Патент на изобретение №2318445

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДА РЕСПИРАТОРНОГО ДИСТРЕСС-СИНДРОМА У НОВОРОЖДЕННЫХ В КРИТИЧЕСКОМ СОСТОЯНИИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, и может быть использовано для прогнозирования исхода РДС у новорожденных в критическом состоянии, находящихся на ИВЛ. У новорожденных с РДС методом проточной цитометрии по стандартной методике определяют процент лимфоцитов крови, находящихся в позднем апоптозе. Неблагоприятный исход прогнозируют, если количество клеток, находящихся в позднем апоптозе, составляет выше 1%. Способ прогнозирует неблагоприятный исход заболевания на ранних сроках, позволяя своевременно усилить проводимую интенсивную терапию. Предлагаемый способ обладает высокой точностью и найдет широкое применение не только в отделениях реанимации, но и в других педиатрических стационарах.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”Современные проблемы диагностики и лечения нарушений репродуктивного здоровья женщины, 1994, с.54. DE VRIES-VAN DE VLUGT B.C. at al., “Glucocorticoid receptors in cord blood lymphocytes of healthy neonates and of preterms suffering from respiratory distress syndrome”, Acta Paediatr, 1997, Dec 86(12), 1350-1355, (реферат), [он-лайн], [найдено 15.01.07], найдено из базы данных Pub Med.

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, и может быть использовано для раннего прогнозирования исхода респираторного дистресс-синдрома (РДС) у новорожденных детей, находящихся в критическом состоянии на искусственной вентиляции легких (ИВЛ).

РДС остается одной из центральных проблем современной неонатологии и детской реанимации, так как летальность при этой патологии по данным различных авторов составляет от 30 до 50% (В.А.Михельсон и соавт., 1995, И.И. Рюмина, 1996; А.Г.Антонов, 2005; М Grise et al. 1996; A.S.Salim, M.Martin, 2005).

Высокая частота летального исхода при РДС обусловлена недоразвитием системы сурфоктанта и высоким риском развития бактериальных осложнений в условиях проведения длительной ИВЛ.

Значимость наиболее раннего клинико-лабораторного прогнозирования исхода РДС определяется необходимостью своевременной коррекции проводимой интенсивной терапии назначением иммуномодулирующих препаратов у пациентов с возможным летальным исходом.

В настоящее время известны следующие способы прогнозирования исхода (РДС) у новорожденных.

Способ прогнозирования течения и исходов гипоксически-ишемических поражений ЦНС у новорожденных с РДС по патенту РФ № 2192779 от 2002.11.20. С помощью компьютерного анализа оценивают количественные характеристики спектральных показателей мощности дельта-ритма и их пространственное распределение. Если с первых суток реанимации максимальные показатели спектральной мощности отмечаются в затылочных и теменных зонах, достигая соответственно 119-160 мкВ2 и 106-138 мкВ2, а на 2-3 сутки мощностные характеристики дельта-ритма достоверно преобладают в левом полушарии по сравнению с правым, прогнозируют благоприятный исход заболевания.

Недостатки данного метода:

Относится к дополнительным методам исследования, трудоемкая технология, достоверность исследования связана с многократной записью энцефалограммы, позволяет прогнозировать степень тяжести поражения центральной нервной системы, и лишь косвенно – респираторного дистресс-синдрома.

Способ диагностики тяжести респираторного дистресс-синдрома у недоношенных новорожденных по патенту РФ № 2159937 от 2000.11.27. Путем биохимического исследования белков плазмы крови определяют содержание протеина С и при значениях последнего выше 59% и ниже 74% диагностируют респираторный дистресс-синдром легкой степени тяжести, выше 47,1% и ниже 58,9% – средней степени тяжести и при содержании ниже 47% – тяжелую степень респираторного дистресс-синдрома.

