Патент на изобретение №2318215

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ БЕСПЛОДИЯ У ЖЕНЩИН С НАРУЖНЫМ ГЕНИТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ

(57) Реферат:

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к диагностическим методам в области гинекологии. Предложенный способ заключается в том, что в периферической крови женщин с бесплодием, ассоциированным с наружным генитальным эндометриозом, до оперативного лечения определяют относительное количество лимфоцитов с фенотипом CD20+CD5+ и при значении этого показателя 2,6% или менее прогнозируют наступление беременности в течение года после проведения хирургического лечения эндометриоза с точностью 77,8%. Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в повышении точности, чувствительности и специфичности способа прогнозирования наступления беременности у женщин с бесплодием при наружном генитальном эндометриозе после хирургического лечения эндометриоза. Своевременное прогнозирование эффективности хирургического лечения позволит выбрать оптимальную тактику ведения больной. 1 табл.

(56) (продолжение):

CLASS=”b560m”Group on Endometriosis, N Engi J Med., 1997 Jul, 24;337(4):217-22, найдено в PubMed, PMID: 9227926. MILINGOS S. Fecundity of infertile women with minimal or mild endometriosis. A clinical study. Arch Gynecol Obstet., 2002 Nov; 267(1):37-40, найдено в PubMed, PMID: 12410372. Nothnick W.B. Treating endometriosis as an autoimmune disease. Fertil Steril., 2001 Aug; 76(2):223-31, найдено в PubMed, PMID: 11476764.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности хирургического лечения бесплодия у женщин с наружным генитальным эндометриозом.

Актуальность предлагаемого способа определяется тем, что для лечения женщин с бесплодием, ассоциированным с наружным генитальным эндометриозом, наиболее часто используют хирургический метод (1, 2). В то же время не всегда механическое удаление очагов эндометриоза дает положительный эффект в восстановлении репродуктивной функции женщины. По данным ряда авторов эффективность лечебных лапароскопических операций у данного контингента женщин составляет около 36% (3). Неуспех хирургического метода лечения может быть связан с наличием дополнительных факторов, являющихся причиной нарушения фертильности у больных с эндометриозом и требующих назначения особого комплекса лечебных мероприятий, в том числе и проведения экстракорпорального оплодотворения. Своевременное прогнозирование эффективности хирургического лечения позволит выбрать оптимальную тактику ведения больной. В связи с этим разработка новых методов прогноза эффективности восстановления репродуктивной функции у женщин с наружным генитальным эндометриозом после проведения хирургического лечения имеет несомненную актуальность для практического здравоохранения.

Однако прогнозирование наступления беременности у женщин с эндометриозом по этому показателю имеет ряд недостатков:

– данный способ является инвазивным, так как забор перитонеальной жидкости производится только во время хирургических операций,

– определение уровня эмбриотоксичности перитонеальной жидкости связано с использованием дорогостоящих и чрезвычайно трудоемких работ по культивированию мышиных эмбрионов, на которых традиционно испытывают уровень эмбриотоксичности биологических сред,

– авторами не приводятся данные о прогностическом значении показателя эмбриотоксичности перитонеальной жидкости.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ прогнозирования частоты наступления беременности у женщин с наружным эндометриозом после проведения у них лечебных лапароскопических операций по определению у них до лечения показателей содержания в сыворотке крови уровня эмбриотропных антител с помощью ЭЛИ-П-теста. В тех случаях, когда показатели интенсивности реакций ЭЛИ-П_теста составляют 41 усл.ед и более у женщин с эндометриозом прогнозируют наступление беременности в 57,4% случаев, при отклонении всех антигенов тест-системы в сторону снижения до 50% от нормативных показателей прогноз частоты наступления беременности составляет 28,4%, а в случае снижения всех антигенов тест-системы свыше 50% от нормативных показателей прогнозируется 100% неуспех наступления беременности (Боровкова Л.В. Репродуктивная функция у больных с генитальным эндометриозом: Автореф. дис…. д.м.н. – Москва, 2004. – 34 с.).

Данный способ был выбран нами в качестве прототипа. Однако он имеет ряд недостатков:

– определение концентрации эмбриотропных антител в сыворотке предлагается проводить методом ИФА, который имеет достаточно низкую воспроизводимость и требует постановки исследуемых проб в дубликатах (в зависимости от рекомендации фирмы-производителя), что значительно увеличивает стоимость способа;

– для проведения анализа требуется достаточно много времени – от 3-х до 5-ти часов, в зависимости от используемой тест-системы;

