Патент на изобретение №2318828

(54) ПРИМЕНЕНИЕ 2-АМИНО-7-БРОМ-4-АЦЕТИЛТИАЗОЛО[5,4-b]ИНДОЛА ДЛЯ ЗАЩИТЫ ОРГАНИЗМА ОТ ГИПОБАРИЧЕСКОЙ И ГЕМИЧЕСКОЙ ГИПОКСИИ И/ИЛИ ПЕЧЕНИ ОТ ОТРАВЛЕНИЯ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ

(57) Реферат:

Изобретение относится к применению 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-b|индола формулы

,

для защиты организма от гипобарической и гемической гипоксии и/или печени от отравления четыреххлористым углеродом. Применение соединения уменьшает концентрацию АлАТ в 2,6 раза, а концентрацию АсАТ в 1,67 раза. 3 табл.

Изобретение относится к применению 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-b]индола формулы 1

для защиты организма от воздействия гипобарической и гемической гипоксии и печени от отравления четыреххлористым углеродом.

Указанное свойство позволяет предполагать возможность применения этого соединения для предотвращения и лечения у людей острых ингаляционных отравлений парами четыреххлористого углерода. Широкое применение четыреххлористого углерода в промышленности, сельском хозяйстве и военном деле делает актуальным поиск фармакологических средств, защищающих организм от воздействия этого токсиканта. Для восстановления функции печени применяют эссенциале, однако его активность недостаточна.

Ранее была установлена гепатопротекторная активность гидробромида 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-b]индола (Патент 2076867 РФ, МКИ³ 6 С07D 478/04, А61К 31/40. Гидробромид 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-b]индола, защищающий печень от отравления четыреххлористым углеродом и способ его получения / Вележева B.C., Мельман А.И.. Томчин А.Б., Смирнов А.В., Оковитый С.В., Гайворонская В.В. (РФ). – 5042409/04; Заявлено 19.05.92.), формула 2.

Аналогом по антигипоксическому действию является эталонный антигипоксант амтизол формулы 3 (Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств./Под ред. Л.Д.Лукьяновой. – М.: БИ, 1990. – 18 с.). Гипобарическая гипоксия возникает при недостатке кислорода вследствие уменьшения атмосферного давления. Эти явления распространены при вынужденном нахождении людей в высокогорье или при разгерметизации летательных аппаратов.

Гемическая гипоксия развивается при попадании в кровь токсикантов, блокирующих работу гемоглобина, вследствие чего затрудняется транспорт кислорода в организме и наступает смерть. Отравления подобного рода не редкость при аварийных ситуациях на химических производствах, военных конфликтах.

Целью изобретения является применение соединения индола, конденсированного с тиазолом, эффективно защищающего организм от гипоксической и гиперкапнической гипоксии и печень от отравления четыреххлористым углеродом.

Заявляемое соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, трудно растворимое в воде, спирте, ацетоне и легко растворимое в диметилформамиде и диметилсульфоксиде. Заявляемое соединение получают действием щелочного агента на гидробромид 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-b]индола.

Пример. 3,0 г (7,67 ммоль) гидробромида 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-b]индола суспензируют в 19 мл воды и добавляют 30% водный раствор ацетата натрия до рН 5-6 по универсальному индикатору, перемешивают и через 30 мин фильтруют. Осадок промывают водой (5×10 мл), сушат на воздухе и 30 мин при 105°С. Получают белые кристаллы, вес 2,08 г (87,5%). Для аналитических целей вещество переосаждают из ДМФА (с активированным углем) в пятикратный объем эфира. На следующий день отфильтровывают выпавшие кристаллы, промывают ацетоном, сушат. Получают блестящие белые кристаллы. Проба Бейлштейна отрицательна. Температура плавления зависит от температуры внесения в прибор. В случае внесения при 230°С вещество плавится при 250-252°С (с разложением).

Вещество однородно по данным ТСХ. Адсорбент – силуфол УФ-254, растворитель для нанесения – диметилформамид, элюент – ацетон:гексан = 1:1; R_f 0,64.

Спектр ПМР в ДМСО d₆. 300 МГц, м.д.: 2.70 с (3Н.СН₃), 6.80 с (2Н, NH₂), 7.32 д (1H, Н⁶), 7.72 с (1H, Н⁸), 8.06 с (1H, Н⁵).

Исследование биологической активности заявляемого соединения. Острую токсичность определяли на белых беспородных мышах-самцах массой 18-22 г по известной методике (Прозоровский В.Б. и др. «Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки», Фармакология и токсикология, 1978, №4, с.494-502). Изучаемое соединение вводили внутрибрюшинно однократно в виде суспензии в воде с добавлением твина-80. LD₅₀ 3890±370 мг/кг, что позволяет отнести заявляемое соединение к малотоксичным веществам.

