Патент на изобретение №2327164

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРПЛАСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ЭНДОМЕТРИЯ У БОЛЬНЫХ МИОМОЙ МАТКИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, онкогинекологии, и может быть использовано для диагностики гиперпластических процессов эндометрия у больных миомой матки. Сущность способа: в супернатанте смыва из полости матки или менструальной крови одномоментно определяют показатели каталазы, каталазного числа, малонового диальдегида. При снижении значений каталазного числа до 2,53±0,16 ед., показателя каталазы до 0,71±0,05 ед. и увеличении значения малонового диальдегида до 0,49±0,06 нмоль диагностируют нормальное строение эндометрия у больных миомой матки; при снижении значений каталазного числа до 1,8±0,33 ед., показателя каталазы до 0,44±0,09 ед. и нарастании значения малонового диальдегида до 1,68±0,23 нмоль диагностируют гиперплазию эндометрия у больных миомой матки; при снижении значения каталазного числа до 0,68±0,2 ед., показателя каталазы до 0,2±0,09 ед. и нарастании значения малонового диальдегида до 3,01±0,85 нмоль диагностируют атипическую гиперплазию эндометрия у больных миомой матки. Использование способа позволяет диагностировать гиперпластические процессы эндометрия при миоме матки в короткие сроки на малых объемах биологических жидкостей. 1 табл.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”patients with uterine myoma, endometrial polypus, hyperplastic and malignant endometrium. Biol. Res. 2006; 39(4), p.619-629. реф. Найдено из БД PubMed, PMID: 17657343, [Найдено 21.09.2007].[он лайн]. CHARPIN COLETTE et all. Микроскопическая оценка препаратов эндометрия. Значение и практические трудности. Rev. fr. gynecol. et obstet. 1998. 93, N 1, с.30-32. реф. Найдено из БД VINITI.RU. [Найдено 21.09.2007]. [он-лайн].

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, онкогинекологии, и может быть использовано для диагностики гиперпластических процессов эндометрия.

Успехи практической гинекологии и онкогинекологии в настоящее время определяются удельным весом предрака и ранних стадий рака гениталий у первично выявленных больных. Клинический опыт показывает, что распознавание и лечение предопухолевых и ранних форм опухолевых процессов являются не только медико-биологической, но и важной социальной задачей.

Причинами инфицирования эндометрия с последующей его хронизацией могут быть септически осложненные роды, ручной контроль полости матки, аборты, диагностические выскабливания полости матки, гистероскопия, а также восходящая инфекция при беспорядочных половых связях.

На настоящий момент не вызывает сомнения тот факт, что развитие различного рода патологических процессов ассоциировано с возникновением состояния оксидантного стресса, который либо является непосредственной причиной возникновения заболевания, либо сопровождает развитие данного процесса.

Как правило, в процесс вовлекается антиоксидантная система (АОС) организма, регулирующая процессы перекисного окисления липидов, белков. При этом увеличивается продукция активных форм кислорода (АФК). Повышенное содержание АФК в клетке сопровождается разрушением основных ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ). Окислительная модификация и инактивация ферментов – антиоксидантов приводит к истощению активности АОЗ и гибели клеток.

Очевидно, что наиболее реальным путем профилактики ГЗО матки является своевременное их выявление и коррекция гомеостатических нарушений, направленная на повышение противоопухолевой резистентности организма.

Изменившийся взгляд на патогенез ГП мио-эндометрия и РЭ (роль инфекции, активных форм кислорода), а также реальное существование двух патогенетических вариантов указанных процессов ставит перед исследователями важные задачи, а именно – поиск новых подходов к массовому скринингу.

На наш взгляд этот феномен открывает перспективы использования биохимического исследования биологических жидкостей (менструальная кровь, смывы из полости матки) в скрининге и мониторинге за состоянием эндометрия при ГПЭ.

Для диагностики гиперпластических процессов эндометрия при ГЗО матки в практической медицине используется несколько методов.

Однако способ имеет существенные недостатки:

– отсутствие общепринятых цитологических критериев степени выраженности гиперпластических процессов эндометрия;

– сложность интерпретации полученных результатов;

– необходимость специальных методов окраски препаратов;

– наличие специализированных лабораторий.

Недостатками этих способов являются:

– необходимость в наличии соответствующего оборудования для ультразвуковой диагностики и условий для проведения исследования;

– сложность интерпретации эхо-картин у больных с объемными процессами внутренних гениталий.

Однако для проведения данного исследования необходимо иметь соответствующее оборудование, подготовленные кадры, операционную.

Среди дополнительных методов диагностики ГПЭ в литературе описано радионуклидное исследование с ³²Р, основанное на способности радионуклидов накапливаться в разных концентрациях в нормальном и гиперплазированном эндометрии. Так в секреторном эндометрии накопление ³²

Недостатками этого способа являются:

– наличие специальной лаборатории и соответствующего оборудования, обученного персонала;

– невозможность выполнения в обычных клинических лабораториях;

– дороговизна исследования.

– сложность технического исполнения;

– необходимость наличия специально оборудованного помещения и обученного персонала;

– необходимость использования дорогостоящего оборудования;

– длительность получения окончательного заключения (10-14 дней).

Наиболее близким к предлагаемому способу является диагностика ГПЭ иммунохимическим методом, основанным на определении в смывах из полости матки некоторых опухолевых маркеров: альфа₂

Недостатками указанного способа являются:

– необходимы стандартные тест-системы (моноспецифическая антисыворотка, тест-антиген);

– для получения антисыворотки необходима иммунизация кроликов полуочищенными тканевыми экстрактами или белковыми фракциями в течение месяца, после завершения которой еще необходим интервал длительностью в 7-8 дней перед забором крови кролика;

– трудоемкость в приготовлении тест-систем, длительность исследования.

Кроме того, недостаточная надежность самостоятельного использования метода диктует необходимость сочетать его на I этапе селективного скрининга с цитологическим исследованием эндометриальных смывов, а на II этапе – с гистологическим исследованием соскоба эндометрия.

Целью предлагаемого изобретения является упрощение диагностики гиперпластических процессов эндометрия при миоме матки.

Поставленная цель в изобретении достигается тем, что в супернатанте смыва из полости матки или менструальной крови одномоментно определяют показатели каталазы, каталазного числа, малонового диальдегида и при снижении значений каталазного числа до 2,53±0,16 ед., показателя каталазы до 0,71±0,05 ед. и увеличении значения малонового диальдегида до 0,49±0,06 нмоль диагностируют нормальное строение эндометрия у больных миомой матки; при снижении значений каталазного числа до 1,8±0,33 ед., показателя каталазы до 0,44±0,09 ед. и увеличении значения малонового диальдегида до 1,68±0,23 нмоль диагностируют гиперплазию эндометрия у больных миомой матки; при снижении значения каталазного числа до 0,68±0,2 ед., а показателя каталазы до 0,2±0,09 ед. и увеличении значения малонового диальдегида до 3,01±0,85 нмоль диагностируют атипическую гиперплазию эндометрия у больных миомой матки.

У больных ГЗО матки в смывах из полости матки, менструальной крови исследовали содержание одного из ферментов АОЗ-каталазы, вторичного продукта перекисного окисления липидов – малонового диальдегида (МДА). Выбор для исследования фермента каталазы и МДА связан с их физиологической ролью, присутствием во многих тканях, биологических жидкостях организма, отличающихся высоким обменом веществ и отсутствием данных о их значении в патогенезе гормонозависимых опухолей матки.

Определение скорости перекисного окисления липидов в биологических субстратах проводили по методике Е.А.Строева, Е.Г.Макарова, 1986 г., а определение каталазного числа, показателя каталазы – по методу Баха и Зубковой, 1976 г.

Определение МДА, показателя каталазы и каталазного числа проводили одномоментно в сыворотке крови и смыве из полости матки или менструальной крови. Результаты проведенного исследования приведены в таблице. Необходимо отметить, что изменения исследуемых показателей более наглядны в смывах из полости матки (менструальной крови), чем в периферической крови. Данное обстоятельство может быть связано с наличием сопутствующей экстрагенитальной патологии и ее влиянием на их уровень.

Всем исследуемым наряду с традиционным клинико-лабораторным обследованием проводилось УЗИ органов малого таза, молочных желез, по показаниям – маммография, цитологическое исследование эндо-экзоцервикса. Полученные результаты показателей каталазы и МДА сопоставлялись с цитологическим исследованием аспиратов из полости матки и гистологическими заключениями соскобов эндометрия.

Обследовано 108 больных в возрасте от 28 до 75 лет. Все больные были разделены по нозологическому признаку (ММ с нормальным строением эндометрия, ММ с гиперплазией эндометрия, ММ в сочетании с атипической гиперплазией эндометрия – предрак). Контрольную группу составили 32 пациентки без гормонозависимых опухолей матки.

Предлагаемый способ был успешно апробирован в гинекологических отделениях ООД, АМОКБ №1 и КБ №2, ГКБ №5, ж/к ГКБ №2 г.Астрахани в 2004-2006 г.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1

Больная Слащева Л.А., 54 лет находилась на оперативном лечении в гинекологическом отделении ООД (история болезни №6904) с диагнозом: симптомная миома матки.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 12 лет по 5 дней, регулярные, обильные, цикл 30 дней.

В репродуктивном периоде 4 беременности: 2 родов, 2 аборта.

Миома матки выявлена в 2005 году.

Сопутствующая патология: гипертоническая болезнь II ст.

Объективно.

Молочные железы – без особенностей.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно, слизистая влагалища не изменена. Тело матки увеличено до 8-недельной беременности, бугристое. Придатки с обеих сторон без особенностей. Параметрии свободны. Выделения – бели.

УЗИ от 22.09.06 г. – матка размерами 77×58×83 мм, бугристая, увеличена до 8 недель беременности. По задней стенке матки определяется субмукозный узел размером 39×19×33 мм, интерстициальный узел размером 20×15×17 мм и множество мелких узлов. М – эхо 5 мм. Правый яичник 30×27×31 мм, фолликулы d 1,3 мм, левый яичник – 24×20 х 24 мм. В шейке матки кисты эндоцервикса.

Забор материала: после осмотра женщины на зеркалах, в асептических условиях, стерильным подключичным катетером диаметром 1,2 мм и одноразовым шприцом в полость матки вводят стерильный 0,9% физиологический раствор объемом 4-5,0 мл, затем насасывают содержимое матки в шприц. Полученную смесь центрифугируют в течение 15 минут с частотой 3000 об/мин. Супернатант (надосадочную жидкость) используют для дальнейшей работы.

Цитологическое исследование аспирата от 22.10.06 г. – кровь, группы клеток призматического эпителия.

24.10.06 г.выполнена экстирпация матки с придатками.

Гистологическое исследование удаленного препарата №22814 – 22 от 06.11.06 г. Микро: матка – фибромиома, атрофия эндометрия. Шейка – многослойный плоский эпителий нормального строения, кисты, яичники – белые тела, трубы – полнокровие.

Каталазное число – 2,69 ед.

Показатель каталазы – 0,71 ед.

МДА – 0,48 нмоль

Указанные результаты каталазного числа, показателя каталазы, МДА соответствуют нормальному строению эндометрия у больной ММ.

Пример 2

Больная Белобородова Л.Н. 41 г. находилась на диспансерном наблюдении в женской консультации по месту жительства с диагнозом: миома матки.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 14 лет по 5-6 дней, умеренные, болезненные, цикл 30 дней.

В анамнезе 8 беременностей, из которых 2 закончились срочными родами, в 6 случаях – прерывание беременности по желанию пациентки.

Сопутствующая патология. НЦД смешанного генеза.

Миома матки впервые выявлена в 1997 году.

УЗИ органов малого таза от 04.03.04 г.: Матка размерами 67×68×59, структура миометрия диффузно неоднородная за счет единичных интерстициальных узлов d 10-12 мм. Эндометрий 11 мм (II фаза цикла). Шейка матки не увеличена. Цервикальный канал линейный.

Левый яичник 43·30 мм, подпаян к матке, с фолликулами d 4-5 мм, правый яичник – 39·14 мм с фолликулами d 4-9 мм. Структура яичников неоднородная.

Заключение: ультразвуковая картина миомы матки. Хронического аднексита в ст.ремиссии.

Объективно.

Молочные железы – без особенностей.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища не изменена. Матка увеличена до 6-7-недельной беременности. Придатки тяжистые с обеих сторон. Параметрии свободны. Выделения – бели.

Забор материала проводился аналогично, см. пример 1.

Аспират из полости матки №28621 – 22 от 20.03.2004: кровь, клетки эпителия эндометрия.

Гистологический результат №15558 «столбика» ткани из полости матки от 31.03.2004 г. – микро: эндометрий в фазе секреции.

Каталазное число – 2,62 ед.

Показатель каталазы – 0,68 ед.

МДА – 0,47 нмоль

Указанные результаты каталазного числа, показателя каталазы, МДА соответствуют нормальному строению эндометрия у больной ММ.

Пример 3.

Больная Ткачева В.П., 46 лет находилась на оперативном лечении в гинекологическом отделении АМОКБ (история болезни №17704) с диагнозом: симптомная миома матки, гиперпластический процесс эндометрия.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 13 лет по 6-7 дней, регулярные, обильные, цикл 30 дней.

В анамнезе 4 беременности: 2 родов, 2 искусственных аборта.

Миома матки впервые выявлена в 2001 году, величиной 5-6 недель.

В течение 2005 года отмечен рост опухоли, при контрольном УЗИ от 16.08.06 года величина матки соответствует 9-недельной беременности.

Матка с нечеткими контурами, размерами 111×68×98 мм, неоднородной структуры. По задней стенке матки узел d 22 мм, деформирующий полость матки. М – эхо 18 мм. Шейка матки 44×43 мм. Цервикальный канал до 9 мм, заполнен неоднородным содержимым. Правый яичник 31×17 мм, фолликулы 2-3 мм, левый яичник – 34×20 мм, фолликул 10-12 мм. Правая маточная труба с жидкостной зоной.

Заключение: миома матки, эхографические признаки хронического аднексита, гидросальпинкс правой маточной трубы.

Объективно.

Молочные железы – без особенностей.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно. Влагалище емкое, рожавшей женщины, слизистая не изменена. Тело матки увеличено до 9-недельной беременности, плотное, безболезненное. Придатки с обеих сторон утолщены, больше справа. Параметрии свободны. Выделения бели.

Забор материала проводился аналогично, см. пример 1.

Цитологическое исследование аспирата из полости матки №3187-88 от 18.09.06 г.: кровь, пролиферация клеток призматического эпителия.

21.09.2006 выполнена надвлагалищная ампутация матки с придатками.

Гистологическое исследование удаленного препарата №37390-404 от 13.10.2006 г. Микро: матка – узлы лейомиомы, очаги аденомиоза, эндометрий – железистая гиперплазия; яичник киста желтого тела, белые тела. Трубы с участками десквамации слизистой.

Каталазное число – 1,49 ед.

Показатель каталазы – 0,35 ед.

МДА – 1,84 нмоль

Указанные результаты каталазного числа, показателя каталазы, МДА соответствуют гиперплазии эндометрия у больной ММ.

