Патент на изобретение №2327347

(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИЧИНОК WOHLFAHRTIA MAGNIFICA

(57) Реферат:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при искусственном разведении личинок Wohlfahrtia magnifica всех стадий развития. Питательная среда содержит гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота, дефибринированную кровь овец, дрожжевой экстракт, глюкозу, агар-агар, пенициллин, стрептомицин и раствор Хенкса. Изобретение позволяет повысить выход полноценно сформированных личинок и удешевить получение этих личинок.

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к ветеринарии, преимущественно к ветеринарной паразитологии, и может быть использовано при искусственном разведении личинок Wohlfahrtia magnifica всех стадий развития, используемых для проведения лабораторных, в частности токсикологических, исследований, необходимых для разработки новых эффективных средств и методов борьбы с вольфартиозом.

Уровень техники

Известна питательная среда для культивирования личинок желудочных оводов, содержащая пятипроцентный рыбий гидролизат, раствор Хенкса и сыворотку крови лошади (Сомов С.Л., Сомова Н.М., Красюкова Л.С. Способ культивирования личинок желудочных оводов. А.С. №1001900, А01К 67/00, 1983).

Однако указанный способ культивирования и питательная среда не могут быть использованы для культивирования личинок вольфартовой мухи, так как данные паразиты отличаются способом паразитирования и циклами развития.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту к предлагаемой питательной среде и принятый авторами за прототип является питательная среда для выращивания личинок вольфартовой мухи, в качестве которой используется сухая сыворотка крови крупного рогатого скота, которая помещается в марлевый мешочек, смачивающийся дистиллированном водой и рибофлавином, который помещается на кусочки кожи крупного рогатого скота с личинками мух.

Однако способ не обеспечивает постоянное культивирование всех фаз развития насекомых, а количество получаемых куколок зависит от комплекса абиотических факторов и характеризуется выплодом неполноценных насекомых от 35 до 40% (ТЕРНОВОЙ В.И. Проблемы ветеринарной санитарии, Труды ВНИИВС, М, 1962, Т. XXI, с.84-87).

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является создание искусственной питательной среды, обеспечивающей достаточно высокий выход полноценно сформированных личинок Wohlfahrtia magnifica.

Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к возможности получения в лабораторных условиях независимо от времени года полноценно сформированных личинок вольфартовой мухи различных стадий развития для проведения исследований, направленных на борьбу с вольфартиозом, удешевлению получения личинок.

Технический результат достигается с помощью питательной среды для культивирования личинок Wohlfahrtia magnifica, содержащей гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота, дефибринированную кровь овец, глюкозу, агар-агар, дрожжевой экстракт, стрептомицин, пенициллин и раствор Хенкса в следующем соотношении компонентов (г):

Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота (ФГМ) – 30,5-31,5

Дефибринированная кровь овец – 10,0-11,0

Глюкоза – 5,0-6,0

Агар-агар – 1,0-1,5

Дрожжевой экстракт – 0,3-0,4

Стрептомицин – 0,05-0,06

Пенициллин – 0,05-0,06

Раствор Хенкса – 53,1-49,48

Сущность получения питательной среды:

В 53,1-49,48 г раствора Хенкса добавляют 1-1,5 г агар-агара и помещают на водяную баню при температуре 50-52°С до полного растворения агар-агара при периодическом помешивании. В теплый раствор агар-агара добавляют 30,5-31,5 г гидролизата мышечной ткани крупного рогатого скота, 5-6 г глюкозы, 0,3-0,4 г дрожжевого экстракта, 10-11 г дефибринированной крови овец, 0,05-0,06 г стрептомицина и 0,05-0,06 г пенициллина.

Затем среда разливается в чашки Петри. Культивирование проводят в термостате при температуре 38-40°С и влажности 70-75%. Продолжительность культивирования 5-7 суток. Выход личинок 79-85%. Выход мух из полученных на искусственной питательной среде личинок составляет 68-72%.

Питательная среда не подлежит хранению и готовится непосредственно перед началом культивирования.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения получения питательной среды для культивирования личинок Wohlfahrtia magnifica.