– предлагаемый способ имеет низкую точность,

– отсутствие единого прогностического параметра затрудняет интерпретацию результата обследования. Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в периферической крови женщин с бесплодием, ассоциированным с наружным генитальным эндометриозом, до оперативного лечения определяют относительное количество лимфоцитов с фенотипом CD20+CD5+ и при значении этого показателя, равного 2,6% или менее, прогнозируют наступление беременности в течение года после проведения хирургического лечения эндометриоза с точностью 77,8%.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать эффективность хирургического лечения бесплодия у женщин с эндометриозом по определению относительного содержания в периферической крови CD20+CD5+ лимфоцитов. Ранее этот показатель использовали для диагностики острых нарушений мозгового кровообращения (4). Кроме того, было показано, что увеличение содержания в крови этой популяции лимфоцитов коррелирует с потерей беременности (5). Для прогнозирования наступления беременности после проведения хирургического лечения бесплодия, ассоциированного с наружным генитальным эндометриозом, этот показатель не использовался. Популяцию лимфоцитов с фенотипом CD20+CD5+ относят к В-лимфоцитам 1 типа (В-1 клетки) (6). Известно, что В-1 лимфоциты продуцируют низкоаффинные антитела, которые перекрестно реагируют со многими бактериальными антигенами и с различными аутоантигенами, такими, например, как иммуноглобулины, одноцепочечная ДНК и тимоциты (6). Доказано, что способность В-1 лимфоцитов продуцировать аутоантитела определяет их участие в развитии аутоиммунных патологий (7). Существует мнение, что развитие бесплодия у женщин с эндометриозом имеет аутоиммунную природу (8). Высокое содержание В-1 лимфоцитов в периферической крови женщин с бесплодием при наружном эндометриозе, по-видимому, отражает вовлечение аутоиммунных механизмов в нарушение фертильности. Поэтому проведение только хирургического удаления очагов эндометриоза у пациенток с высоким содержанием В-1 лимфоцитов не эффективно для восстановления репродуктивной функции.

Способ осуществляется следующим образом:

1) К 3 мл гепаринизированной крови из кубитальной вены добавляют 3 мл Среды 199 и выделяют обогащенную популяцию мононуклеарных клеток стандартным методом скоростного центрифугирования (9).

2) Суспензию мононуклеарных клеток дважды отмывают физраствором, доводят концентрацию клеток до 1×10⁶ кл/мл. К 0,1 мл полученной суспензии одновременно добавляют 20 мкл моноклинальных антител анти-СD20, коньюгированных с фикоэритрином, и 20 мкл моноклональных антител анти-СР5, коньюгированных с флюоресцеинизотионатом (ООО «Сорбент», г.Москва, регистрационное удостоверение 29/24030301/1104-01 от 24 сентября 2001 г.). Клетки инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте, отмывают и фиксируют в 0,5 мл фиксирующего раствора CellFix (BD Biosciences, Belgium).

3) Определяют относительное (процентное) количество двойных позитивных CD20+CD5+ лимфоцитов в лимфоцитарном гейте на проточном цитометре.

Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью, 77,8% прогнозировать эффективность хирургического лечения бесплодия у женщин с наружным генитальным эндометриозом.

Отличительными признаками способа являются:

установлен прогностический параметр относительного содержания CD20+CD5+ лимфоцитов в периферической крови женщин с бесплодием, ассоциированным с наружным генитальным эндометриозом, при значении которого 2,6% или менее прогнозируют наступление беременности в течение года после проведения хирургического лечения эндометриоза.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1. Больная С., 26 лет, обратилась по поводу вторичного бесплодия в течение 3 лет. В анамнезе 2 медицинских аборта без осложнений. Неоднократно проводилась противовоспалительная терапия по поводу жалоб на периодические боли внизу живота и диагноза «обострение хронического двухстороннего аднексита» – с переменным эффектом. При влагалищном исследовании: матка нормальных размеров, подвижная, безболезненная. Придатки не увеличены, безболезненны с обеих сторон. Пальпация крестцово-маточных связок болезненна. Обследована по поводу бесплодия: цикл – двухфазный по тестам функциональной диагностики и гистологического исследования «ЦУГ» эндометрия, по данным гистеросальпингографии – полость матки не изменена, просвет маточных труб имеет неизмененный вид, контрастируются на всем протяжении, контраст свободно поступает в брюшную полость. Муж обследован – спермограмма без отклонений от нормы. Посткоитальный тест – положительный.

Клинический диагноз: вторичное бесплодие. Подозрение на наружный генитальный эндометриоз.

Произведено определение в периферической крови относительного содержания CD20+CD5+ лимфоцитов, которое составило 0,9%.

Заключение: прогнозируется наступление беременности после проведения оперативной лапароскопии, деструкции очагов эндометриоза.

На 9 день менструального цикла произведена лапароскопия, в ходе которой обнаружено: брюшная полость свободна. Матка нормальных размеров. Маточные трубы не изменены, свободно проходимы при хромогидротубации. Яичники не изменены. На брюшине задних листков широких маточных и крестцово-маточных связок обнаружены множественные поверхностные и глубокие очаги эндометриоза, площадью более 3 см². Произведена коагуляция и иссечение очагов эндометриоза монополярным коагулятором. Гистологическое исследование удаленных тканей – эндометриоз брюшины.

