Патент на изобретение №2329503

(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ РИСКА ПРОГРЕССИРОВАНИЯ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ У ЖЕНЩИН

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования течения артериальной гипертензии (АГ). Сущность способа: готовят суспензию эритроцитов в буферном растворе и методом ³¹Р-ЯМР определяют содержание аденозинтрифосфата (АТФ) и 2,3-дифосфоглицерата (ДФГ) эритроцитов в относительных единицах. В зависимости от возраста женщин по прогностическим таблицам определяют процент риска утяжеления течения эссенциальной АГ в ближайшие 5 лет. Использование способа дает возможность регистрировать биохимические параметры энергетического метаболизма эритроцитов, что приводит к верификации медицинского прогноза. Также способ позволяет определить процент риска утяжеления течения эссенциальной АГ у женщин в ближайшие 5 лет. 1 табл., 1 ил.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”давления крови? Семилетний срок изучения. Acta. cardiol. 1997, 52, №2, с.202-204. Найдено из БД VINITI.RU [найдено 01.11.2006]. [он-лайн]. OUWERKERK R. et al. Distribution of phosphorylated metabolites and magnesium in the red cells of a patient with hyperactive pymvate kinase. Blood. 1988, Oct; 72 (4), р.1224-1229. Найдено из БД PubMed, PMID 3167205. Найдено 01.11.2006. [он-лайн].

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, к способам прогнозирования течения артериальной гипертензии (АГ).

Известен способ прогнозирования развития осложнений заболеваний почек при артериальной гипертонии на основании анализа факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) и величины скорости натрий-литиевого противотранспорта.

При анализе с поправкой на влияние множества показателей относительный риск микроальбуминурии (экскреции альбумина с мочой 20-199 мкг/мин) составил при повышении систолического артериального давления (САД) на 18 мм рт.ст. у мужчин и женщин 2,51 и 2,10 соответственно.

Известен способ вычисления 10-летнего риска развития ССЗ у женщин на основании оценки наличия некоторых факторов риска ССЗ. Одним из важнейших факторов риска у женщин 40-65 лет признан повышенный и высокий уровень САД.

Наиболее близким, принятым за прототип является способ прогнозирования развития артериальной гипертензии в детской когорте на основании данных 20-летнего наблюдения, основанный на определении некоторых гемодинамических и антропометрических факторов.

Основным фактором, прогнозирующим АГ у женщин, явились уровень диастолического артериального давления (ДАД) в детстве с невысокими коэффициентами корреляции и возрастными ограничениями до 32-33 лет (в возрасте 12-13 лет – 0,24, в возрасте 25-26 лет – 0,41), а также изменения массы тела за 8 лет (с 25-26 лет до 32-33 лет).

Из перечисленных методов прогнозирования течения АГ можно заключить, что осуществляется либо прогнозирование риска развития осложнений АГ, либо риска возникновения АГ.

Фактически нет метода, позволяющего прогнозировать течение уже развившейся эссенциальной АГ.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в регистрации биохимических параметров энергетического метаболизма эритроцитов, что приводит к верификации медицинского прогноза.

Клинический результат достигнут тем, что способ оценки 5-летнего риска прогрессирования артериальной гипертензии у женщин включает в себя определение содержания макроэргических полифосфатов аденозинтрифосфата (АТФ) и 2,3-дифосфоглицерата (ДФГ) в эритроцитах методом ³¹Р-ЯМР-спектроскопии и клинического проспективного обследования женщин через 5 лет, при этом использование предлагаемого способа не требует дополнительного проспективного обследования.

С помощью нелинейного регрессионного анализа по данным определения АТФ и ДФГ составляется прогностическая таблица, позволяющая по уровню определяемых показателей прогнозировать риск прогрессирования АГ.

ЯМР-спектроскопия исследует переходы между магнитными энергетическими уровнями атомных ядер, вызываемыми радиочастотным излучением.