Пример 1

Соотношение компонентов среды составляет (г):

Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота – 20,0

Дефибринированная кровь овец – 5,0

Глюкоза – 3,0

Агар-агар – 0,5

Дрожжевой экстракт – 0,2

Стрептомицин – 0,1

Пенициллин – 0,1

Раствор Хенкса – 71,1

В 71,1 г раствора Хенкса добавляют 0,5 г агар-агара и помещают на водяную баню при температуре 50-52°С до полного растворения агар-агара при периодическом помешивании. В теплый раствор агар-агара добавляют 2 г гидролизата мышечной ткани крупного рогатого скота, 3 г глюкозы, 0,2 г дрожжевого экстракта, 5 г дефибринированной крови овец, 0,1 г стрептомицина и 0,1 г пенициллина.

Затем среда разливается в чашки Петри. Культивирование проводят в термостате при температуре 38-40°С и влажности – 70-75%. Продолжительность культивирования 5-7 суток.

При культивировании личинок вольфартовой мухи на среде с таким составом выход личинок составил 41-43%, а выход мух – 23-25%.

Пример 2 проводится аналогично примеру 1, но соотношение компонентов среды составляет (г):

Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота – 30,5

Дефибринированная кровь овец – 10,0

Глюкоза – 5,0

Агар-агар – 1,0

Дрожжевой экстракт – 0,3

Стрептомицин – 0,05

Пенициллин – 0,05

Раствор Хенкса – 53,1

При культивировании личинок вольфартовой мухи на среде с таким составом выход личинок составил 79-85%, а выход мух – 68-72%.

Пример 3 проводится аналогично примеру 1, но соотношение компонентов среды составляет (г):

Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота – 31,5

Дефибринированная кровь овец – 11,0

Глюкоза – 6.0

Агар-агар 1.5

Дрожжевой экстракт – 0.4

Стрептомицин – 0.06

Пенициллин – 0,06

Раствор Хенкса – 49,48

При культивировании личинок вольфартовой мухи на среде с таким составом выход личинок составил 79-85%, а выход мух – 68-72%.

Пример 4 проводится аналогично примеру 1, но соотношение компонентов среды составляет (г):

Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота – 35,0

Дефибринированная кровь овец – 16,0

Глюкоза – 15,0

Агароза – 3,0

Дрожжевой экстракт – 1,0

Стрептомицин – 0,5

Пенициллин – 0,5

Раствор Хенкса – 29,0

При культивировании личинок вольфартовой мухи на среде с таким составом выход личинок составил 61-65%, а выход мух – 65-67%. Уменьшение выхода личинок объясняется избыточным содержанием питательных веществ в среде и нарушением их соотношения.

Таким образом, примеры 2 и 3 являются наиболее оптимальными, т.к. выход личинок является наиболее высоким и составляет 79-85%, а выплод мух составляет 68-72%.

Испытания изобретения показали, что предложенная питательная среда позволяет получать достаточно высокий выход личинок Wohlfahrtia magnifica в лабораторных условиях без использования лабораторных животных, что позволит более эффективно проводить исследования, направленные на разработку совершенных методов и способов борьбы с вольфартиозом.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

– возможность получения в лабораторных условиях полноценно сформированных личинок вольфартовой мухи;

– удешевление получения питательной среды;

– высокий процент выхода личинок;

– проведение лабораторных исследований независимо от времени года.

Приготовление гидролизата мышечной ткани

Мясо крупного рогатого скота очищают от костей, жира и пленок, измельчают в мясорубке. Фарш кладут в широкую бутыль и заливают 4-х кратным количеством дистиллированной воды (на 1 кг фарша – 4 л воды). На каждый литр смеси добавляют 30 мл соляной кислоты (уд. вес 1,19). Содержимое бутыли хорошо перемешивают, бутыль закрывают пробкой и ставят в автоклав. Гидролиз проводят при 2 атм в течение 3 часов. Затем гидролизат отстаивают и фильтруют. Содержание общего азота по Къельдалю 800-1000 мг/%, аминного азота 500-600 мг/%, степень гидролиза 0,60.

Приготовление дрожжевого экстракта

250 г прессованных пекарских дрожжей суспендируют до образования гомогенной массы в 1 л дистиллированной воды. Суспензию кипятят 4-5 минут, непрерывно помешивая. Микробную массу осаждают центрифугированием при 3-4 тыс об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость сливают и стерилизуют через фильтр Зейтца. Экстракт хранят в посуде темного цвета при 4-5°С и используют в течение 8-10 дней с момента изготовления.

Питательная среда не подлежит хранению и готовится непосредственно перед началом культивирования.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования личинок Wohlfahrtia magnifica, содержащая гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота, дефибринированную кровь овец, глюкозу, агар-агар, дрожжевой экстракт, пенициллин, стрептомицин и раствор Хенкса в следующем соотношении компонентов, г: