Патент на изобретение №2325651

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицине, в частности, к лабораторным диагностическим методам. Для осуществления способа исследуют мочу, при этом пациенту назначают белковую нагрузку в день обследования. В активное время суток с 12 до 21 часа осуществляют забор 3 проб мочи, в каждую пробу добавляют 10%-й раствор альбумина в соотношении 4:1 соответственно. Затем пробы в количестве 0,01-0,02 мл высушивают при температуре 20-25°С и относительной влажности 55-60%. Далее проводят микроскопическое исследование и при наличии хотя бы в одном образце промежуточной зоны между краевой белковой и центральной кристаллической с мелкими кустистыми трещинами ставят диагноз – гломерулонефрит. Использование способа позволяет производить объективную диагностику гломерулонефрита неинвазивно, в наиболее ранние сроки, что делает возможным проведение терапии с наибольшим эффектом лечения и профилактики развития осложнений (хронической почечной недостаточности). 9 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности, к лабораторному методу исследования.

Диагностика гломерулонефрита всегда представляет значительные трудности для клинициста, так как морфологический диагноз осуществляется только при микроскопии биоптата почки, а это исследование чревато осложнениями и производится лишь у 10-15% больных. Все остальные лабораторные и инструментальные методы диагностики не являются специфичными для данного вида патологии почек.

Известен способ диагностики заболеваний почек, включающий исследование мочи, при котором может выявляться протеинурия и эритроцитурия (Справочник практического врача (под ред. А.И.Воробьева). М., Медицина, том 1, 1990, с.218).

Однако эти признаки не являются специфическими для диагностики гломерулонефрита, так как протеинурия и эритроцитурия являются частыми признаками патологии почек при пиелонефрите, мочекаменной болезни, цистите и состояниях, не связанных с патологией органов мочеполовой системы.

Наиболее близким является способ дифференциальной диагностики заболеваний почек (Патент РФ 2180965, МПК G01N 33/53, публ. 2002 г.), в котором проводят исследование белков мочи методом автоматизированного электрофореза в градиентном полиакриламидном геле, и при выявлении белковых фракций с высокой молекулярной массой 76-330 кД диагностируют гломерулонефрит с тубулоинтерстициальным компонентом (то есть сочетанное поражение клубочков и канальцев почек).

Однако данный способ требует использования дорогостоящего и сложного оборудования, сложных реактивов, специалистов с высокой профессиональной подготовкой и может быть использован для решения фундаментальных задач научных исследований, но не в практической деятельности медицинского учреждения.

Поставленной задачей было устранение указанных недостатков и создание достоверного и легко воспроизводимого способа диагностики гломерулонефрита.

Это достигается тем, что в способе диагностики гломерулонефрита, включающем исследование мочи, предложено назначать пациенту белковую нагрузку в день обследования. В активное время суток с 12 до 21 часа осуществляется забор 3 проб мочи, в каждую пробу добавляется 10%-й раствор альбумина в соотношении 4:1 соответственно, затем пробы в количестве 0,01-0,02 мл высушиваются при температуре 20-25°С и относительной влажности 55-60%. Далее проводится микроскопическое исследование и при наличии хотя бы в одном образце промежуточной зоны между краевой белковой и центральной кристаллической с мелкими кустистыми трещинами ставится диагноз – гломерулонефрит.

Известно, что выведение из организма конечных продуктов обмена, в частности тех, которые возникают при обмене белков, осуществляется почками, через которые каждую минуту протекает более одной пятой всей крови, имеющейся в организме [Ф.Хэм, Д.Кормак. Гистология. М., Мир, 1983, том 5, с.5-46].

Получение достоверной диагностической информации по морфологической картине мочи объясняется следующим: моча представляет собой тканевую жидкость, которая претерпевает значительные изменения своего состава за счет фильтрации крови в капиллярах и продвижения по длинным и извитым почечным канальцам (поглощение отдельных ценных компонентов тканевой жидкости, необходимых для организма, либо экскреция значительных концентраций вредных продуктов обмена). Получение «тонкого среза» тканевой жидкости в активный период суток (прием белковой пищи) позволяет получить информацию о том, что происходит с тканью почек в процессе обмена белков в организме.

При исследовании морфологической картины мочи больных гломерулонефритом исследовались 8 проб мочи (нативной и с добавлением 10%-го раствора альбумина), собранных больными в течение суток (через каждые 3 часа). Было установлено, что только в пробах мочи с добавлением 10%-го раствора альбумина во временном промежутке суток 12-21 час у всех больных выявлялись морфологические особенности в виде появления промежуточной зоны, мелких трещин в ней. В отличие от здоровых людей у больных хроническим гломерулонефритом в указанный период имеет место «напряжение» работы органов выделения, которое зависит от проницаемости клубочкового барьера, а следствием нарушения проницаемости – нарастающая ишемия тканей и усиление катаболических процессов. Одной из причин развития воспаления в клубочковом аппарате почек является попадание из кровеносного русла в клубочковый фильтрат комплексов антиген-антитело, которые откладываются в определенных местах базальной мембраны. Эти комплексы могут вызвать активацию системы комплемента, что привлекает в это место полиморфноядерные лейкоциты. Лизосомальная активность последних вызывает повреждение клубочка и развитие воспалительных явлений неинфекционного генеза.