Спустя два месяца после операции наступила беременность, завершившаяся родами.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Пациентка Н., 30 лет, со вторичным бесплодием в течение 7 лет после медицинского аборта, поступила на отделение эндохирургии для уточнения причины бесплодия. Состоит в браке, гинекологические заболевания отрицает. Отмечает появление болей внизу живота, слабо купирующихся приемом нестероидных противовоспалительных средств. В ходе предшествующего обследования выявлено наличие двухфазного менструального цикла (по тестам функциональной диагностики и гистологического исследования «ЦУГ» эндометрия), по данным гистеросальпингографии полость матки не изменена, маточные трубы умеренно извиты, контрастируются на всем протяжении, контраст в брюшную полость поступает с обеих сторон. Супруг обследован -здоров. Посткоитальный тест – положительный. При влагалищном исследовании: тело матки нормальных размеров, подвижная, безболезненная, придатки не увеличены с обеих сторон, безболезненны при пальпации. Болезненность при пальпации заднего свода.

Клинический диагноз: первичное бесплодие. Подозрение на наружный генитальный эндометриоз.

Произведено определение в периферической крови относительного содержания CD20+CD5+ лимфоцитов, которое составило 8,9%.

Заключение: прогнозируется неэффективность оперативного лечения в плане восстановления фертильности.

На лапароскопии: Брюшная полость свободна. Матка нормальных размеров. Маточные трубы визуально не изменены, при хромогидротубации заполняются красителем. На брюшине ректовагинальной перегородки, крестцово-маточных связок – глубокие очаги эндометриоза >3 см². Яичники нормальных размеров, в правом – постовуляторная «стигма».

Проведено иссечение и деструкция очагов эндометриоза. Эндометриоз верифицирован гистологически.

В течение года регулярной половой жизни без контрацепции беременность не наступила.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился. Больной рекомендовано экстракорпоральное оплодотворение.

Пример 3. Больная П., 25 лет. Обратилась по поводу вторичного бесплодия, а также жалоб на боли внизу живота перед менструацией, диспареунию. Бесплодие в одном браке в течение 4 лет. Имел место один медицинский аборт без видимых осложнений. Состоит в первом браке, гинекологических заболеваний в анамнезе не отмечает.

При дооперационном обследовании установлен двухфазный менструальный цикл (по тестам функциональной диагностики и гистологического исследования «ЦУГ» эндометрия). По данным гистеросальпингографии полость матки имеет правильную форму, маточные трубы заполняются контрастом на всем протяжении, не расширены; контраст в брюшной полости. Муж обследован – нормозооспермия. Посткоитальный тест положительный. При осмотре: матка нормальных размеров, подвижная, безболезненная. Придатки не определяются. Резко болезненен задний свод. Выделения слизистые, умеренные. Направлена на лапароскопию для уточнения причины бесплодия.

Диагноз: вторичное бесплодие. Подозрение на наружный генитальный эндометриоз.

Обследование по заявляемому способу показало, что содержание CD20+CD5+ лимфоцитов в периферической крови составило 2,6%.

Заключение: прогнозируется наступление беременности после проведения оперативной лапароскопии, деструкции очагов эндометриоза.

На 7 день менструального цикла произведена лапароскопия, в ходе которой обнаружено: Брюшная полость свободна. Матка нормальных размеров. Маточные трубы не изменены, свободно проходимы при хромогидротубации. Яичники не изменены. На брюшине задних листков широких маточных и крестцово-маточных связок обнаружены множественные поверхностные и глубокие очаги эндометриоза площадью более 3 см². Произведена коагуляция и иссечение очагов эндометриоза монополярным коагулятором. Гистологическое исследование удаленных тканей – эндометриоз брюшины.

Через 4 месяца наступила беременность, завершившаяся родами.

Прогноз по заявляемому способу подтвердился. Указанным способом обследовано 18 женщины с бесплодием, ассоциированным с наружным генитальным эндометриозом. Данные исследований приведены в таблице.

Преимущества заявляемого способа:

1) высокая точность – 77,8%, чувствительность – 85,7%, специфичность – 72,7%;

2) хорошая воспроизводимость метода;

3) простота и доступность выполнения методики;

4) длительность проведения методики определения уровня CD20+CD5+ лимфоцитов не превышает 2-х часов;

5) простота в интерпретации результатов обследования.

Литература

Формула изобретения

Способ прогнозирования эффективности хирургического лечения бесплодия у женщин с наружным генитальным эндометриозом путем иммунологического исследования периферической венозной крови до оперативного лечения, отличающийся тем, что в крови определяют относительное количество лимфоцитов с фенотипом CD20+CD5+и при его значении равном 2,6% или менее прогнозируют наступление беременности в течение года после проведения хирургического лечения эндометриоза.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 17.08.2008

Извещение опубликовано: 10.07.2010 БИ: 19/2010