Патент на изобретение №2325150

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области биотехнологии и описывает способ получения липосом путем гидратирования липидов, сухих или в виде растворов, причем гидратирование проводят водным раствором, содержащим мочевину в концентрации от 0.1 до 5%. Данный способ позволяет повысить агрегационную устойчивость и сроки хранения липосомальных дисперсий. Данные дисперсии могут найти применение в качестве систем доставки в живые организмы биологически активных веществ.

Изобретение относится к области биотехнологии, преимущественно связанной с получением липосомальных дисперсий для косметических и медицинских целей. Данные дисперсии могут найти применение в качестве систем доставки в живые организмы биологически активных веществ.

Существуют разные способы получения липосом и выбор метода, как правило, зависит от задач, поставленных при разработке той или иной липосомальной формы.

Общим недостатком вышеперечисленных методов является недостаточная агрегационная устойчивость липосомальной дисперсии при необходимости длительного хранения.

Техническим результатом предполагаемого изобретения является увеличение агрегационной устойчивости липосомальных дисперсий, которые могут быть использованы как системы доставки биологически активных веществ.

Данный технический результат достигается предлагаемым способом, заключающимся в использовании водных растворов, содержащих мочевину в концентрации от 0.1 до 5%, для гидратирования липидов при получении липосом.

Пример 1

Получали два образца липосомальных дисперсий (липидный состав: яичный фосфатидилхолин (яФХ)/Хол 7/3). Липидные пленки, полученные для каждого из образцов идентичным методом, гидратировали водными растворами, причем в раствор для гидратирования второго образца добавили 1.5% мочевины. Липосомы формировали экструзией через ядерные поликарбонатные мембраны с диаметром пор 200 нм.

Агрегационную устойчивость оценивали по относительному изменению оптической плотности образца липосомальной дисперсии на длине волны 650 нм до (D₁) и после (D₂) центрифугирования при 11000 g в течение 10 мин. Известно, что чем меньше относительное изменение оптической плотности образца, тем более агрегационно устойчива оцениваемая дисперсия.

Кроме того, размер и распределение частиц определяли с помощью спектрометра NICOMP-3 80 (Particle Sizing Systems, США).

I. Через 1 ч после получения

№ образца	Содержание мочевины, %	Оптическая плотность до ц/ф (D1)	Оптическая плотность после ц/ф (D2)
1	–	0.3553	0.2121	0.40
2	1.5	0.2416	0.1737	0.28

II. Через 1 сутки после приготовления дисперсии были получены следующие данные по размерам и распределению частиц:

1) первый образец (без мочевины)

252.5±1.3 нм (85%)

738.5±17.0 нм (15%)

2) второй образец (1.5% мочевины)

236.1±1.9 нм

III. Через 3 суток после получения

№ образца	Содержание мочевины, %	Оптическая плотность до ц/ф (D1)	Оптическая плотность после ц/ф (D2)
1	–	0.6917	0.1081	0.84
2	1.5	0.2234	0.1671	0.25

Были получены следующие данные по размерам и распределению частиц:

1) первый образец (без мочевины), измерения в надосадочной жидкости

255.1±0.4 нм (85%)

979.2±44.6 нм (15%)

2) второй образец (1.5% мочевины)

244.6±2.8 нм

Пример 2

Получали два образца липосомальных дисперсий (липидный состав: дипальмитаилфосфатидилхолин/дистеарилфосфатидилхолин/Хол 9/1/0.2). Липидные пленки, полученные для каждого из образцов идентичным методом, гидратировали водными растворами, причем в раствор для гидратирования второго образца добавили 1.62% мочевины. Липосомы формировали экструзией через ядерные поликарбонатные мембраны с диаметром пор 200 нм.

Агрегационную устойчивость оценивали по относительному изменению оптической плотности образца липосомальной дисперсии на длине волны 650 нм до и после центрифугирования при 11000 g в течение 10 мин.

Через 1 ч после получения

№ образца	Содержание мочевины, %	Оптическая плотность до ц/ф (D1)	Оптическая плотность после ц/ф (D2)
1	–	0.4933	0.0384	0.92
2	1.62	0.2637	0.0640	0.76

Пример 3

Получали два образца липосомальных дисперсий (липидный состав: яФХ/Хол 7/3) методом инжекции. Первый образец получали впрыскиванием при перемешивании 0,125 мл этанольного раствора, содержащего 4,5 мг смеси яФХ/холестерин 7/3, в 3 мл воды. Второй образец получали впрыскиванием этанольного раствора липидов в 3 мл 4,86% раствора мочевины.

Агрегационную устойчивость оценивали по относительному изменению оптической плотности образца липосомальной дисперсии на длине волны 650 нм до и после центрифугирования при 11000 g в течение 10 мин.

№ образца	Содержание мочевины, %	Оптическая плотность до ц/ф (D1)	Оптическая плотность после ц/ф (D2)
1	–	0,3602	0.1701	0.53
2	4.86	0.3283	0.2432	0.26

Использование предлагаемого способа получения липосомальных дисперсий обеспечивает по сравнению с существующими способами следующие преимущества:

а) увеличение агрегационной устойчивости липосомальных дисперсий вне зависимости от липидного состава и способа получения;

б) предлагаемое для повышения агрегационной устойчивости липосомальных дисперсий вещество – мочевина, является недорогим и доступным реагентом, разрешенным к использованию в сферах предполагаемого применения (медицинская и косметическая промышленность);

в) кроме указанной функции стабилизации мочевина может также одновременно использоваться в качестве криопротектора.

Формула изобретения

Способ получения липосом путем гидратирования липидов, сухих или в виде растворов, отличающийся тем, что гидратирование проводят водным раствором, содержащим мочевину в концентрации от 0,1 до 5%.