Патент на изобретение №2327997

(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО АБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРОСТАТИТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к области биохимии и медицины и найдет применение в урологии, в частности, при дифференциальной диагностике форм хронического абактериального простатита. В сперме определяют активности супероксиддисмутазы (СОД) по методу Mistra H.P., Fridovich I. (1972) и каталазы (КТ) по методу Korolyuk M.A. et al., 1988. При повышении активности СОД от 49 усл. ед/мл и выше и повышении активности каталазы от 22 Ед/мл и выше диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при активности СОД от 39 до 48 усл. ед/мл и активности каталазы от 17 до 21 Ед/мл – ХАП невоспалительной формы. Изобретение обеспечивает повышение эффективности способа.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”PMID: 17319275 (реферат). Zhou J.F. et al. Increased oxidative stress and oxidative damage associated with chronic bacterial prostatitis. Asian J Androl. 2006 May; 8(3):317-23, PMID: 16625281 (реферат).

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в урологии, в частности, при дифференциальной диагностике форм хронического абактериального простатита.

Хронический простатит считается самым распространенным урологическим заболеванием у мужчин моложе 50 лет и третьим по частоте урологическим диагнозом у мужчин старше 50 лет, составляя 8% амбулаторных вызовов к урологу. С возрастом частота заболевания простатитом увеличивается и достигает 30-73%. Влияние простатита на качество жизни сопоставимо с инфарктом миокарда, стенокардией, болезнью Крона, что обусловливает также значительные психологические и социальные проблемы у больных хроническим простатитом мужчин трудоспособного возраста.

Наиболее распространенной на сегодняшний день в мире является предложенная Национальным Институтом Здоровья США (1995 г.) классификация, в которой особенно выделяется категория III – хронический абактериальный простатит с воспалительным компонентом и без него (Лоран О.Б., Сегал А.С. Хронический простатит. В кн.: Х Российский съезд урологов. Материалы: Простатит. Москва, 1-3 октября 2002 г. М.: 2004. 209-222).

Современная медицина не располагает углубленными и достоверными сведениями относительно причинных факторов и механизмов развития хронического абактериального простатита.

В настоящее время основными методами диагностики хронического простатита являются микроскопические, бактериологические и иммунологические методы исследования крови, мочи, секрета предстательной железы, спермы.

При изучении доступной медицинской и патентной литературы выявлены различные способы диагностики хронического простатита.

В заявке на изобретение №2004100574/15, бюл. №31, 2005 г. описан «Способ лабораторной диагностики хронического простатита», при котором проводят исследование 10 мл пред- и постмассажной порций утренней мочи, при этом определяют количество лейкоцитов в 1 мл каждой порции. При различной степени повышения этого показателя проводят дифференциальную диагностику хронического простатита.

В патенте РФ №2210779, бюл. №23, 2003 г., МПК G01N 33/92 описан «Способ диагностики активности течения хронического простатита», при котором проводят исследование секрета предстательной железы, при этом в нем определяют концентрацию диеновых конъюгатов и шиффовых оснований, рассчитывают коэффициент активности воспаления. При уменьшении его значения активность течения хронического простатита увеличивается.

Недостатком указанных способов является неточность диагностики различных форм хронического простатита.

В качестве прототипа взят способ диагностики, описанный в патенте РФ №2103691, бюл. №3, 1998 г., МПК G01N 33/53, 33/48 «Способ диагностики хронического простатита», по которому определяют уровень растворимого антигена лейкоцитов – 2 (РАЛ – 2) в сперме и при его содержании 20 мкг/мл и выше диагностируют хронический простатит.

Недостатком данного способа диагностики хронического простатита является его сложность, невозможность определения различных форм хронического простатита.

Целью настоящего изобретения является дифференциальная диагностика форм хронического абактериального простатита и также упрощение способа данной диагностики. Эта цель достигается путем определения в сперме активности супероксиддисмутазы (СОД) по методу Mistra H.P., Fridovich I. (1972) и каталазы (КТ) по методу Korolyuk M.A. et al., 1988.

Клинические обследования добровольцев – здоровых мужчин позволили установить, что уровень активности СОД и каталазы в сперме составляет в среднем 38 усл. ед/мл и 16 Ед/мл соответственно.

Способ определения активности СОД в сперме осуществляют следующим образом. Определение активности супероксиддисмутазы (СОД) основано на способности фермента ингибировать восстановление нитросинего тетразолия в присутствии супероксидрадикала, генерируемого в реакции восстановления адреналином молекулярного кислорода в щелочной среде.

Ход определения. Эякулят подвергают центрифугированию при 3000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость (спермоплазму) вносят в опытную пробу в объеме 0,02 мл, в контрольную пробу – 0,02 мл дистиллированной воды. В состав инкубационной смеси входят 2,0 мл 0,05 М Na – фосфатного буфера (РН 10,2), 0,1 мл 0,05% раствора нитросинего тетразолия. Реакцию запускают добавлением в опытную и контрольную пробы 0,05 мл 0,1% раствора адреналина гидрохлорида. Инкубацию осуществляют при 30°С в течение 10 мин, затем измеряют величину оптической плотности на спектрофотометре при 540 нм.

Принцип способа определения активности каталазы в сперме основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдата стойкий окрашенный комплекс и осуществляется следующим образом.