ЯМР – один из спектроскопических методов, способных давать информацию о структуре биополимеров, о взаимодействиях между молекулами и о молекулярном движении. Методом ЯМР могут быть отдельно исследованы различные атомы (¹Н, ¹³С, ¹⁹F, ³¹Р).

Для изучения макроэргических фосфатов и контроля рН при различных патологических состояниях широко применяется ЯМР-спектроскопия на ядрах ³¹

На чертеже представлен типичный спектр ¹³Р ЯМР эритроцитов.

Площади сигналов ДФГ и АТФ подсчитывались с помощью специально разработанного пакета программ путем сопоставления с площадью сигнала от гексаметапола (C₆H₁₈N₃PO), 0,0153 мг/мл.

За 1 условную единицу принимался образец с минимальным количеством Эр (3,76×10¹²/л) (Эр_st). Содержание (С) ДФГ, АТФ определялось в 1 относительной единице (отн.ед.) Эр по формуле: С=Р/Эр_ех:Эр/Эр_st.

С целью сопоставления содержания ³¹Р(Р) в различных пробах учитывалось количество Эр в пробах по формуле: С=Р:Эр_ех/Эр_st.

Методом нелинейной множественной регрессии составляется уравнение (коэффициент детерминации – 25% при р=0,07):

Прогрессирование АГ=6,45514-0,0755726·ДФГ-0,172384·АТФ-0,196156·Лет+0,00184312·ДФГ·ДФГ-0,0162127·АТФ·АТФ+0,0015326·Лет·Лет-0,00795295·ДФР·АТФ+0,000671683·ДФР·Лет+0,0121032·АТФ·Лет.

Данные прогнозирования риска представляются в виде таблицы (табл.1) для конкретного возраста пациенток.

Практически метод осуществляется следующим образом.

Обследование больных проводилось на уровне I этапа двухэтапной схемы дифференциальной диагностики артериальных гипертензий [Г.Г.Арабидзе Симптоматические артериальные гипертонии. / В кн.: Болезни сердца и сосудов. Под ред Е.И.Чазова, М.: Медицина, 1992]. Повторное клиническое обследование проводилось через 5 лет после первичного.

Образцы эритроцитов (Эр) для ³¹Р ЯМР-спектроскопии готовились по методу R.Arkowitz с соавт. (1987). Кровь забиралась из вены самотеком в гепаринизированные тефлоновые пробирки и тотчас центрифугировалась со скоростью 5000 оборотов в 1 мин в течение 10 минут. Надосадочная жидкость отбиралась для контроля гемолиза в пробе. Эритроциты 3 раза отмывались эквивалентным объемом изотонического 0,1М BIS-TRIS буфера (рН 7,4), содержащего 150 мМ хлорида натрия и 5 мМ глюкозы (среда А) в дистилированной воде. После этого к Эр добавлялась среда А, и объем суспензии доводился до 6 мл. Далее 1 мл суспензии отбирался в другую пробирку для подсчета Эр и контроля гемолиза, а к оставшемуся объему суспензии Эр добавлялась 1/9 часть аликвоты глицерина. Суспензия Эр с глицерином переливалась в пробирки диаметром 10 мм для ЯМР-спектроскопии, замораживалась и хранилась в жидком азоте. Перед ЯМР-спектроскопией образцы размораживались.

Контроль гемолиза Эр проводился путем измерения экстинкции (Е) при длине волны =543 нм на спектрофотометре.

Определение АТФ и 2,3-БФГ в эритроцитах проводилось методом ³¹P ЯМР-спектроскопии при 162 МГц на спектрометре при 310 К.

Формула изобретения

Способ оценки риска прогрессирования артериальной гипертензии у женщин, отличающийся тем, что готовят суспензию эритроцитов в буферном растворе и определяют содержание макроэргических фосфатов аденозинтрифосфата (АТФ) и 2,3-дифосфоглицерата (ДФГ) эритроцитов в относительных единицах методом ³¹Р-ЯМР, затем, в зависимости от возраста женщин, по прогностическим таблицам определяют процент риска утяжеления течения эссенциальной АГ в ближайшие 5 л.

РИСУНКИ