Патент на изобретение №2330601

(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПУЗЫРНО-МОЧЕТОЧНИКОВОГО РЕФЛЮКСА У ДЕТЕЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, детской урологии. Способ лечения пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей включает эндоскопическое введение под слизистую оболочку под устьем мочеточника 2.0 мл 7% коллагена. Затем в образовавшийся болюс вводят ауто- или аллофибробласты человека в количестве не менее 4,0 млн клеток, содержащихся в 1,5-2,0 мл физиологического раствора. Способ обеспечивает максимальную сохранность фибробластов, создает антирефлюксный валик, анатомически максимально подходящий для данного больного, позволяет ликвидировать рефлюкс сразу после проведения коррекции и оптимизирует отдаленные результаты за счет пролонгации действия коллагена, обеспечивает улучшенный контроль за антирефлюксным механизмом мочеточника за счет упрощения визуализации антирефлюксного валика.

(56) (продолжение):

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и может быть использовано в детской урологии для лечения пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей.

Пузырно-мочеточниковый рефлюкс (ПМР), впервые описанный Земблиновым В.И. в 1883 году, является одной из распространенных аномалий развития мочевыводящих путей у детей. Он встречается у 60-75% больных с расстройствами мочеиспускания и рецидивирующей мочевой инфекцией (Джавад-заде М.Д. Сравнительная характеристика антирефлюксных операций, причины рецидивирования пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей. Урология и нефрология, 1998, №6, с.17). ПМР сопровождается лейкоцитурией у 97% девочек и 83% мальчиков. С другой стороны, у 30-50% детей с инфекцией мочевыводящих путей определяется ПМР (Лопаткин Н.А. Пузырно-мочеточниковый рефлюкс. М.: Медицина, 1990, с.187). По данным разных авторов ПМР у детей, больных пиелонефритом, диагностируют от 35% (Соловьев А.Е. Применение эндоскопического метода в лечении пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей с использованием полиакриламидного геля «Интерфалл». Этюды детской урологии. Запорожье, 2001, с.68), до 60-80% случаев (Терещенко А.В. Мочеточниковый рефлюкс. Киев: Здоров’я, 1986).

Возникнув в раннем возрасте, рефлюкс способствует формированию уретерогидронефроза, присоединению вторичного пиелонефрита, а рефлюкс-нефропатия, сохраняющаяся и после излечения ПМР, включает в себя повреждение всех структурных компонентов нефрона и является основной причиной артериальной гипертензии и терминальной почечной недостаточности в детском возрасте. В связи с этим своевременное лечение ПМР является одной из актуальных проблем.

Основным способом лечения ПМР является оперативный, преимущество которого заключается в быстром достижении прекращения регургитации мочи. Однако для детского организма уретероцистонеостомия является сложным, травматичным вмешательством, которое предполагает также длительные сроки госпитализации; по данным литературы, частота рецидивирования рефлюкса колеблется от 3 до 40%. Возможны осложнения: стеноз мочеточника в отдаленные сроки после операции достигает 5,1%; возникновение рефлюкса в контрлатеральное устье – от 8 до 15-20%; обострение хронического пиелонефрита – до 6% (Лопаткин Н.А. Пузырно-мочеточниковый рефлюкс. М.: Медицина, 1990. – с.187).

За прототип предлагаемого изобретения выбран известный способ лечения пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей путем эндоскопического введения культуры ауто- или аллофибробластов под устье мочеточника (РФ, патент №2002129065, публ. 2004.04.27).

Известный способ осуществляют следующим образом.

Клеточные культуры получают традиционным способом. Для трансплантации используют культуры 4-10 пассажей, стерильные, неконтаминированные микоплазмами и вирусами. Стерильность контролируется ежедневно микроскопически, контаминация контролируется с помощью полимеразной цепной реакции в лаборатории перед трансплантацией культуры. В день операции клетки снимают с поверхности культурального сосуда с помощью трипсинизации, дважды отмывают стерильным раствором хлористого натрия, концентрацию клеток доводят в объеме до 3,5-7 млн/мл, помещают в стерильную пробирку и в стерильном биксе доставляют в операционную. Эндоскопию проводят под внутривенным наркозом. С помощью специальной инъекционной иглы, проведенной через рабочий канал цитоскопа, ауто- и аллофибробласты человека в количестве 3,5-7 млн клеток, содержащихся в 1,5-2,0 мл физиологического раствора, вводят под слизистую оболочку мочеточника, отступя 4-5 мл ниже его отверстия, в бессосудистой зоне, на 5-6-7 эндоскопических часах, до полного смыкания устья на вершине образовавшегося подслизистого бугорка. Дренирование мочевого пузыря уретральным катетером Фолея в течение 24 часов. УЗИ почек и мочевого пузыря проводят на 1-2-е сутки после манипуляции. Выписка больных на 2-3 и сутки. Контрольная цистография через 3 месяца.

