Патент на изобретение №2161041

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОСУДОРОЖНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине. Для экстракции используют надземную часть чертополоха курчавого (Carduus crispus subsp, crispus L.), собранного в фазу цветения. Экстракцию проводят 40%-ным этанолом при температуре 60 – 80^oC и соотношении сырье – этанол 1 : 10 – 1 : 12 в течение 2 – 3 ч. Изобретение позволяет повысить противосудорожную активность средства и расширить их арсенал. 5 табл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения лекарственного средства, обладающего противосудорожной активностью, из растительного сырья.

Известен способ получения препарата из травы водяники черной, обладающего противосудорожным действием (патент РФ N 1312777, БИ 19, 1987) [1]. Сущность способа заключается в экстракции растительного сырья 70%-ным этанолом при температуре 75-85^oC в течение 120-180 минут при соотношении сырье – этанол 1: 10 с последующим упариванием извлечения досуха. Однако средство, полученное по описанному способу, обладает невысокой противосудорожной активностью: ЭД₅₀ по тесту максимального электрошока (МЭШ) составляет 776 мг/кг.

Новый технический результат – повышение противосудорожной активности и расширение арсенала средств, получаемых из растительного сырья – достигают использованием нового способа получения средства, обладающего противосудорожной активностью, путем экстракции в течение 2 – 3 часов растительного сырья водным этанолом и последующим упариванием полученного экстракта, причем в качестве растительного сырья используют надземную часть чертополоха курчавого (Cardnus crispus subsp. crispus L.), собранного в фазу цветения, а экстракцию проводят 40%-ным этанолом при температуре 60 – 80^oC и соотношении сырье – этанол 1:10 – 1:12.

Новым в предлагаемом способе является то, что в качестве растительного сырья используют надземную часть чертополоха курчавого (Carduus crispus subsp. crispus L.), собранного в фазу цветения, а экстракцию проводят 40%-ным этанолом при температуре 60-80^oC и соотношении сырье – этанол 1:10-1:12.

Отличительные признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства: повышение противосудорожной активности по сравнению с прототипом в 7 раз за счет использования нового растительного источника (чертополоха курчавого), собранного в фазу цветения, и более полного извлечения биологически активных веществ за счет применения 40%-ного раствора этанола.

С учетом изложенного, следует считать заявляемое решение соответствующим критерию “существенные отличия “.

Данный способ можно с успехом использовать в фармацевтической промышленности, поэтому изобретение соответствует критерию “промышленная применимость”.

Чертополох курчавый – Carduus crispus subsp crispus L. семейства Астровых – Asteraceae
Это двухлетнее травянистое растение до 2 м высотой. Стебель прямой, вверху немного ветвистый; нижние листья с короткими черешками, стеблевые – 4-15 см длиной и 1,5-5 см шириной, сидячие, нисбегающие, почти ланцетовидные, выемчато-зубчатые или лопастные. Корзинки мелкие, диаметром с цветками 1,5-3 см, прямостоячие скученные на концах ветвей.

Растет у дорог и жилья, по залежам, полям, лугам, опушкам, берегам рек, галечникам как сорное растение. Широко распространен в Западной Европе, Европейской части России, на Кавказе, в Западной и Восточной Сибири и на Дальнем Востоке [2, 3].

В надземной части чертополоха курчавого содержатся флавоноиды (лютеолин, апигенин, кемпферол и их гликозиды), кумарины, иридоиды, сесквитерпеновые лактоны, непредельные соединения [4-9].

Способ осуществляют следующим образом.

Измельченные воздушно-сухие надземные части чертополоха курчавого (Carduus crispus subsp. crispus L.), собранные в фазу цветения, состоящие из цветков, листьев и стеблей, заливают 40%-ным этанолом и экстрагируют при температуре 60 – 80^oC в течение 2 – 3 часов при соотношении сырье-экстрагент 1: 10 – 1:12. Полученное извлечение отделяют от сырья процеживанием через 4 слоя марли и упаривают под вакуумом досуха. Высушенный экстракт представляет собой сухой порошок коричневого цвета без запаха. Выход продукта составляет 16,1- 20,6 % от массы исходного сырья, время процесса 4 – 5 часов, противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 64-166 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,27-1,59.

Пример 1. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 3,21 г или 16,05% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 100 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,39.

Пример 2. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 60^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 3,16 г или 15,81% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 64 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,27.

Пример 3. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 2 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 3,10 г или 15,48% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 166 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,52.

Пример 4. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собраных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 2,5 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 3,14 г или 15,72% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 144 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,41.

Пример 5. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 160 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 2,71 г или 13,54% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 415 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,31.

Пример 6. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 240 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 4,12 г или 20,62% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 146 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,59.

Пример 7. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 70%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 3,14г или 15,70% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 226 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,39.

Пример 8. 20 г воздушно – сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 25%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 2,70 г или 13,48% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 164 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,19.

Пример 9. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу бутонизации, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 3,34 г или 16,70% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 421 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,19.

Пример 10. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл воды очищенной и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 2,45 г или 12,24% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 164 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,19.

Пример 11. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40%- ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 40^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 2,68 г или 13,40% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 64 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,27.

Пример 12. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40 %-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 20^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 2,03 г или 10,14% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 189 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,2.