Пример 4

Больная Петриченко Н.П., 49 лет. Поступила в гинекологическое отделение АМОКБ на оперативное лечение (история болезни №19490) с диагнозом: симптомная миома матки.

Миома матки впервые выявлена в 2005 году.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 14 лет по 7 дней через 28 дней, регулярные, обильные. В анамнезе 9 беременностей: 2 родов, 7 искусственных абортов.

Сопутствующая патология.

Диффузная мастопатия, НЦД по смешанному типу, хронический спастический колит, панкреатит, холецистит, ожирение I степени.

Объективно.

Молочные железы – узловых образований не выявлено.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища не изменена. Шейка матки цилиндрическая, чистая, наружный зев щелевидный. Тело матки увеличено до 9 недель беременности. Придатки отдельно не определяются. Параметрии свободны. Выделения мажущиеся кровянистые (менструация).

Забор материала: стерильная четырехслойная марлевая салфетка размером 15×5 см предлагалась больной в виде подкладной на 3 часа. Затем использованную прокладку помещали в чашку Петри, добавляли 5 мл 0,9% физиологического раствора, отжимали салфетку, полученную биологическую жидкость использовали для дальнейшей работы.

Цитологическое исследование эндо-экзоцервикса №291-292 – без особенностей.

Цитологическое исследование аспирата из полости матки №4887-88 – плоский эпителий, комплексы и железистые структуры пролиферирующего кубического эпителия.

УЗИ органов малого таза от 18.11.05 г.

Матка размерами 87×68×71 мм. По задней стенке интерстициальный миоматозный узел с центрипетальным ростом размером 33×26 мм; шейка матки без патологии, М-эхо – 14 мм. Яичники справа 29×21 мм однородной структуры, слева – 24×14 мм.

07.12.05 г. выполнена надвлагалищная ампутация матки без придатков.

Гистологическое исследование №12485-500 от 17.12. 05 г. Микро: матка – лейомиома, аденомиоз, железистая гиперплазия эндометрия. Трубы – полнокровие сосудов. Яичники – белое тело, желтое тело с кровоизлияниями, фолликулярные кисты.

Каталазное число – 2,12 ед.

Показатель каталазы – 0,4 ед.

МДА – 1,53 нмоль.

Указанные результаты каталазного числа, показателя каталазы, МДА менструальной крови соответствуют гиперплазии эндометрия у больной ММ.

Пример 5

Больная Агишева А.Ш., 52 лет находилась в гинекологическом отделении ООД (история болезни №6904) с диагнозом: атипическая гиперплазия эндометрия, миома матки. Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 14 лет по 5-6 дней, регулярные, безболезненные, обильные, цикл 28 дней.

В анамнезе у больной 6 беременностей: 2 родов, 4 искусственных аборта.

Сопутствующая патология: симптоматическая гипертония Hk₀, анемия I ст.

Объективно.

Молочные железы – без особенностей.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно, слизистая влагалища не изменена. Тело матки увеличено до 14-недельной беременности, бугристое, безболезненное. Придатки с обеих сторон без особенностей. Параметрии свободны. Выделения – бели.

Забор материала проводился аналогично, см. пример 1.

УЗИ от 22.09.06 г. – матка размерами 107×70×77 мм, бугристая, с узлами d 80 мм и 45 мм, полость расширена до 8 мм, с неоднородным содержимым.

Правый яичник не лоцируется, левый яичник – 35×20×23 мм.

Цитологическое исследование аспирата из полости матки №6495-96 от 09.10.06. – кровь, выраженная пролиферация призматического эпителия.

10.10.06 г. выполнена экстирпация матки с придатками.

Гистологический результат №21476-98 от 23.10.06 г. Микро: матка – фибромиома, атипическая гиперплазия эндометрия. Шейка – многослойный плоский эпителий отечный, кисты, трубы – полнокровие.

