Патент на изобретение №2333737
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ “СУХОЙ” ФОРМЫ ВОЗРАСТНОЙ МАКУЛЯРНОЙ ДЕГЕНЕРАЦИИ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а точнее к офтальмологии, и может быть использовано для лечения «сухой» формы возрастной макулярной дегенерации. Транспупиллярно облучают макулярную область сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением. Через 3 часа проводят внутривенное введение аутологичных культивированных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга пациента. Способ обеспечивает улучшение микроциркуляции и активизирует репаративные процессы. 1 з.п. ф-лы.
(56) (продолжение): CLASS=”b560m”transplantation in the S334 transgenic rats and Sprague-Dawley rats] Yan Ke Xue Bao. 2002 Jun; 18(2): 110-4. Chinese. PMID: 15510650 [PubMed – indexed for MEDLINE].
Изобретение относится к медицине, а точнее к офтальмологии, и может быть использовано для лечения «сухой» формы возрастной макулярной дегенерации. Одним из перспективных методов лечения дистрофической патологии сетчатки может явиться применение мезенхимальных стволовых клеток (МСК),однако такие методы еще недостаточно разработаны. Хотя стволовые клетки взрослого организма обладают более ограниченным потенциалом дифференцировки, чем эмбриональные стволовые клетки, получаемые при культивировании клеток бластоцисты, их применение более безопасно. Кроме того, с точки зрения этики, они являются более приемлемым для клинического использования материалом. Задачей изобретения является повышение эффективности лечения возрастной макулярной дегенерации. Техническим результатом является улучшение или стабилизация зрительных функций. Технический результат достигается за счет того, что: 1. Транспупиллярное лазерное облучение макулярной области сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением способствует улучшению миркоциркуляции в облучаемой зоне. 2. Внутривенное (системное) введение аутологичных культивированных МСК костного мозга пациента после лазерного облучения макулярной области сопровождается их избирательной адгезией в участках повреждения, что способствует активации репаративных процессов за счет размножения и дифференцировки трансплантированных и резидентных стволовых клеток. Заявленный технический результат может быть получен только при использовании всей совокупности приемов предложенного нами способа. Способ осуществляется следующим образом. За 3 часа до внутривенного введения аутологичных культивированных МСК костного мозга пациента проводят транспупиллярное облучение макулярной области сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением, например, с длиной волны 660 нм, в дозе 0,3-1,0 Дж/см2, диаметр пятна лазерного облучения составляет 6 мм. Для получения клеток костного мозга с целью последующею культивирования МСК, содержащихся в костномозговой популяции, пациентам под местной новокаиновой анестезией проводили пункцию грудины или подвздошной кости и извлекали в строго стерильных условиях примерно 1 мл костного мозга, который помещали в пробирки с раствором гепарина (100 ЕД/мл пунктата). После отстаивания эритроцитов в течение 1-2 часов при комнатой температуре супернатант отсасывали пастеровской пипеткой, выделенные клетки отмывали в среде 199, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин, осадок ресуспендировали в ростовой среде. В качестве ростовой среды использовали среду RPMI-1640, содержащую пенициллин (100 ед/мл) амфотерицин (100 нг/мл), L-глютамин 2 мМ, 20% эмбриональную телячью сыворотку. Культивирование проводилось в стерильных пластиковых флаконах Карреля с площадью дна 25 см2, в которые вносили 5×106-107 клеток костного мозга в 8 мл ростовой среды. Флаконы продували газовой смесью, содержащей 5% углекислого газа и 95% воздуха, и помещали их в обычный термостат 37°С. Продувание флаконов такой газовой смесью проводили каждый раз, когда меняли среду или пересевали клетки в новые культуральные флаконы. При достижении сливного (конфлюентного) монослоя клетки пересевали с использованием 0.25% раствора трипсина в новые флаконы вначале с той же площадью дна (25 см2), а впоследствии при нарастании клеточной массы – в большие культуральные флаконы с площадью дна 175 см2. Такой метод позволял к концу 5-6 недели от начала культивирования клеток добиться получения популяции аутологичных МСК пациента в количестве (1-2)×108 клеток, необходимых для трансплантации в организм донора исходного костного мозга. Полученные путем культивирования аутологичные МСК после заключительного снятия трипсином с поверхности культуральных флаконов и отмывки физиологическим раствором взвешивали в 200 мл стерильного физиологического раствора с прибавлением гепарина в концентрации 10 ед/мл. Полученную клеточную суспензию использовали для постановки капельницы, продолжительность введения клеток составляла 40-60 мин. Изобретение поясняется следующими данными. Под наблюдением находилось 3 пациента (3 глаза) с «сухой» формой ВМД в возрасте от 64 до 75 лет. Острота зрения до лечения у пациентов варьировала от 0,2 до 0,5. Пациенты были пролечены по предложенному способу. Доза лазерного воздействия при транспупиллярном облучении макулярной области сетчатки составляла от 0,3 до 1,0 Дж/см2. Продолжительность введения стволовых клеток – от 40 до 60 мин. Через месяц после проведенного лечения у пациентов наблюдали следующие результаты терапии. В двух случаях острота зрения повысилась (на 0,2 и 0,32. соответственно) и в одном осталась неизменной. Во всех случаях отмечено повышение фовеальной светочувствительности сетчатки по данным компьютерной периметрии, а также увеличение амплитуды а-волны и b-волны по данным макулярной электроретинограммы, которое свидетельствовало о повышении функциональной активности сетчатки. При исследовании гемодинамики у всех пациентов отмечалось увеличение средней скорости кровотока в глазничной артерии, центральной артерии сетчатки и в задних коротких цилиарных артериях. Полученные результаты оставались стабильными в сроки от 6 до 12 месяцев. Таким образом, предложенный способ обеспечивает улучшение или стабилизацию зрительных функций.
Формула изобретения
1. Способ лечения «сухой» формы возрастной макулярной дегенерации, отличающийся тем, что транспупиллярно облучают макулярную область сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением, через 3 ч проводят внутривенное введение аутологичных культивированных мезенхимальных стволовых клеток костного мозга пациента. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что транспупиллярное облучение макулярной области сетчатки низкоинтенсивным лазерным излучением проводят с длиной волны 660 нм, в дозе 0,3-1,0 Дж/см2, диаметр пятна лазерного облучения составляет 6 мм, продолжительность введения стволовых клеток – 40-60 мин.
|
||||||||||||||||||||||||||