Применение в известном способе ауто- или аллофибробластов при лечении пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей обеспечивает длительную защиту пузырно-мочеточникового соустья. Использование человеческих клеток, тем более собственных, позволяет значительно снизить число иммунных реакций. Немаловажную роль играет и экономический эффект – получение фибробластов намного дешевле, чем использование других материалов.

Однако несмотря на хорошие отдаленные результаты лечения применение в качестве фиксирующего вещества культуры аллофибробластов имеет некоторые недостатки: невозможно визуализировать болюс («валик») в ближайшие сроки после введения препарата, что может косвенно говорить о сохранности ПМР до выработки фибробластами коллагена в количестве, достаточном для достижения антирефлюксного эффекта. Физические свойства препарата (взвесь клеток в физиологическом растворе) повышают риск элиминации его из места введения с током мочи и межтканевой жидкостью.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение эффективности лечения путем обеспечения пролонгированного действия фиксирующего вещества и обеспечения условий для создания более надежного антирефлюксного механизма в области устья мочеточника.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе лечения пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей путем эндоскопического введения культуры ауто- или аллофибробластов под устье мочеточника культуру ауто- или аллофибробластов вводят в количестве не менее 4.0 млн клеток в биологических веществах, обеспечивающих адгезию фибробластов, например коллагена, при этом вводят сначала 2.0 мл 7% коллагена, затем через ту же иглу культуру ауто- или аллофибробластов в объеме 2,0 мл физиологического раствора.

Предлагаемое изобретение отвечает критерию «новизна», так как проведенные патентно-информационные исследования не выявили источников, порочащих новизну предлагаемого способа.

Предлагаемое изобретение отвечает критерию «изобретательский уровень», так как проведенный поиск не выявил технических решений с существующими признаками предлагаемого способа.

Предлагаемый способ позволяет получить при использовании следующий положительный эффект.

Эндоскопическое субуретеральное введение культуры ауто- или аллофибробластов человека в коллагеновый болюс, то есть практически одновременное введение культуры фибробластов и коллагена является не простым механическим смешиванием данных фиксирующих веществ. Во-первых, обеспечивается максимальная сохранность клеток за счет того, что к коллагену у фибробластов имеется тропизм, вследствие чего до 90% клеток адгезируются на нем и не вымываются из места инъекции мочой и межтканевой жидкостью, что улучшает их приживление. Во-вторых, создание коллагенового валика обеспечивает моментальный антирефлюксный эффект, а ко времени его естественной элиминации фибробласты успевают выработать ауто-коллаген в необходимом для фиксации мочеточника количестве. В третьих, упрощается контроль за антирефлюксным механизмом устья мочеточника за счет улучшения визуализации валика при проведении УЗИ.

Таким образом, применение ауто- или аллофибробластов одновременно с коллагеном при лечении пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей обеспечивает более надежную и длительную защиту пузырно-мочеточникового соустья, улучшаются как непосредственные, так и отдаленные результаты лечения, отпадает необходимость в повторных инъекциях фиксирующих веществ, что упрощает и удешевляет лечение данной категории больных, снижает риск иммунных и других побочных реакций и осложнений.

Следовательно, рефлюкс ликвидируется сразу же после проведения коррекции, улучшаются отдаленные результаты и снижается риск возникновения рецидива за счет пролонгированного действия фиксирующего вещества, упрощается контрольное обследование пациентов за счет улучшения визуализации антирефлюксного валика. Обладая минимальной инвазивностью, предлагаемый способ является простой и эффективной процедурой коррекции ПМР, как впервые выявленного, так и при рецидиве рефлюкса после неудачного оперативного лечения.

Таким образом, высокая эффективность предлагаемого метода делает целесообразным его внедрение в широкую клиническую практику.

Способ осуществляют следующим образом.

Ауто- и аллофибробласты человека получают в лаборатории консервации тканей научно-лабораторного отдела Нижегородского НИИ травматологии и ортопедии МЗ РФ. Источником фибробластов служит кожа, полученная после операции «circumcisio» у соматически здоровых пациентов. При культивировании использовали среду Игла с добавлением антибиотиков, 2% глутамина, 5% телячьей эмбриональной сыворотки. Культивирование проводили при 37°С в атмосфере 5% СО₂, на последнем этапе – на коллагенсодержащей пленке. Для трансплантации использовали 10-17 культуры пассажей хорошего качества, сформировавшие конфлюэнтный монослой, клетки четко очерченные с плотными ядрами, выраженными отростками, стерильные, неконтаминированные микоплазмами и вирусами. В день операции клетки снимают с поверхности. Стерильность контролировалась ежедневно микроскопически, контаминация контроливалась с помощью полимеразной цепной реакции в лаборатории Нижегородского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии перед трансплантацией культуры через 1-3 дня после пассажа. За 1-2 часа до трансплантации культуры дважды отмывали от культуральной среды стерильным теплым физиологическим раствором, после чего суспензию клеток передавали в операционную в стерильной пробирке. Концентрация клеток составляла 4 млн в мл. Рост клеток контролировался с помощью инвертированного микроскопа Leica type 090-135.001 фирмы Leica Microsystems Wetzlar GmbH с видеокамерой и компьютерной программой слежения за ростом культуры.