Недостатки метода:

Ограниченный контингент пациентов – недоношенные новорожденные. Позволяет диагностировать степень тяжести поражения легких, но не дает возможности с высокой степенью вероятности прогнозировать исход заболевания при тяжелом течении респираторного дистресс-синдрома, потребовавшего проведения ИВЛ. Не позволяет судить о состоянии иммунной реактивности организма пациента.

Способ динамической оценки течения респираторного дистресс-синдрома по патенту РФ № 2153282 от 2000.07.27. Определяют ежечасно отношение парциального давления кислорода в артериальной крови к фракции вдыхаемого кислорода, растяжимость легких, давление в легочной артерии. Рассчитывают скорость изменения отношения парциального давления кислорода в артериальной крови к фракции вдыхаемого, скорость изменения растяжимости легких и скорость изменения давления в легочной артерии по оригинальным математическим формулам. Эффективность лечения оценивают по полученным расчетным величинам при прогрессирующем или регрессирующем течении респираторного дистресс-синдрома (РДС). Недостатки метода: не может быть рекомендован для использования в неонатологии.

Таким образом, проведенный анализ литературы показал, что вопрос прогнозирования исхода (РДС) у новорожденных, находящихся на ИВЛ, недостаточно освящен, в связи с чем дальнейшие разработки в данном направлении весьма актуальны.

Прототипом предлагаемого изобретения выбран способ по патенту РФ № 2246729, 20.02.2005. Сущность изобретения заключается в определении CD-95 рецептора лимфоцитов крови и при уровне ниже 8,8% прогнозировании неблагоприятного исхода бактериальной инфекции у новорожденного.

Указанные недостатки прототипа устраняются в заявляемом изобретении.

Задачей изобретения является разработка высокочувствительного иммунологического метода прогнозирования исхода РДС у новорожденных, находящихся на ИВЛ.

Поставленная задача решается тем, что в крови у новорожденных детей при поступлении в отделение реанимации методом проточной цитофлуорометрии, с использованием проточного цитометра Epics XL “Beckman Coulter”, определяют процент лимфоцитов крови, подвергшихся позднему апоптозу. Неблагоприятный исход заболевания прогнозируют в том случае, если число лимфоцитов крови, вступивших в поздний апоптоз, составляет 1% и выше.

Прогнозирование неблагоприятного исхода заболевания уже при поступлении пациента в отделение, учитывающее состояние защитных сил организма, позволяет своевременно корегировать проводимую интенсивную терапию. Нашими исследованиями установлено, что определение количества лимфоцитов крови, находящихся в позднем апоптозе, позволяет с высокой степенью чувствительности и специфичности прогнозировать исход РДС у новорожденных, находящихся на ИВЛ.

Работоспособность изобретения подтверждается следующими конкретными примерами.

Пример 1.

Ребенок О-ов, 1-х суток жизни, история болезни № 92/140. Родился с оценкой по Апгар 3-5 баллов, воды – мекониальные. При прямой ларингоскопии меконий обнаружен ниже голосовых связок. Самостоятельное дыхание свыше 90 мин, с участием вспомогательной мускулатуры. Аускультативно дыхание ослаблено. Учитывая показатели кислотно-щелочного состава крови (гипоксемия, гиперкарбия, декомпенсированный ацидоз), ребенок на ИВЛ транспортирован в отделение реанимации.

При поступлении у новорожденного набрали 1 мл венозной крови в пробирку с гепарином, выделили мононуклеары (МНПК) на градиенте фикол-верографина, дважды отмыли фосфатно-солевым буфером (ФСБ). Клетки ресуспензировали в связывающем буфере (концентрация 1 x 10⁶ клеток/мл). Поместили 100 мкл клеточной суспензии в пробирку объемом 5 мл. Добавили в пробирку 5 мкл Аннексина U – FITC и 10 мкл раствора пропидиума иодида, перемешали и инкубировали 15 минут при комнатной температуре (20-25°С) в темноте. Затем добавили в пробирку 400 мкл связывающего буфера. Анализировали на проточном цитометре в течение часа.