Ход определения. В контрольную пробирку вносят 2,0 мл 0,03% раствора перекиси водорода, 1,0 мл 4% раствора молибдата аммония, 0,1 мл сыворотки крови, без следов гемолиза. В опытную пробирку вносят 2,0 мл 0,03% раствора перекиси водорода и 0,1 мл сыворотки крови, инкубируют 10 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают добавлением 1,0 мл 4% раствора молибдата аммония. В контрольную и опытную пробирки приливают по 0,5 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин, интенсивность окраски центрифугата измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм против дистиллированной воды.

Активность каталазы выражают в Ед/мл (единицах действия на мл в мин), численно равных % ингибирования реакции за счет каталазы по отношению к контрольной пробе. Расчет проводят по формуле:

А(Ед/мл)=Е_К-Е₀/Е_К×100, где Е_К и Е₀ – экстинкции соответственно контрольной и опытной проб.

При повышении активности СОД от 49 усл. ед/мл и выше и повышении активности каталазы от 22 Ед/мл и выше диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при активности СОД от 39 до 48 усл. ед/мл и активности каталазы от 17 до 21 Ед/мл – ХАП невоспалительной формы.

Пример №1.

Больной В., 35 лет.

Жалобы: на боли в промежности, паховых областях, частые позывы к мочеиспусканию, эректильную дисфункцию.

Анамнез: считает себя больным около полугода. Прошел курс антимикробной терапии, массаж простаты, физиотерапевтическое лечение с временным эффектом.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании – железа тестоватой консистенции, умеренно болезненная.

Индекс простатических симптомов (ИПС) – 20.

Лабораторная диагностика.

Простато-специфический антиген (ПСА) – 0,9 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1 – порция мочи (ПМ) – 0-1 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

2-ПМ – 1-2 лейк., микрофлора не обнаружена.

Секрет простаты (СП) – до 100 лейк., S. Epidermidis – менее 10³ в 1 мл.

3-ПМ – до 100 лейк., S. Epidermidis – менее 10³ в 1 мл.

Сперма – 40-50 лейк., микрофлора не обнаружена.

Уровень активности СОД – 54,52 усл. ед/мл.

Уровень активности каталазы – 25,15 Ед/мл.

Поставлен диагноз: Хронический абактериальный простатит, воспалительная форма.

Пример №2.

Больной Т., 39 лет.

Жалобы: на боли в надлобковой области, промежности.

Анамнез: считает себя больным около 2 лет. От лечения у уролога улучшения в состоянии не отмечает.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании – предстательная железа обычной формы, незначительно болезненная.

ИПС – 23.

Лабораторная диагностика.

ПСА – 0,05 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1-ПМ – 0-1 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

2-ПМ – 0-1 лейк., микрофлора не обнаружена.

СП – 4-5 лейк., микрофлора не обнаружена.

3-ПМ – 4-5 лейк., микрофлора не обнаружена.

Сперма – 5-7 лейк., микрофлора не обнаружена.

Уровень активности СОД – 44,51 усл. ед/мл.

Уровень активности каталазы – 18,21 Ед/мл.

На основании полученных данных поставлен диагноз хронический абактериальный простатит, невоспалительная форма.

Преимущества предлагаемого способа по сравнению с прототипом состоят в том, что он позволяет проводить дифференциальную диагностику между формами хронического абактериального простатита и в зависимости от этого определять тактику лечения.

Супероксиддисмутаза (СОД) и каталаза (КТ) являются важнейшими компонентами ферментативной антиоксидантной системы, отвечающими за защиту организма от определенных форм активных кислородных метаболитов. Они отличаются высокой специфичностью действия, клеточной и органной локализацией и использованием в качестве катализаторов металлов. СОД катализирует реакцию дисмутации супероксидного радикала с образованием перекиси водорода и молекулярного кислорода со скоростью, превышающей на три порядка спонтанную дисмутацию.

Широкое участие супероксидных радикалов в ферментативных реакциях синтеза простагландинов и метаболизма ксенобиотиков, а также клеточной пролиферации и экспрессии определенных генов позволяет рассматривать СОД как фермент, выполняющий не только защитную, но и регуляторную функцию.

Синергистом СОД в клетке является каталаза, препятствующая накоплению перекеси водорода, образующаяся при дисмутации супероксидного анионрадикала и при аэробном окислении восстановленных флавопротеидов. Фермент катализирует двухэлектронное восстановление перекиси водорода до воды: 2H₂O₂KTH₂O₂+O₂.

Каталаза – гемсодержащий фермент, максимальное содержание которого обнаружено в эритроцитах, а также в печени и почках; длительно сохраняет свою высокую активность, почти не требует энергии активации.

Из-за большой молекулярной массы каталаза плохо проникает внутрь клеток; уровень внутриклеточной каталазы регулируется образованием перекиси водорода.

Предлагаемый способ апробирован на 32 больных и показал высокую информативность.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики хронического абактериального простатита, предусматривающий клиническое обследование, отличающийся тем, что в сперме определяют уровни активности супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы (КТ) и при повышении активности СОД от 49 усл. ед/мл и выше и повышении активности каталазы от 22 Ед/мл и выше диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при активности СОД от 39 до 48 усл. ед/мл и активности каталазы от 17 до 21 Ед/мл – ХАП невоспалительной формы.