Небольшие сдвиги по времени выявления морфологических признаков гломерулонефрита в образцах мочи больных связаны, по всей вероятности, с различной степенью повреждения клубочкового аппарата. С учетом данных клинической картины заболевания можно сказать, что чем раньше по времени проявляются специфические признаки гломерулонефрита по морфологической картине мочи, тем тяжелее заболевание: белковая пища во время завтрака уже вызывает у таких больных серьезное нарушение клубочковой проницаемости почек, тогда как у больных с менее выраженным процессом морфологические особенности в образцах мочи проявляются по мере поступления белков в обеденное и/или вечернее время.

Возникновение промежуточной зоны (между краевой белковой и центральной кристаллической) в образце мочи с добавленным раствором альбумина объясняется следующим: у больных гломерулонефритом с мочой выбрасываются белки, имеющие высокую молекулярную массу (от 161 до 330 кД). В образцах нативной мочи краевая белковая зона не может быть охарактеризована качеством белков по молекулярной массе. Только при добавлении к моче альбумина, имеющего молекулярную массу 58-75 кД, в высушенном образце можно четко определить дополнительную белковую зону, выполненную белками с высокой молекулярной массой. Именно высокомолекулярные белки и способны формировать тонкие множественные трещины, в отличие от грубых трещин, сформированных при дегидратации альбумина.

На фиг.1 изображена морфологическая картина мочи больного гломерулонефритом. По периферии образца видны краевая белковая зона с четкими трещинами (А), имеется промежуточная зона в виде мелкозернистой структуры с отходящими тонкими кустистыми трещинами (В), центральная в виде кристаллов солей (С), пример 1 (проба 12-15 ч); фиг.2, 3 – пример 1, пробы с 15-18 ч, 18-21 ч соответственно, без промежуточной зоны; фиг.4-6 – пробы ротовой жидкости, пример 2; фиг.7-9 – пробы ротовой жидкости, пример 3.

Осуществление способа показано на конкретных клинических примерах.

Пример 1.

Пациент Д., 28 лет. Диагноз: подозрение на гломерулонефрит.

У больного брали три пробы мочи, собранные с 12.00-15.00, 15.00-18.00 и с 18.00-21.00, то есть в активное время суток при обязательном соблюдении приема белковой пищи (творог на завтрак, мясо в обед не менее 150 г). В мочу каждой пробы добавляли 10%-й раствор альбумина в соотношении 4:1 соответственно. По вышеописанной методике подготовили пробы для исследования, и при микроскопии образцов морфологическая картина показала, что из трех проб мочи в пробе 12-15.00 определяется промежуточная между краевой и центральной, от которой к краю образца отходят мелкие кустистые трещины.

Заключение: морфологическая картина мочи характерна для гломерулонефрита.

Данному пациенту была проведена биопсия почки и был подтвержден диагноз: гломерулонефрит.

Пример 2.

Пациент Л., 24 лет. Диагноз: подозрение на гломерулонефрит.

Исследование морфологической картины мочи указанным способом показало, что в трех пробах мочи, собранных с 12 до 21.00 часа, во второй и третьей определяется промежуточная между краевой и центральной, от которой к краю образца отходят мелкие кустистые трещины.

Заключение: морфологическая картина мочи характерна для гломерулонефрита.

Данному пациенту была проведена биопсия почки и был выставлен диагноз: гломерулонефрит.

Пример 3.

Пациент Т., 29 лет. Диагноз: Подозрение на гломерулонефрит.

Исследование морфологической картины мочи указанным способом показало, что в трех пробах мочи, собранных с 12-15.00, 15-18.00 и 18-21.00, наблюдается идентичная картина: нечеткое разделение на 2 зоны с наличием отдельных кристаллов солей в краевой зоне.

Заключение: морфологическая картина мочи свидетельствует об отсутствии признаков гломерулонефрита.

Установлено, что у данного пациента 2 года назад была почечная колика с отхождением конкремента из левой почки.

Анализ сопоставления результатов диагностики по морфологической картине биоптата почки (производился в разные сроки обследования больных за 1-3 года до исследования мочи указанным способом) и мочи 43 больных гломерулонефритом показал совпадение в 82% случаев. Несовпадение заключений в 18% случаев с гистологическим исследованием объясняется тем, что морфологические признаки образцов мочи характеризовали наличие другой патологии, наслоившейся на течение основного заболевания, что сопровождалось характерной клинической картиной.

Способ позволяет производить объективную диагностику гломерулонефрита неинвазивно, в наиболее ранние сроки, что делает возможным проведение терапии с наибольшим эффектом лечения и профилактики развития осложнений (хронической почечной недостаточности).

Формула изобретения

Способ диагностики гломерулонефрита, включающий исследование мочи, отличающийся тем, что пациенту назначают белковую нагрузку в день обследования, осуществляют забор 3 проб мочи в период с 12 до 21 часа, в каждую пробу добавляют 10%-ный раствор альбумина в соотношении 4:1 соответственно, пробы в количестве 0,01-0,02 мл высушивают при температуре 20-25°С и относительной влажности 55-60%, микроскопируют и при наличии хотя бы в одном образце промежуточной зоны между краевой белковой и центральной кристаллической с мелкими кустистыми трещинами диагностируют гломерулонефрит.

РИСУНКИ