Патент на изобретение №2329504
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОГО ДЕТОРОЖДЕНИЯ ПОСЛЕ ИММУНОЦИТОТЕРАПИИ У ЖЕНЩИН С НЕВЫНАШИВАНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ РАННИХ СРОКОВ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования восстановления эффективного деторождения после иммуноцитотерапии у женщин с невынашиванием беременности ранних сроков. Для осуществления способа после традиционного лечения с последующей иммуноцитотерапией вне беременности в периферической венозной крови женщин с невынашиванием ранних сроков в анамнезе определяют относительное содержание CD69+ лимфоцитов. При значениях этого показателя меньше или равном 6,2% прогнозируют восстановление эффективного деторождения. Предлагаемый способ прост в исполнении и позволяет с высокой точностью, специфичностью и чувствительностью прогнозировать восстановление эффективного деторождения, выбрать правильную тактику ведения женщин с невынашиванием ранних сроков в анамнезе, что способствует снижению частоты данной патологии. 1 табл.
(56) (продолжение): CLASS=”b560m”MEDLINE]. RAMHORST R et al. Intracellular expression of CD69 in endometrial and peripheral Т cells represents a useful marker in women with recurrent miscarriage: modulation after allogeneic leukocyte immunotherapy., Am J Reprod Immunol. 2003 Mar; 49 (3): 149-58. THUM MY et al. An increase in the absolute count of CD56dimCD16+CD69+NK cells in the peripheral blood is associated with a poorer IVF treatment and pregnancy outcome. Hum Reprod. 2004 Oct; 19 (10): 2395-400. Epub 2004 Aug 19. PMID: 15319390 [PubMed – indexed for MEDLINE].
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования восстановления эффективного деторождения у женщин вне беременности с невынашиванием ранних сроков (до 12 недель) в анамнезе. Актуальность изобретения определяется высокой частотой встречаемости невынашивания беременности ранних сроков. По данным отечественных авторов частота невынашивания составляет от 13 до 17%, оставаясь одной из главных причин перинатальной патологии и смертности. Потери детей, как следствие невынашивания, составляют от 35 до 78% [1]. Большая роль в генезе невынашивания беременности отводится иммунным механизмам [2, 3]. В настоящее время несмотря на довольно значительное количество препаратов, обладающих иммуномодулирующими свойствами, выбирать приходится в основном между двумя способами иммунотерапии: активной иммунизацией аллогенными лимфоцитами и пассивной – введением иммуноглобулинов [2, 3]. Разработка способа прогнозирования восстановления эффективного деторождения после иммуноцитотерапии у женщин с невынашиванием ранних сроков в анамнезе позволит прогнозировать восстановление эффективного деторождения еще до наступления беременности. Недостатки способа: 1. используется только у беременных женщин; 2. не указывается срок беременности, в который рекомендуется проводить обследование; 3. высокая трудоемкость; 4. длительность исполнения анализа; 5. не указана точность способа.
Недостатки способа: 1. способ применим только к случаям невынашивания гормонального генеза; 2. двухкратность проведения анализов; 3. высокая инвазивность; 4. требует привлечения многочисленного персонала; 5. не указана точность способа. Данный способ был выбран нами в качестве ближайшего аналога (прототипа). Однако он имеет ряд недостатков: 1. женщинам с невынашиванием беременности проводилась только традиционная противовоспалительная и гормональная терапия и не проводилась иммунотерапия с целью коррекции иммунологических нарушений, которым отводится ведущая роль в генезе невынашивания беременности [2, 4, 5]; 2. показатель содержания CD38+ лимфоцитов также определяется в периферической крови для прогнозирования темпов роста миомы матки [6], у часто и длительно болеющих лиц [4], в острый период нейрожелезистой формы паротитной инфекции [7]. При этом во всех случаях отмечается повышение числа лимфоцитов, несущих на своей поверхности данную молекулу. 3. точность – 86,33%. Заявляемый технический результат достигается тем, что в периферической крови женщин вне беременности с невынашиванием ранних сроков в анамнезе после проведения традиционной и последующей иммуноцитотерапии определяют относительное количество CD69+ лимфоцитов и при значении этого показателя, равном или менее 6,2%, прогнозируют восстановление эффективного деторождения в 91% случаев. Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать восстановление эффективного деторождения по определению относительного содержания CD69+ лимфоцитов в периферической крови. Ранее показатель CD69+ определяли в периферической крови при первичных иммунодефицитных заболеваниях, обусловленных дефектами лимфоцитов [8], при старении организма, при лекарственной аллергии [5], при аутоиммунном тиреоидите [9], у больных хроническим гепатитом С [10]. При всей вышеуказанной патологии отмечалось высокое содержание лимфоцитов, несущих маркер ранней активации CD69+. Применение иммуноцитотерапии вне беременности у женщин с невынашиванием ранних сроков в анамнезе оказывает выраженное иммуномодулирующее действие, проявляющееся в достижении высочайшего уровня «блокирующих антител». Последние, связываясь с клетками трофобласта, защищают их от цитотоксического действия клеток матери, тем самым предотвращая отторжение плода [2, 3]. Высокое содержание активированных лимфоцитов в периферической крови, а именно CD69+, по-видимому, можно расценивать как активацию системного иммунного ответа клеточного типа на стимуляцию антигеном, в частности, инфекционным агентом [3, 5]. У женщин под воздействием иммуноцитотерапии отмечалось снижение уровня активированных CD69+ лимфоцитов. Мы предполагаем, что это связано с уменьшением антигенной нагрузки за счет элиминации инфекционных агентов под действием иммуноцитотерапии. Для прогнозирования восстановления эффективного деторождения этот показатель применяется впервые. Способ осуществляется следующим образом: 1. У женщин производят забор 1 мл периферической венозной крови. 2. Выделение лимфоцитов из 1 мл периферической венозной крови осуществляется стандартным методом – центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографин при 1500 об/мин в течение 30 минут [11]. 3. В пробирку, содержащую 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×106 кл/мл, добавляют 20 мкл моноклональных анти-СD69 антител, меченных FITC или РЕ. Клетки инкубируют с моноклональными антителами в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки в пробирках ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора [12]. 4. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя в лимфоцитарном гейте процентное (относительное) содержание CD69+ клеток. Отличительными признаками способа являются: установлен прогностический параметр относительного содержания CD69+ лимфоцитов в периферической крови после проведения традиционной и последующей иммуноцитотерапии, при количественном значении которого, равном или менее 6,2%, прогнозируют восстановление эффективного деторождения у женщин с невынашиванием беременности ранних сроков. Сущность изобретения поясняется следующими примерами: Пример 1. Пациентка В., 26 лет, была направлена в клинику с диагнозом: Привычное невынашивание беременности (в анамнезе 2 самопроизвольных выкидыша в сроке 8-9 недель, 1 погибшая беременность в сроке 10-11 недель). В ходе клинического обследования установлено: менструальный цикл – двухфазный с недостаточностью II фазы; по данным гормонального обследования выявлена гиперандрогения. При морфологическом исследовании эндометрия установлено сочетание хронического эндометрита с гормональными нарушениями в структуре эндометрия. Выявлен хламидиоз и уреаплазмоз. Заключение терапевта: Хронический бронхит, хронический гастрит, нейроциркуляторная дистония по гипотоническому типу. Поставлен клинический диагноз: Привычное невынашивание беременности. Хронический эндомиометрит. Хламидиоз. Уреаплазмоз. Гиперандрогения. Нарушение менструальной функции по типу НЛФ. После проведенного противовоспалительного лечения, коррекции менструального цикла с последующим использованием иммуноцитотерапии при обследовании заявляемым способом содержание CD69+ лимфоцитов в периферической крови составило 4,4%, что позволяет прогнозировать восстановление эффективного деторождения. Действительно, у женщины наступила беременность, которая закончилась своевременными родами и рождением здорового ребенка. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился. Пример 2. Пациентка Б., 24 лет, поступила на обследование по поводу первичного невынашивания беременности (в анамнезе погибшая беременность в сроке 9-10 недель). В ходе клинического обследования установлено: менструальный цикл – двухфазный, уровень гормонов в периферической крови, моче – в пределах нормальных значений. При морфологическом исследовании эндометрия установлено наличие воспалительных изменений в структуре эндометрия. Выявлена герпетическая инфекция. Поставлен клинический диагноз: Первичное невынашивание беременности. Хронический эндометрит. Герпетическая инфекция. Гирсутный синдром. В стационаре проведено специфическое противовоспалительное лечение, иммуноцитотерапия. При обследовании заявляемым способом содержание CD69+ лимфоцитов в периферической крови составило 7,5%, что выше заявляемого параметра и позволяет прогнозировать неэффективное деторождение. Действительно, последующая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в сроке 8-9 недель. Прогноз по заявляемому способу подтвердился – восстановление эффективного деторождения не произошло. Пример 3. Пациентка А., 25 лет, поступила на обследование в гинекологическое отделение по поводу невынашивания беременности и нарушения менструальной функции. В анамнезе: 1 своевременные роды, 1 погибшая беременность в сроке 9 недель беременности. По тестам функциональной диагностики – цикл двухфазный с недостаточностью лютеиновой фазы. В ходе гормонального обследования выявлена гиперпролактинемия, гипопрогестеронемия. При гистологическом исследовании биоптата эндометрия установлено наличие сочетания признаков хронического эндометрита с гормональными нарушениями в структуре эндометрия. Выявлен хламидиоз и микоплазмоз. Заключение терапевта: Хронический пиелонефрит, хронический гастрит, хронический гайморит, нейроциркуляторная дистония по гипотоническому типу. Поставлен клинический диагноз: Невынашивание беременности смешанного генеза. Гиперпролактинемия. Нарушение менструальной функции по типу НЛФ. Хронический эндометрит. Хламидиоз. Микоплазмоз. После проведенного противовоспалительного лечения, коррекции менструального цикла с последующим использованием иммуноцитотерапии при обследовании заявляемым способом установлено содержание CD69+ лимфоцитов в периферической крови – 6,2%. Восстановление эффективного деторождения прогнозируется. У женщины наступила беременность, которая закончилась своевременными родами и рождением здорового ребенка. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился. Преимущества заявляемого способа: 1. высокая точность – 91%, чувствительность – 95%, специфичность – 80%; 2. позволяет прогнозировать восстановление эффективного деторождения еще до наступления беременности. 3. применение иммуноцитотерапии вне беременности у женщин с невынашиванием ранних сроков в анамнезе оказывает выраженное иммуномодулирующее действие, проявляющееся в развитии адекватного иммунного ответа, нормализации гормональной функции плаценты и, как следствие, предотвращение самопроизвольных выкидышей. 4. способ позволяет своевременно провести профилактические и лечебные мероприятия для предотвращения повторных случаев невынашивания беременности; 5. простота и доступность методики. Указанным способом на базе гинекологической клиники ФГУ «Ив НИИ М и Д им. В.Н.Городкова Росздрава» обследованы 32 пациентки. Данные исследований приведены в таблице. Наблюдение за больными осуществлялось в течение года.
Литература 1. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности. – М.: Триада-Х, 2005. – 304 с. 2. Говалло В.И. Иммунология репродукции. – М.: Медицина, 1987. – 304 с. 3. Сухих Г.Т., Ванько Л.В. Иммунология беременности. – М.: Издательство РАМН, 2003. – 400 с. 5. Ярилин А.А. Основы иммунологии: Учебник. – М.: Медицина, 1999. – 608 с. 10. Lohr H.F., Sclaak J.F., Kollmannsperger S. et al. Liver-infiltrating and circulating CD4+ Т cells in chronic hepatitis C: immunodominant epitopes, HLA-restriction and functional significance. Liver, 1996, 16: 174-182. Формула изобретения
Способ прогнозирования восстановления эффективного деторождения после иммуноцитотерапии у женщин с невынашиванием ранних сроков путем иммунологического исследования периферической крови вне беременности, отличающийся тем, что после проведения традиционного лечения и последующей иммуноцитотерапии определяют относительное содержание CD69+ лимфоцитов и при его значении, равном или менее 6,2% прогнозируют восстановление эффективного деторождения.
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 17.08.2008
Извещение опубликовано: 10.07.2010 БИ: 19/2010
|
||||||||||||||||||||||||||
2-микроглобулин фертильности (АМГФ) в смыве из полости матки на 22-24 день цикла и в менструальных выделениях до и после лечения и при увеличении его в смыве из полости матки более чем в 6 раз, в менструальных выделениях более чем в 4 раза и при увеличении уровня прогестерона оценивают подготовку как эффективную.