Каталазное число – 0,8 ед.

Показатель каталазы – 0,13 ед.

МДА – 3,85 нмоль

Указанные результаты каталазного числа, показателя каталазы, МДА соответствуют атипической гиперплазии эндометрия у больной ММ.

Пример 6

Больная Смирнова Л.А., 45 лет находилась на лечении в гинекологическом отделении ООД (история болезни №1848) с диагнозом: атипическая гиперплазия эндометрия, миома матки.

Менструальная и репродуктивная функции.

Менструации с 14 лет по 5 дней, обильные нерегулярные.

В анамнезе 3 беременности, из которых 2 закончились срочными родами, в 1 случае имела место коррекция менструального цикла.

Сопутствующая патология. НЦД смешанного генеза, хронический цистит, хронический гепатит, холецистит.

Миома матки впервые выявлена в 1996 году.

УЗИ органов малого таза от 06.03.06 г.: Матка размерами 77×68×59, эндометрий 18 мм с неровными контурами. В области дна матки солидное образование размером 43×31 мм. По передней стенке матки образование размером 30 мм. Яичники отчетливо не лоцируются.

Заключение: подозрение на заболевание эндометрия.

Объективно.

Молочные железы – без особенностей.

P.V. Наружные половые органы развиты правильно. Слизистая влагалища не изменена. Матка увеличена до 8-9-недельной беременности. Придатки отдельно не определяются. Параметрии свободны. Выделения – бели.

Забор материала проводился аналогично, см. пример 1.

Аспират из полости матки №4437 от 20.03.2006: выраженная пролиферация призматического эпителия.

23.03.06 г.выполнена экстирпация матки с придатками.

Гистологический результат №5752-67 от 06.04.06 г. Микро: матка – фибромиома, атипическая гиперплазия эндометрия.

Шейка матки – плоский эпителий, отечный, с паракератозом, кисты шейки матки. Яичники – фиброз тела ткани, трубы – полнокровие.

Каталазное число – 0,51 ед.

Показатель каталазы – 0,11 ед.

МДА – 2,26 нмоль.

Указанные результаты каталазного числа, показателя каталазы, МДА соответствуют атипической гиперплазии эндометрия у больной ММ.

Целью предлагаемого изобретения является упрощение диагностики гиперпластических процессов эндометрия при миоме матки, которое позволяет в короткие сроки, на малых объемах биологических жидкостей, с минимальными материальными затратами оценить патологические процессы у женщин на доклиническом этапе (скрининг – тест). Важно, что данный метод может быть использован даже в условиях женской консультации, способ забора материала будет зависеть от возрастного периода больной.

Результаты биохимического исследования могут быть сопоставлены с цитологическим исследованием аспирата из полости матки, а также с морфологической картиной смыва или менструальной крови.

Формула изобретения

Способ диагностики гиперпластических процессов эндометрия у больных миомой матки, основанный на исследовании биохимических особенностей биологических субстратов, отличающийся тем, что в супернатанте смыва из полости матки или менструальной крови одномоментно определяют показатели каталазы, каталазного числа, малонового диальдегида и при снижении значений каталазного числа до 2,53±0,16 ед., показателя каталазы до 0,71±0,05 ед. и увеличении значения малонового диальдегида до 0,49±0,06 нмоль диагностируют нормальное строение эндометрия у больных миомой матки; при снижении значений каталазного числа до 1,8±0,33 ед., показателя каталазы до 0,44±0,09 ед. и нарастании значения малонового диальдегида до 1,68±0,23 нмоль диагностируют гиперплазию эндометрия у больных миомой матки; при снижении значения каталазного числа до 0,68±0,2 ед., показателя каталазы до 0,2±0,09 ед. и увеличении значения малонового диальдегида до 3,01±0,85 нмоль диагностируют атипическую гиперплазию эндометрия у больных миомой матки.