Патент на изобретение №2331418
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) ИЗОНИКОТИНОИЛГИДРАЗИД ФТАЛЕВОЙ КИСЛОТЫ КАК АНТИДИАБЕТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО
(57) Реферат:
Предложено применение изоникотиноилгидразида фталевой кислоты в качестве лекарственного средства для снижения содержания свободных жирных кислот, холестерина, триглицеридов. Показано снижение концентрации бета-липопротеидов в крови как у интактных животных, так и на фоне диабета. Благодаря выявленному эффекту снижения атерогенных свойств крови изоникотиноилгидразид фталевой кислоты может найти новое применение в медицине. 12 табл., 6 ил.
Изобретение относится к биологически активным соединениям, а именно изоникотиноилгидразиду фталевой кислоты (I) формулы
обладающему противодиабетической активностью, что позволяет предположить возможность его использования в медицине в качестве лекарственного средства для лечения сахарного диабета. Ближайшим структурным аналогом заявляемого соединения является лекарственное средство изониазид: гидразид изоникотиновой кислоты формулы
используемый в качестве противотуберкулезного препарата [Машковский М.Д. Лекарственные средства (пособие для врачей), Харьков: Торсинг, Т.2, С.332, (1997)]. Данных о его антидиабетической активности в литературе не имеется. Ранее у заявляемого соединения нами была обнаружена выраженная гипогликемическая активность [Патент России №2228753 (2004). Долженко А.В., Колотова Н.В., Козьминых В.О. и др. Изоникотиноилгидразид фталевой кислоты, проявляющий гипогликемическую активность. Опубл. 20 мая 2004, Бюл. №14]. Известны и применяются при терапии сахарного диабета лекарственные препараты: метформин, гликлазид и глибенкламид [Энциклопедия лекарств (ред. Вышковский Г.Л.) М., “РЛС-2004”, 2004, С.234, 248 и 549), которые были взяты нами в качестве эталонов сравнения по действию. Целью предлагаемого изобретения является поиск в ряду ацилгидразидов фталевой кислоты соединения, обладающего комбинированным типом противодиабетического действия. Поставленная цель достигается получением изоникотиноилгидразида фталевой кислоты (ИНГФК) [El Sadek M.M., El Essawi M.M., and Abdel Baky S.A., J.Chem. Eng. Data, vol.34, №2, p.257-259 (1989)] ацилированием гидразида изоникотиновой кислоты ангидридом фталевой кислоты.
Методика получения изоникотиноилгидразида фталевой кислоты. Раствор 1,48 г (0,01 моль) ангидрида фталевой кислоты в 50 мл этилацетата и раствор 1,37 г (0,01 моль) гидразида изоникотиновой кислоты в 20 мл воды сливают, интенсивно перемешивая, при температуре 20°С. Через 3 ч выпавший осадок отфильтровывают и кристаллизуют из этанола, выход 2,50 г (88%). Тпл.=220-222°С (р). Заявляемое соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в воде, этаноле, ДМСО, ДМФА. В спектре ЯМР 1H (“РЯ-2310” (60 МГц) в ДМСО-d6, внутренний стандарт – ГМДС) соединения I имеются: мультиплет восьми протонов ароматических систем пиридинового кольца фрагмента изоникотиновой кислоты и бензольного кольца фрагмента фталевой кислоты в области 7,05-8,98 м.д., два синглета двух протонов гидразидной группы CONH-NHCO при 10,45 и 10,98 м.д., уширенный сигнал протона карбоксильной группы при 12,81 м.д. Концентрацию глюкозы в крови животных во всех экспериментах определяли с помощью глюкозооксидазного метода в дискретные интервалы времени [Цюхно З.И., Славнов В.Н., Панченко Н.И. и др., Функциональные методы исследования в эндокринологии, Киев: Здоровье, С.61-64 (1981)]. В модельных опытах в сыворотке крови крыс определяли также содержание свободных жирных кислот, общего холестерина и Исследования во всех группах проводились на шести животных. Статистическую обработку результатов проводили на персональном компьютере Pentium 4 с вычислением среднего арифметического значения (М), ошибки средней арифметической (М), значений t и Р. Изучение способности соединения I усиливать гипогликемический эффект экзогенного инсулина проводилось в двух сериях опытов. В первой из них эксперименты выполнены на интактных крысах массой 180-240 г при в/б инъекции им инсулина “актрапид” по 1,0 ЕД/кг спустя 1,5 месяца ежедневного перорального введения заявляемого соединения и эталонов сравнения. В обеих сериях исследований у животных помимо динамической характеристики уровня глюкозы в крови вычисляли гипогликемический коэффициент Рафальского по формуле: С/А, где А – исходное содержание сахара; С – минимальный уровень гликемии после введения препаратов. Показано, что инъекция инсулина по 1 ЕД/кг обеспечивает уменьшение содержания глюкозы в крови животных через час после введения на 60,2% (табл.1). Введение заявляемого соединения по 50 мг/кг за час до инъекции инсулина из расчета 1 ЕД/кг потенцирует гипогликемический эффект инсулина практически однотипно с действием гликлазида и глибенкламида, уступая таковому метформина (фиг.1). Вторая серия опытов по изучению влияния заявляемого соединения на гипогликемическую активность инсулина проводилась на животных с дексаметазоновой моделью инсулинорезистентности [Селятицкая В.Г., Кузьминова О.И., Одинцов С.В. Динамика формирования инсулинорезистентности у экспериментальных животных при длительном введении глюкокортикоидных гормонов. Бюлл. экспер. биол. мед., 2002, Т.133, №4, С.394-396]. Исследования проведены на белых нелинейных крысах самцах массой 200-230 г, которым одновременно с введением соединения I и эталонов сравнения в указанных дозах (табл.2) в течение 15 суток ежедневно в/б инъецировали дексаметазона фосфат (KRKA) из расчета 100 мкг/кг. 15-суточное введение дексаметазона крысам контрольной серии повышает уровень тощаковой гликемии (табл.2). На этом фоне сахароснижающий эффект инсулина через 30 мин после введения в дозе 1 ЕД/кг ослабевает на 28,4%, через 1 час – на 46,5%, спустя 2 часа – на 44,4%, по истечении 3 часов – на 18,8%. 15-суточное введение заявляемого соединения восстанавливает чувствительность к экзогенному инсулину в той же степени, что и препараты сравнения (фиг.2). Опыты по изучению антиадренергической активности соединения I проведены на белых нелинейных крысах самцах массой 220-240 г. Заявляемое соединение и препараты сравнения вводили ежедневно через рот в виде суспензии на 1% крахмальной слизи в течение 1,5 месяцев из расчета 50 мг/кг, а глибенкламид – по 5 мг/кг. В контрольной серии эксперимента в эквиобъемном количестве использовали одну крахмальную слизь. В конце исследования у животных изучали выраженность гипергликемизирующего действия адреналина. Раствор адреналина гидрохлорида вводили в/м в дозе 0,5 мг/кг. Помимо динамики гликемии у крыс рассчитывали гипергликемический коэффициент Бодуэна по формуле:
где А – уровень глюкозы в крови натощак, В – ее максимальная концентрация после нагрузки. Результаты исследований приведены в таблице 3. Аналогичным способом исследовали влияние вещества I на адреналиновый липолиз, определяя в сыворотке крови животных содержание свободных жирных кислот (табл.4). Из таблицы 3 и фиг.3 видно, что заявляемое соединение на протяжении всего эксперимента сдерживает прирост уровня глюкозы в крови животных, метформин эффективен лишь через 3 часа после введения адреналина, а гликлазид и глибенкламид – в течение первого часа наблюдения. Данные таблицы 4 и фиг.4 показывают, что ИНГФК и глибенкламид ограничивают липолитическое действие адреномиметика в течение всего времени эксперимента, эффект гликлазида сохраняется лишь в течение первого часа, а метформин, напротив, липолиз усиливает. Опыты по изучению влияния заявляемого соединения на синтез гликогена в печени проводили на интактных крысах при введении вещества I через рот по 50 мг/кг в течение 1,5 месяцев. По окончании эксперимента животных забивали декапитацией и определяли содержание гликогена в их печени (табл.5). Показано, что ИНГФК увеличивает содержание полисахарида