Патент на изобретение №2328294

(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ РАКА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к профилактической онкологии. Изобретение касается нового средства для профилактики рака, представляющего собой комбинацию антиканцерогенных агентов: антиоксидантных витаминов ретинола ацетата (90-270 мг%) и -токоферола ацетата (1,3-4 г%), антиоксидантного микроэлемента селенита натрия (1,3-4 мкг%) и глюкарата кальция (4-12 г%). Преимуществами предлагаемого средства для профилактики рака являются более сильное антиканцерогенное действие в совокупности с менее выраженными токсическими свойствами, достигаемое за счет синергизма действия компонентов, входящих в состав заявленного средства. 2 табл.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”Kirkpatrick R, Koolemans-Beynen A, Engineer FN, Humphries KA, el-Masry W, Webb ТЕ “Basis for the anti-tumor and chemopreventive activities of glucarate and the glucarate:retinoid combination.”, Anticancer Res., 1993 Mar-Apr; vol.13, №2, p.395-399, abstract.

Изобретение относится к области медицины, а именно к профилактической онкологии.

Известно использование в качестве средств для профилактики рака антиоксидантных витаминов и минералов: А, Е и селена, а также – глюкарата кальция.

Витамин Е включает 8 различных химических форм, синтезируемых растениями; чаще всего встречающимся и наиболее активным является D--токоферол. DL--токоферола по 30 мг в день в течение 5,5 лет в комбинации с

В экспериментах -токоферол или

D-глюкаровая кислота является нормальным метаболитом D-глюкозы, способным ингибировать активность фермента -глюкуронидазы. Повышенный уровень -глюкуронидазы, в результате чего стимулируется детоксификация канцерогенов и промоторов, кроме того, в процессе промоции канцерогенеза в тканях накапливается

Профилактическая онкология нуждается в новых антиканцерогенных средствах, обладающих способностью эффективно тормозить возникновение и развитие злокачественных опухолей, но лишенных токсического действия. Целью изобретения является создание нового средства для профилактики рака, обладающего выраженным антиканцерогенным (онкопрофилактическим) действием и не имеющего значимого токсического действия.

Наиболее близкими аналогами к заявляемому изобретению являются ретинол ацетат, -токоферол ацетат, селенит натрия и глюкарат кальция, применяемые в виде моноагентов для профилактики рака. Недостатками ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция являются их низкая эффективность при применении для профилактики рака в терапевтических дозах и токсичность при применении в дозах, оказывающих антиканцерогенное действие.

Технический результат состоит в создании нового средства для профилактики рака, обладающего выраженным антиканцерогенным действием и отсутствием токсических свойств. Технический результат достигается тем, что в качестве средства для профилактики рака предложена комбинация антиканцерогенных агентов: антиоксидантных витаминов ретинола ацетата и -токоферола ацетата, антиоксидантного микроэлемента селенита натрия и глюкарата кальция. Антиканцерогенные агенты использованы в следующих соотношениях: ретинол ацетат – 90-270 мг%, -токоферол ацетат – 1,3-4 г%, селенит натрия – 1,3-4 мкг%, глюкарат кальция – 4-12 г%. Суточные дозы отдельных антиканцерогенных веществ в составе комбинации применяются в 5-10 раз меньше, чем обычно используются для профилактики рака по данным литературы, а также в проведенных собственных опытах. При этом эффективность комбинации в небольших дозах выше антиканцерогенной активности отдельных компонентов, применяемых в терапевтических дозах, а токсические свойства компонентов не проявляются. Происходит суммирование и синергизм антиканцерогенного действия отдельных агентов при их применении в составе комбинации. При использовании антиканцерогенных агентов в меньшей дозировке вероятность токсического действия уменьшается, в комплексе происходят также взаимные антитоксические эффекты.

Заявляемое техническое решение по сравнению с аналогами имеет отличительные существенные признаки, что позволяет это решение считать отвечающим условию патентоспособности – новизна. Анализ известных в науке и технике аналогичных технических решений показывает, что заявляемое средство для профилактики рака не обнаружено и совокупность отличительных существенных признаков не известна. Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности – изобретательский уровень.

Ниже приведены примеры получения и использования в качестве средства для профилактики рака комбинации ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция.

Пример 1. Получение комбинации антиканцерогенных веществ. Ретинол ацетат и -токоферол ацетат использовали производства фармацевтического предприятия «Ай Си Эн Октябрь», Санкт-Петербург; селенит натрия получали от фирмы «Химмед», Москва. Глюкарат кальция синтезировали в лаборатории органического синтеза НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова в соответствии с описанной методикой [Патент №2159109 (РФ). Средство для профилактики рака / В.А.Александров, В.Г.Беспалов, А.С.Петров. – Заявл. 29.03.99, №99106294; Опубл. в БИ, 2000, №32]. Чистота синтезированного глюкарата кальция составляла более 99%; формула C₁₂H₁₈O₁₆Ca, мол.м. 228,2, точка плавления > 230°С (разложение). Антиканцерогенные вещества в порошкообразной форме тщательно перемешивали с крахмалом. Состав комбинации антиканцерогенных агентов на 100 г: ретинол ацетат – 90 или 270 мг; -токоферол ацетат – 1,3 или 4 г; селенит натрия – 1,3 или 4 мкг; глюкарат кальция – 4 или 12 г; крахмал – остальное до 100 г.

