-первых, не всегда в хозяйстве имеют место три вида инфекции: гемофилез, стрептококкоз и пастереллез; во-вторых, срок эксплуатации свиней составляет 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Напротив, срок эксплуатации волов не менее 5 лет. Технический результат заявляемого изобретения состоит в повышении выхода целевого продукта и упрощении способа. Указанный технический результат предлагаемого способа достигается тем, что для создания грундиммунитета волам (не более одного раза в пять лет) двукратно подкожно в разные участки тела вводят инактивированные и концентрированные гемофилезный и пастереллезный антигены: сначала по 10-15 миллиардов микробных тел (млрд м.т), а через 14 дней – по 20-25 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Гипериммунизацию волов проводят 7-10 внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах инактивированных и концентрированных антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общей дозе каждого антигена 1800-2400 млрд м.т. с интервалом 2-3 дня. В процессе эксплуатации после каждого взятия крови (16-17 см3 крови на 1 кг массы тела) через 1-2 дня проводят очередные внутримышечные инъекции инактивированного концентрированного гемофилезного и пастереллезного антигенов в дозе по 400-500 млрд м.т. каждого, а через 8-10 дней после этого от продуцентов снова берут кровь. Примеры выполнения грундиммунизации. Пример 1. Для создания грундиммунитета волам двукратно подкожно в разные участки тела вводили инактивированные и концентрированные гемофилезные и пастереллезные антигены: сначала по 10 млрд м.т., а через 14 дней – по 20 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Результаты определения активности. Титры сыворотки после грундирования составили:
Пример 2. В сравнении с примером 1 увеличили дозы антигенов при грундиммунизации: Вводили антигены: сначала по 15 млрд м.т., а через 14 дней – по 25 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Результаты определения активности. Титры сыворотки после грундирования составили:
Увеличение дозы антигенов при грундиммунизации сначала до 15 млрд м.т., а через 14 дней до 25 млрд м.т. не привело к повышению титра антител после грундирования. Пример 3. Увеличили дозы антигенов при грундиммунизации: Вводили антигены: сначала по 16 млрд м.т., а через 14 дней – по 26 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Результаты определения активности. Титры сыворотки после грундирования составили:
Увеличение дозы антигенов при грундиммунизации свыше сначала 15 млрд м.т., а через 14 дней – свыше 25 млрд м.т. не привело к повышению титра антител после грундирования. Увеличение дозы антигенов не выгодно с экономической точки зрения. Пример 4. Уменьшили дозы антигенов при грундиммунизации: Вводили антигены: сначала по 9 млрд м.т., а через 14 дней – по 19 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Результаты определения активности. Титры сыворотки после грундирования составили:
Уменьшение дозы антигенов меньше сначала 10 млрд м.т., а через 14 дней – меньше 20 млрд м.т. привело к снижению титра антител после грундирования.
Способ осуществляют следующим образом. Пример 1. Грундиммунизацию осуществляли подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 млрд м.т., а через 14 дней – по 20-25 млрд м.т. с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Гипериммунизацию волов проводили путем 10 внутримышечных инъекций в возрастающих дозах инактивированного и концентрированного гемофилезного и пастереллезного антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общем количестве 2400 млрд м.т. каждого антигена с интервалом 2-3 дня по схеме: 40-60-100-150-250-350-450 – 2-недельный перерыв – 200-300-500 млрд м.т. Результаты определения активности. Титры полученной сыворотки составили:
Пример 2. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. В сравнении с примером 1 увеличено количество инъекций и дозы антигенов при гипериммунизации. Проводят 11 инъекций в общем количестве 3000 млрд м.т. каждого антигена по схеме: 40-60-100-150-250-350-450 – 2-х недельный перерыв – 200-300-500-600 млрд м.т. Результаты определения активности. Титры получаемой сыворотки составили:
Увеличение числа инъекций больше 10 и общего количества антигенов больше 2400 млрд м.т. не привело к дальнейшему повышению титра антител сыворотки. Увеличение количества антигенов и числа инъекций нецелесообразно, так как оказывает дополнительную нагрузку на иммунную систему продуцентов и не выгодно с экономической точки зрения. Пример 3. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. Уменьшили количество инъекций при гипериммунизации до 7 при уменьшении общего количества вводимых микробных тел до 1800 миллиардов: 40-60-100-200-300-500-600 млрд м.т. Титры полученной сыворотки составили:
Уменьшение числа инъекций до 7 при уменьшении общего количества антигенов до 1800 млрд м.т.не привело к снижению титра антител в сыворотке. Пример 4. Грундирование проводили так, как это описано в примере 1. Уменьшили количество инъекций при гипериммунизации до 6 при уменьшении общего количества вводимых микробных тел до 1300 каждого антигена по схеме: 40-60-150-250-350-450 млрд м.т. Титры полученной сыворотки составили:
Уменьшение числа инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т. каждого антигена привело к снижению титров антител в полученной сыворотке.
Предложенный способ апробирован с положительными результатами в лабораторных и производственных условиях. Предложенный способ в отличие от известного обладает следующими преимуществами: 1/ увеличивается выход сыворотки в 3,2-3,5 раза (табл.3).
2/ более прост в исполнении и менее трудоемок. Срок эксплуатации свиней 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Напротив, срок эксплуатации волов – не менее 5 лет. Отсюда вытекает, что грунд- и гипериммунизация свиней проводится раз в 5-6 месяцев, в то время, как волов – раз в 5 лет. 3/ более экономически целесообразен, что вытекает из пунктов 1 и 2. Кроме того, данная сыворотка может использоваться для лечения и профилактики гемофилеза и пастереллеза в хозяйствах, в которых отсутствует стрептококковая инфекция. Источник информации RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 – прототип.
Формула изобретения
Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза и пастереллеза свиней, включающий приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida сероваров А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров 1 и П, грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцентов используют волов, при этом гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных клеток с интервалом 2-3 дня, а грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных клеток, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных клеток с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