В результате проведенного исследования были получены следующие результаты процентного соотношения лимфоцитов крови, вступивших в поздний апоптоз: при поступлении – 1,2%, на 3-и сутки – 2,3%, в исходе заболевания – 4,6%.

На 7-е сутки ребенок умер.

Результаты паталого-анатомической секции подтвердили диагноз ателектазов легких и мекониально-аспирационной пневмонии.

Таким образом, из данного примера следует, что обнаружение количества лимфоцитов крови, находящихся в позднем апоптозе, равное 1% и выше, при поступлении в отделение реанимации, свидетельствует о неблагоприятном исходе РДС у новорожденного, находящегося на ИВЛ.

Пример 2.

Ребенок У-к, двух часов жизни, история № 99/213. Пациент поступил из роддома в отделение реанимации на ИВЛ с диагнозом РДС. Состояние тяжелое. Аускультативно дыхание в легких ослаблено с обеих сторон, поверхностное, нерегулярное, выражен акро и периоральный цианоз. При поступлении процентное соотношение лимфоцитов крови, вступивших в поздний апоптоз, составило 0,25%. На фоне проводимой интенсивной терапии на 3-й сутки при повторном исследовании было обнаружено, что процент клеток позднего апоптоза снизился до 0,1%. На 16-е сутки ребенок был переведен на самостоятельное дыхание. На 18-е сутки пациент переведен в отделение патологии новорожденных для дальнейшей терапии. На момент перевода количество лимфоцитов крови, находящихся в позднем апоптозе, составило 0,15%.

Таким образом, из данного примера следует, что определение процентного соотношения лимфоцитов крови, находящихся в позднем апоптозе, равное 1% и ниже, свидетельствует о возможном благоприятном прогнозе исхода РДС у новорожденных, находящихся на ИВЛ.

Предлагаемым способом было обследовано 40 новорожденных с РДС, находящихся в отделении реанимации на ИВЛ. У 12-и детей, у которых при поступлении в отделение количество клеток, подвергшихся позднему апоптозу, составляло 1% и выше, имел место летальный исход заболевания. При паталого-анатомическом исследовании у всех пациентов был подтвержден диагноз респираторного дистресс-синдрома, ателектазов легких, двухсторонней пневмонии.

У 28-ми детей с РДС при поступлении было обнаружено, что число лимфоцитов крови, находящихся в позднем апоптозе, было ниже 1%. У этих пациентов в последующем был зарегистрирован благоприятный исход заболевания.

Таким образом, заявляемый цитометрический метод оценки позднего апоптоза лимфоцитов крови у пациентов при поступлении в отделение реанимации является чувствительным методом, позволяющим с точностью до 100% прогнозировать исход РДС у новорожденных, находящихся на ИВЛ.

Исходя из вышеизложенного, заявляемый способ прогнозирования исхода РДС у новорожденных по сравнению с существующими методами, имеет следующие преимущества:

1. Способ позволяет прогнозировать исход РДС у новорожденных, находящихся на ИВЛ, уже при поступлении в отделение реанимации, позволяя своевременно усилить проводимую интенсивную терапию.

2. Способ относится к экспресс-диагностике (время выполнения 1 час).

3. Предлагаемый способ обладает большой точностью и найдет широкое применение не только в отделениях детской реанимации, но и в других педиатрических стационарах.

Предлагаемый способ прогнозирования исхода РДС у новорожденных, находящихся на ИВЛ, может использоваться в неонатологии, педиатрии и реаниматологии, дополняя известные методы лабораторной диагностики, позволяя своевременно и обоснованно назначать патогенетическую терапию, повышая выживаемость больных и сокращая длительность лечения.

Формула изобретения

Способ прогнозирования исхода РДС у новорожденных, находящихся в критическом состоянии, на ИВЛ, путем цитометрического анализа крови, отличающийся тем, что определяют процентное соотношение количества лимфоцитов крови, находящихся в позднем апоптозе, и при значении этого показателя выше 1% прогнозируют неблагоприятный исход заболевания.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 25.05.2008

Извещение опубликовано: 10.06.2010 БИ: 16/2010