Пример 2. Применение комбинации антиканцерогенных веществ для предупреждения рака шейки матки и влагалища.

Эксперименты проведены на мышах SHR разводки питомника Рапполово РАМН (Ленинградская область). Животные получали стандартный кормовой рацион и питьевую водопроводную воду. Канцероген ДМБА получали от фирмы Sigma, США. Самкам мышей с начальным весом 20-22 г вводили внутривлагалищно 0,1% раствор ДМБА в триэтиленгликоле на полиуретановых тампонах, 2 раза в неделю в течение 4, 6 или 8 недель; доза ДМБА на 1 аппликацию составляла 25 мкг, суммарная доза – 200, 300 или 400 мкг. Окончательный подсчет опухолей проводили в конце экспериментов – через 6, 8 или 11 месяцев от начала воздействия ДМБА. Каждая серия экспериментов была со своей контрольной группой. В контрольных группах мышей дополнительным воздействиям не подвергали, в опытных группах давали антиканцерогенные вещества. Погибших и забитых в терминальном состоянии или по окончании экспериментов животных подвергали полной аутопсии. Животных забивали парами эфира. Органы с опухолями фиксировали в 10% растворе формалина. Гистологическую обработку тканей производили по стандартной методике с окраской гематоксилин/эозином. Патоморфологический анализ материала осуществляли при световой микроскопии. Патоморфологическую диагностику опухолей крыс и мышей проводили согласно классификации Международного агентства по изучению рака.

Антиканцерогенные вещества давали ежедневно в фазу промоции канцерогенеза: начинали давать сразу после окончания воздействия ДМБА и продолжали до конца экспериментов. Использовали состав комбинации антиканцерогенных агентов на 100 г: ретинол ацетат – 90 мг; -токоферол ацетат – 1,3 г; селенит натрия – 1,3 мкг; глюкарат кальция – 4 г; крахмал – остальное до 100 г; которую добавляли в кормовую смесь в концентрации 9750 мг/кг корма. Среднее суточное потребление отдельных агентов составляло у мышей для ретинола ацетата 4,5, -токоферола ацетата – 60, селенита натрия – 0,065, глюкарата кальция – 200 мг/кг массы тела. Для сравнения изучена также антиканцерогенная активность отдельных агентов комбинации. Ретинол ацетат добавляли в корм в дозе 300000 МЕ/кг корма, среднее суточное потребление составляло 150000 ME (45,5 мг)/кг массы тела. -Токоферол ацетат давали в дозе 600 мг/кг корма, среднее суточное потребление – 300 мг/кг массы тела. Селенит натрия давали с питьевой водой в концентрации 4 мг/л, среднее суточное потребление – 0,6 мг/кг массы тела. Глюкарат кальция замешивали в корм животных в дозе 2 г/кг корма, среднее суточное потребление – 1000 мг/кг массы тела. Таким образом, при расчете на среднесуточное потребление дозы антиканцерогенных веществ в составе комбинации была в 5-10 раз меньше, чем при изучении данных веществ по отдельности.

Статистическую обработку результатов исследований проводили общепринятыми статистическими методами с использованием критериев ², точного метода Фишера, t (Стьюдента) на персональном компьютере IBM, с использованием программ Statistica, Mstat и Excel.

У тестируемых веществ рассчитывали % ингибирования канцерогенеза в органах-мишенях по формуле L.W. Wattenberg:

,

где И – % ингибирования, МО – среднее число опухолей по отношению ко всем животным в опытной группе, МК – среднее число опухолей по отношению ко всем животным в контрольной группе.

Результаты экспериментов представлены в таблице 1.

По гистологической структуре: опухоли шейки матки и влагалища в большинстве случаев плоскоклеточные карциномы, в единичных случаях – аденосквамозные карциномы и аденокарциномы.

*Разница с контролем по критериям ² и t статистически достоверна, р<0,001-0,05.