по сравнению с контрольной серией на 24,4%, что сопоставимо с эффектом гликлазида и глибенкламида и превосходит действие метформина. Исследования по влиянию соединения I на толерантность к углеводной нагрузке проводились на интактных крысах, имевших свободный доступ к богатой углеводами пище каждые 2 часа эксперимента (табл.6), при проведении у них (табл.7) и у крыс со стероидным диабетом (табл.8) из расчета 2 г/кг орального глюкозотолерантного теста (ОПТ), а также при нагрузке интактных крыс сахарозой в дозе 2 г/кг (табл.9). На фоне предварительного введения заявляемого вещества и метформина развитие пищевой гипергликемии нивелируется на протяжении всего периода наблюдения, эффект гликлазида и глибенкламида отмечается лишь между 6-8 час опыта (табл.6). Данные таблицы 7 свидетельствуют о том, что соединение I и метформин снижают прирост гликемии в течение первого часа эксперимента, гликлазид и глибенкламид действуют на протяжении всего опыта. На фоне стероидного диабета ИНГФК и метформин превосходят в этом отношении гликлазид и глибенкламид (табл.8). Соединение I увеличивает толерантность к сахарозной нагрузке, превосходя в этом отношении метформин (табл.9). Таким образом, результаты исследований свидетельствуют, что 1,5-месячное введение заявляемого соединения в дозе 50 мг/кг значительно повышает устойчивость к различным видам углеводной нагрузки. Опыты по изучению влияния ИНГФК на липидный обмен проводились как на интактных крысах, так и на фоне стероидного диабета животных. При ежедневном однократном введении через рот в течение 1,5 месяцев все сравниваемые вещества по сравнению с исходным состоянием уменьшают концентрацию На фоне стероидного диабета введение крысам на протяжении 15 суток заявляемого соединения и препаратов сравнения обеспечивает снижение уровня холестеринемии в 1,2-2,1 раза, триглицеридемии – в 1,4-1,8 раза (табл.12). Таким образом, изоникотиноилгидразид фталевой кислоты (I) при наличии высокой гипогликемической активности и низкой токсичности [2] обладает комбинированным типом противодиабетического действия. Он повышает толерантность к пищевой нагрузке, увеличивает синтез гликогена, потенцирует действие инсулина, уменьшает метаболические эффекты адреналина, снижает атерогенные свойства крови. Следовательно, заявляемое соединение I может найти применение в медицине в качестве антидиабетического лекарственного средства.
Литература 1. Машковский М.Д. Лекарственные средства (пособие для врачей). Харьков: Торсинг, Т.2., С.332, (1997). 3. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике. – М.: Медицина, 1969. – 651 с. 4. Прохорова М.И., Туликова З.Н. Большой практикум по углеводному и липидному обмену. – Л.: Изд. ленингр. гос. ун-та им. А.А.Жданова, 1965. – С.56-58, С.71-73, С.81-84. 5. Энциклопедия лекарств (ред. Вышковский Г.Л.) М., “РЛС-2004”, 2004, С.549, 248). 6. Селятицкая В.Г., Кузьминова О.И., Одинцов С.В. Динамика формирования инсулинорезистентности у экспериментальных животных при длительном введении глюкокортикоидных гормонов. Бюлл. экспер. биол. мед., 2002, Т.133, №4, С.394-396. 7. Цюхно З.И., Славнов В.Н., Панченко Н.И. и др. Функциональные методы исследования в эндокринологии. – Киев.: Здоровье, 1981, – 238 с. 8. El Sadek M.M., El Essawi M.M., and Abdel Baky S.A., J.Chem. Eng. Data, vol.34, №2, p.257-259 (1989)
Формула изобретения
Применение изоникотиноилгидразида фталевой кислоты в качестве средства для снижения содержания свободных жирных кислот, холестерина, триглицеридов.
РИСУНКИ
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
-липопротеидов [Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике. – М.: Медицина, 1969. – 651 с.]. В печени животных антроновым методом характеризовали уровень гликогена [Прохорова М.И., Туликова З.Н. Большой практикум по углеводному и липидному обмену. – Л.: Изд. ленингр. гос. ун-та им. А.А.Жданова, 1965. – 250 с.].
0,05 – *, Р