Пример 13. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40%- ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 90^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 3,24 г или 16,19% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 269 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,18.

Пример 14. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 1 часа. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 2,61 г или 13,07% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 166 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,52.

Пример 15. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 200 мл 40 %-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 4 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 3,23 г или 16,13% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 126 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,39.

Пример 16. 20 г воздушно-сухих измельченных частей чертополоха курчавого, собранных в фазу цветения, состоящих из цветков, листьев и стеблей растения, заливают 280 мл 40%-ного этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником при 80^oC в течение 3 часов. Полученное извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через четыре слоя марли и упаривают под вакуумом досуха.

Выход экстракта составляет 4,24 г или 21,18% от массы исходного сырья, его противосудорожная активность по тесту МЭШ составляет 146 мг/кг, антикоразоловый индекс – 1,59.

Было проведено исследование влияния экстрактов чертополоха курчавого, полученных при различных режимах экстракции на белых беспородных мышах массой 18-20 г по скрининговым тестам: максимальный электрошок и коразоловое “титрование” [10-14].

Экстракт чертополоха курчавого, полученный предлагаемым способом, как видно из табл. 1, обладает выраженной противосудорожной активностью по тесту МЭШ (ЭД₅₀ 100 мг/кг), он значительно повышает судорожный порог коразола (АКИ 1,39); по тесту МЭШ превосходит прототип (препарат из травы водяники) в 7,8 раза.

Обоснование режимов
В процессе поиска оптимальных условий получения экстракта из надземных частей чертополоха курчавого было изучено влияние ряда факторов (концентрации этанола, температурного режима, времени экстракции, соотношения сырье – экстрагент) на выход целевого продукта (табл. 1-5). При этом установлено, что экстракцию сырья следует вести при температуре 60-80^oC: понижение температуры ведет к уменьшению выхода целевого продукта за счет уменьшения его растворимости, а дальнейшее повышение температуры нецелесообразно, так как выход экстракта при этом практически не увеличивается (табл. 3).

Оптимальной концентрацией этанола является 40%-ный раствор; изменение ее в сторону уменьшения или увеличения приводит к снижению фармакологической активности извлекаемого экстракта (табл. 2).

Оптимальное время экстракции 2 – 3 часа: в случае уменьшения продолжительности процесса снижается выход целевого продукта; увеличение времени экстракции нерационально, так как при этом выход экстракта возрастает незначительно (табл. 4).

Наилучшее соотношение сырья и экстрагента 1:10-1:12 (табл. 5). При уменьшении количества экстрагента, например 1:8, происходит снижение выхода целевого продукта. Сдвиг в сторону увеличения соотношения нецелесообразен, так как при этом выход экстрактивных веществ возрастает незначительно.

Оптимальной фазой сбора надземной части чертополоха курчавого, состоящей из цветков, листьев и стеблей, является фаза цветения. Что касается фазы бутонизации, то противосудорожное действие полученных экстрактов в оптимальных условиях экстрагирования резко снижается (табл. 1).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить противосудорожную активность в 7,8 раза за счет использования нового растительного источника – надземной части чертополоха курчавого Carduus crispus subsp. crispus L., собранной в фазу цветения, и более полного извлечения биологически активных веществ за счет экстракции 40%-ным этанолом при температуре 60 – 80^oC и соотношении сырья и экстрагента 1:10 – 1:12. Способ отличается значительной экономичностью, так как чертополох курчавый имеет широкое распространение на всей территории Российской Федерации в отличие от прототипа – побегов водяники, произрастающих в высокогорных районах Сибири; кроме того, сбор чертополоха может осуществляться ежегодно, в то время как периодичность заготовки водяники составляет 10-15 лет.

Источники информации, принятые во внимание
1. Патент РФ N 1312777 “Способ получения средства, обладающего противосудорожной активностью”. БИ, 1987. – N 19 (прототип).

2. Флора Сибири / Под ред. И.М. Красноборова /. – Новосибирск: Наука, 1997-Т. 13.-С. 210- 212. (Род Carduus – Asteraceae).

3. Флора СССР. – М.: Издательство АН СССР, 1963.- 653 с.

5. Гейдеман Т.О., Иванова Б.И., Ляликов С.И. и др. Полезные дикорастущие растения Молдавии. – Кишинев: Наука, 1962. – 416 с.

6. Дикорастущие полезные растения Коми АССР. – Сыктывкар: Наука, 1966. -192 с.

7. Кучеров Б. В., Байков Г.К., Гуфранова И.Б. Полезные растения Южного Урала – М.: Медицина, 1976. – 264 с.

10. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта – Л.: Наука, 1963. -149 с.

Формула изобретения

Способ получения средства, обладающего противосудорожной активностью, путем экстракции в течение 2 – 3 ч растительного сырья водным этанолом и последующим упариванием этанольного экстракта, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют надземную часть чертополоха курчавого (Carduus crispus subsp, crispus L.), собранного в фазу цветения, а экстракцию проводят 40%-ным этанолом при температуре 60 – 80^oC и соотношении сырье – этанол 1 : 10 – 1 : 12.

РИСУНКИ

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 10.12.2001

Номер и год публикации бюллетеня: 11-2003

Извещение опубликовано: 20.04.2003