Для выполнения операции используют цистоскопы фирмы «Karl Storz» соответствующих возрастных диаметров. Эндоскопию проводят под внутривенным наркозом калипсолом. С помощью специальной инъекционной иглы, проведенной через рабочий канал цистоскопа, коллаген производства фирмы «МИТ» в количестве 2.0 мл вводят под слизистую оболочку мочеточника, отступя 4-5 миллиметров ниже его отверстия, в бессосудистой зоне, на 5-6-7 эндоскопических часах, до полного смыкания устья на вершине образовавшегося подслизистого бугорка. Затем в образовавшийся болюс вводят ауто- или аллофибробласты человека в количестве 4.0 млн клеток, содержащихся в 1,5-2,0 мл физиологического раствора. Дренирование мочевого пузыря уретральным катетером Фолея в течение 24 часов. УЗИ почек и мочевого пузыря проводят на 1-2-е сутки после манипуляции. Выписывают больных на 2-3-и сутки. УЗИ почек и мочевого пузыря проводят через 1 и 3 месяца после операции. Контрольную цистографию выполняют через 3 месяца.

Примеры конкретного выполнения даны в виде выписок из истории:

1. Люба П., 9 лет, история болезни №4579, поступила в хирургическое отделение ГУ НОДКБ 03.04.06. Наблюдается урологом с сентября 2004 года по поводу пузырно-мочеточникового рефлюкса 2 степени с обеих сторон. 02.09.04 выполнена операция Коэна справа, введение коллагена под устье правого мочеточника интраоперационно. При обследовании в марте 2005 года на цистограммах ПМР не было с 2 сторон, однако при обследовании апреле 2006 отмечается рецидив ПМР 2 степени справа. После проведения клинико-лабораторного обследования, УЗИ почек, цистографии 14.04.06 выполнена эндоскопическая фиксация устья правого мочеточника по описанной выше методике путем введения 4 млн клеток аллофибробластов и коллагена фирмы «МИТ» в объеме 2 мл. При проведении УЗИ мочевого пузыря на 2 сутки после операции под правым устьем определяется антирефлюксный валик. Осложнений не наблюдалось, выписана домой в удовлетворительном состоянии 17.04.06. Контрольное УЗИ выполнено через 1 месяц, признаков ПМР нет, валик под правым устьем четко определяется. При УЗИ почек и мочевого пузыря через 3 месяца после операции признаков ПМР нет.

2. Валерия Е., 12 лет, история болезни №4532, поступила в хирургическое отделение ГУ НОДКБ 03.04.06. Наблюдается урологом с 1999 года, в апреле 1999 года выполнена операция Коэна слева по поводу обструктивного уретерогидронефроза. После операции не обследовалась. Проведено клинико-лабораторное обследование, УЗИ почек и мочевого пузыря, внутривенная урография, цистография. Выявлен пузырно-мочеточниковый рефлюкс 3 степени слева. 07.04.06 выполнена эндоскопическая фиксация устья левого мочеточника по описанной выше методике с использованием культуры аллофибробластов 4 млн клеток и 2.0 мл коллагена. При проведении УЗИ мочевого пузыря на 2 сутки после операции под левым устьем четко определяется антирефлюксный валик. Выписана на 3 сутки после эндоскопической коррекции, осложнений не наблюдалось. Контрольное УЗИ выполнено через 1 месяц: признаков ПМР нет, под левым устьем сохраняется антирефлюксный валик. При УЗИ почек и мочевого пузыря через 3 месяца после операции признаков ПМР нет.

Формула изобретения

Способ лечения пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей путем эндоскопического введения культуры фибробластов под слизистую оболочку под устьем мочеточника, отличающийся тем, что вводят культуру ауто- или аллофибробластов в количестве не менее 4 млн. клеток в сочетании с коллагеном, при этом вводят сначала 2,0 мл 7%-ного коллагена, затем в образовавшийся болюс вводят ауто- или аллофибробласты человека в количестве не менее 4,0 млн. клеток, содержащихся в 1,5-2,0 мл физиологического раствора.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 13.07.2008

Извещение опубликовано: 10.07.2010 БИ: 19/2010