Исследование защитного действия соединения 1 при воздействии гипобарической гипоксической гипоксии. Опыты выполнены на белых беспородных мышах массой 18-20 г. Заявляемое соединение вводили внутрибрюшинно в виде тонкой суспензии с тивином-20 в дозе 67,1 мг/кг за 30 минут до гипоксического эпизода. Оптимальную дозу выбрали на основании предварительных опытов. Эффект препарата сравнивали с известным антигипоксантом амтизолом в эквимолярной дозе 25 мг/кг. Мышам в контроле вводили эквивалентные объемы физиологического раствора. В каждой группе по 6 животных.

Гипоксию моделировали в барокамере “поднятием” животных на высоту 10000 м со скоростью 50 м/сек и экспозицией в течение 90 мин. Оценку защитного действия изучали по средней продолжительности жизни и по выживаемости животных после гипоксического эпизода. Активность заявляемого соединения 1 в сравнении с известным аналогом представлена в табл.1.

Таблица 1
Антигипоксическая активность заявляемого соединения
Соединение	Средняя продолжительность жизни, мин	Прирост выживаемости животных, %
Контроль	5,06±2,17	0
Амтизол	21,04±5,97	75*
Соединение 1	16,00	83*
Примечание. Различия достоверны по отношению к контрольным животным *-Р0,01.

По данным табл.1 видно, что заявляемое соединение 1 повышает выживаемость животных в 3,16 раза по сравнению с контролем (амтизол в 4,15 раза), но при этом количество выживших особей у него больше, чем у эталона (83 и 75% соответственно). Поэтому можно заключить, что соединение 1 превышает по этому виду активности эталонный препарат.

Гемическую гипоксию (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва (2000), 153-158) изучали на мышах-самцах весом 18-20 г. Исследуемый препарат в эквимолярной дозе по отношению к амтизолу вводили внутрибрюшинно в виде тонкой суспензии с твином-20 за 30 минут до гипоксии, которую моделировали введением внутрибрюшинно 2% раствора нитрита натрия в дозе 200 мг/кг. Эффект препарата сравнивали с известным антигипоксантом амтизолом в дозе 25 мг/кг. Мышам в контроле вводили эквивалентные объемы физиологического раствора. Регистрировали время жизни животных и количество выживших особей. Активность заявляемого соединения 1 в сравнении с известным аналогом представлена в табл.2.

Таблица 2
Антигипоксическая активность заявляемого соединения на модели гемической гипоксии
Препарат	Доза, мг/кг	Кол-во животных	Время жизни, мин	Продолжительность жизни, % по отношению к контролю	Прирост выживаемости, %
Физ. раствор	–	7	29,83±10,09	–	–
Амтизол	25,0	6	43,07±7,21*	144,4	–
Соединение 1	67,1	6	58,44±24,21*	195,5	50,0**
Примечание. Различия достоверны по отношению к контрольным животным *-Р0,05, **-Р0,01

Результаты опытов, приведенных в табл.2, показывают продолжительности жизни животных практически в два раза (эталон – в полтора раза), но при этом соединение 1 помогает выжить половине особей, а эталон не дает выживаемости. Заявляемое соединение значительно превосходит амтизол по антигипоксической активности на модели гемической гипоксии.

Гепатотропное действие изучали на крысах-самцах массой 140-170 г. Четыреххлористый углерод вводили подкожно ежедневно в 50% растворе в вазелиновом масле в течение 4 дней подряд в количестве 0,4 мл/100 г массы. Одновременно с CCl₄ вводили соединение 1 в дозе 67,1 мг/кг внутрибрюшинно. Его сравнивали с известным гепатопротектором эссенциале и соединением 2, которое исследовали в эквимолярной дозе 67,6 мг/кг.

Клиническая картина отравления CCl₄ развивается медленно. Основные симптомы тяжелой интоксикации проявляются только к концу 2-х суток и через 4-7 суток приводят к летальному исходу. У всех больных наблюдается тяжелое поражение печени вплоть до жирового перерождения органа. Оценку защитного действия соединения 1 и аналогов проводили исследуя активность специфической для печени аланиновой трансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) в сыворотке крови. Изменение активности АлАТ и АсАТ в сыворотке крови свидетельствует о повреждающем действии CCl₄ на клеточные мембраны и органеллы клетки. Результаты опытов приведены в табл.3.

Полученные данные свидетельствуют о том, что применение соединения 1 в 2,6 раза уменьшает концентрацию АлАТ и в 1,67 раза концентрацию АсАТ. Таким образом, по способности защищать печень от отравления четыреххлористым углеродом соединение 1 превосходит соединение 2 и эссенциале.

Формула изобретения

Применение 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-b]индола формулы

,

для защиты организма от гипобарической и гемической гипоксии и/или печени от отравления четыреххлористым углеродом.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 22.09.2008

Извещение опубликовано: 27.07.2010 БИ: 21/2010