Ретинол ацетат, -токоферол ацетат, селенит натрия и глюкарат кальция, даваемые по отдельности, статистически достоверно тормозили канцерогенез шейки матки и влагалища, % ингибирования составлял от 31,3 до 47,9. В группах с ретинол ацетатом и селенитом натрия наблюдались токсические эффекты: некоторое снижение прибавки массы тела, изменение шерстного покрова. Несмотря на то, что среднесуточные дозы отдельных агентов в составе комбинации были в 5-10 раз меньше, комбинация антиканцерогенных веществ более эффективно статистически достоверно тормозила канцерогенез шейки матки и влагалища; % ингибирования составил 59,7 – в 1,2-1,9 раз больше по сравнению с отдельными агентами (табл.2). Токсических эффектов в группе с комбинацией антиканцерогенных веществ не зарегистрировано. Таким образом, выявлено, что при применении комбинации антиканцерогенных веществ – ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция – наблюдается суммация или синергизм антиканцерогенного действия в отношении опухолей шейки матки и влагалища, индуцированных химическим канцерогеном ДМБА, и отсутствие токсических свойств.

Пример 3. Применение комбинации антиканцерогенных веществ для предупреждения опухолей пищевода и преджелудка.

Антиканцерогенные вещества давали ежедневно в фазу промоции канцерогенеза:

начинали давать сразу после окончания воздействия ЭЭНС и продолжали до конца экспериментов. Использовали состав комбинации антиканцерогенных агентов на 100 г: ретинол ацетат – 270 мг; -токоферол ацетат – 4 г; селенит натрия – 4 мкг; глюкарат кальция – 12 г; крахмал – остальное до 100 г; которую добавляли в кормовую смесь в концентрации 3250 мг/кг корма. Среднее суточное потребление отдельных агентов составляло у крыс для ретинола ацетата – 1,3, -токоферола ацетата – 20, селенита натрия – 0,02, глюкарата кальция – 60 мг/кг массы тела. Для сравнения изучена также антиканцерогенная активность отдельных агентов комбинации. Ретинол ацетат добавляли в корм в дозе 300000 МЕ/кг корма, среднее суточное потребление составляло 45000 ME (13,6 мг)/кг массы тела. -Токоферол ацетат давали в дозе 600 мг/кг корма, среднее суточное потребление – 90 мг/кг массы тела. Селенит натрия давали с питьевой водой в концентрации 4 мг/л, среднее суточное потребление – 0,2 мг/кг массы тела. Глюкарат кальция замешивали в корм животных в дозе 2 г/кг корма, среднее суточное потребление – 300 мг/кг массы тела. Таким образом, при расчете на среднесуточное потребление дозы антиканцерогенных веществ в составе комбинации были в 5-10 раз меньше, чем при изучении данных веществ по отдельности.

Аутопсию животных, гистологическую обработку органов и тканей, статистическую обработку результатов экспериментов, расчет % ингибирования канцерогенеза проводили также, как в примере 2.

Результаты экспериментов представлены в таблице 2.

По гистологической структуре опухоли пищевода и преджелудка были плоскоклеточными карциномами и папилломами.

*Разница с контролем по критериям ² и t статистически достоверна, р<0,001-0,05.

Из отдельных антиканцерогенных агентов только -токоферол ацетат и глюкарат кальция статистически достоверно тормозили канцерогенез пищевода и преджелудка, индуцированный ЭЭНС или МБНА, у крыс; % ингибирования составил соответственно 52,4 и 44,3. Ретинол ацетат и селенит натрия проявили лишь статистически недостоверную тенденцию к торможению канцерогенеза пищевода и преджелудка, индуцированного ЭЭНС, у крыс; % ингибирования составил соответственно 6,1 и 28,8. В группах с ретинол ацетатом и селенитом натрия наблюдались токсические эффекты: некоторое снижение прибавки массы тела, изменение шерстного покрова. Несмотря на то что среднесуточные дозы отдельных агентов в составе комбинации были в 5-10 раз меньше, комбинация антиканцерогенных веществ более эффективно статистически достоверно тормозила канцерогенез пищевода и преджелудка, индуцированный ЭЭНС, у крыс; % ингибирования составил 66,3 – в 1,3-10,9 раз больше по сравнению с отдельными агентами. Токсических эффектов в группе с комбинацией антиканцерогенных веществ не зарегистрировано. Таким образом, выявлено, что при применении комбинации антиканцерогенных веществ – ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция – наблюдается суммация или синергизм антиканцерогенного действия в отношении опухолей пищевода и преджелудка, индуцированных химическими канцерогенами ЭЭНС или МБНА, и отсутствие токсических свойств.

Предлагаемое для профилактики рака средство – комбинация ретинола ацетата, -токоферола ацетата, селенита натрия и глюкарата кальция – обеспечивает следующие преимущества по сравнению с аналогами: 1) более сильное антиканцерогенное (онкопрофилактическое) действие; 2) менее выраженные токсические свойства.

Формула изобретения

Средство для профилактики рака на основе антиоксидантных витаминов и микроэлементов и производных глюкаровой кислоты, отличающееся тем, что использована комбинация ретинола ацетата – 90-270 мг %, -токоферола ацетата – 1,3-4 г %, селенита натрия – 1,3-4 мкг % и глюкарата кальция – 4-12 г %.