Патент на изобретение №2320166

(54) СПОСОБ СЛИЯНИЯ ПРОТОПЛАСТОВ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК

(57) Реферат:

Изобретение относится к клеточной инженерии и может быть использовано для получения большого количества слившихся протопластов клеток ячменя. К протопластам клеток ячменя добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 5-10 мМ, после агрегации протопласты инкубируют при 42°С в течение 30 минут. Учет слившихся протопластов ведут с помощью светового микроскопа. Частота слияния протопластов составляет 30-50%.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной инженерии, и может быть использовано для получения большого количества слившихся протопластов.

Гибридизация соматических клеток – это метод, завоевавший популярность как чрезвычайно мощный экспериментальный прием, который нашел применение в самых разных областях биологической науки. В основе метода лежит искусственно вызванное слияние различных клеток и образование клеточного гибрида (Рингерц Н., Сэвидж Р. Гибридные клетки. М.: Мир. 1979. – 415 с.).

Индукторами слияния являются химические агенты (Lucy J. Membrane Processes: Molecular Biology and Medical Application N Y.Springer. – Verlag. 1984. P.27-48) и электрическое поле (Zimmemiann U. J. Membrane Biol. 1982. – Vol.67. – P.165-182).

Известен способ слияния протопластов с полиэтиленгликолем (Kao K.N., Michaylak М.R. 1974. – Vol.115. – Р.355-367). Однако частота слияния протопластов растительных клеток низка, порядка 0,5-5% (Борнман X. В кн: Биология культивирования клеток и биотехнология растений. М.: Наука. 1991, с.85-95). К тому же полиэтиленгликоль обладает значительной токсичностью.

Задача создания методов с высокой частотой слияния остается актуальной. В нашем случае это достигается способом, который заключается в том, что к протопластам растительных клеток добавляется хлористый лантан до конечной концентрации 5-10 мМ, после агрегации протопласты инкубируют при 42°С в течение 30 мин. Учет слившихся протопластов ведется с помощью светового микроскопа.

Способ осуществляется следующим образом: протопласты ячменя обыкновенного (Hordeum sativum) получают после инкубации с целлюлазой и пектиназой (Бутенко Р.Г. и др. Клеточная инженерия. М.: Высшая школа. 1987. 127 с.). К протопластам добавляли хлористый лантан до конечной концентрации 5-10 мМ. В диапазоне этих концентраций происходит сильная агрегация протопластов. После агрегации протопласты инкубировали при 42°С в течение 30 мин. Учет слившихся клеток проводили с помощью светового микроскопа. Частота слияния протопластов составила 30-50%.

Формула изобретения

Способ слияния протопластов клеток ячменя, включающий использование химического агента и проведение инкубации протопластов после агрегации при 42°С в течение 30 мин, причем в качестве химического агента используют хлористый лантан.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 12.05.2008

Извещение опубликовано: 10.06.2010 БИ: 16/2010