Патент на изобретение №2159809

(54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А/47/СИДНЕЙ/97/14(H3N2) ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ДЕТЕЙ

(57) Реферат:

Вакцинный штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) является реассортантом. Он получен путем скрещивания эпидемического вируса А/Сидней/5/97/ (H3N2) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом А/Ленинград/134/47/57 (H2N2) – донором аттенуации. Штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 34°С. Характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (геммагглютинин и нейраминидазу). Реассортант также получил шесть генов, кодирующих негликозилированные белки, от донора аттенуации. Штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) ареактогенен для детей при интраназальном введении. Вакцинный штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам. Изобретение позволяет осуществить профилактику эпидемического гриппа, вызванного вирусом актуальной антигенной разновидности. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди детей живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма А/47/Сидней/97/14 (H3N2). Известный штамм А/47/Шангдонг/93/1 (H3N2) – прототип [1] – утратил антигенную актуальность и вследствие этого не сможет вызвать защитную реакцию во время эпидемии гриппа, вызванной штаммом вируса гриппа, аналогичным вирусу А/Сидней/5/97 (H3N2).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса А/Сидней/5/97 (H3N2).

Вакцинный штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса А/Сидней/5/97 (H3N2) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/47/57 (H2N2) – донором аттенуации – с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу А/Ленинград/134/47/57 (H2N2). Донор аттенуации – холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа А/Ленинград/134/47/57 (H2N2), разрешенный для получения безвредных живых интраназальных вакцин для детей [2].

Методом рестрикционного анализа ДНК копий генов вакцинного и родительских штаммов установлено, что вакцинный штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки (РВ1, РВ2, PA, NP, М, NS), от донора аттенуации А/Ленинград/134/47/57 (H2N2) и 2 гена, кодирующих поверхностные белки – НА (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) – от эпидемического вируса А/Сидней/5/97 (H3N2). Гемагглютинин в РТГА идентичен вирусу А/Сидней/5/97 (H3N2), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется. Штамм является температурочувствительным (разность в показателях инфекционной активности при 33^oC и 40^oC составляет 7.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность в показателях инфекционной активности при 33^oC и 25^oC – 3.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса А/Сидней/5/97 (H3N2), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма – полиморфная, типичная для вируса гриппа.

ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММА
Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 33-34^oC в течение 48 часов – 8,5-9,0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность -1:512.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Образец паспорта на вакцинный штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) прилагается
ШТАММ А/47/СИДНЕЙ/97/14 (H3N2) АРЕАКТОГЕНЕН ПРИ ИНТРАНАЗАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ ДЕТЯМ 3-14 ЛЕТ.

Пример. Группу из 108 детей в возрасте 3-14 лет вакцинировали интраназально в объеме 0,5 мл рекомбинантным вакцинным штаммом А/47/Сидней/97/14 (H3N2) с инфекционной активностью 8,5 Ig ЭИД₅₀/0,2 мл. Группа детей того же возраста из 101 человек получила плацебо.

Сильные температурные реакции с повышением температуры свыше 38,5^oC и средние реакции с кратковременным повышением температуры в диапазоне 37,6-38,5^oC не наблюдались. Слабые температурные реакции (до 37,5^oC) у привитых наблюдались у 9 человек (8,3% случаев). Слабые температурные реакции (до 37,5^oC) в группе плацебо наблюдались у 15 человек (14,9% случаев). Показатель реактогенности (разница в проценте средних реакций у привитых вакциной и получивших плацебо) составил 0% (см. таблицу).

Таким образом, вакцинный штамм А/47/Сидней/97/14 (H3N2) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам Фармакопейной статьей ФС 42-3353-97 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3-14 лет.

ПАСПОРТ ШТАММА
1. Название штамма – А/47/Сидней/97/14 (H3N2).

2. Серия – серия 1.

3. Метод получения – рекомбинация; характеристика родительских вирусов:
а). эпидемический вирус – А/Сидней/5/97 (H3N2);
б). донор аттенуации – А/Ленинград/134/47/57 (H2N2);
4. Количество пассажей – 6 в процессе рекомбинации.

5. Характеристика штамма до лиофилизации:
а). оптимальные условия репродукции – 33^oC, 48 часов;
б). гемагглютинирующая активность – 1:512;
в). инфекционная активность – 8.5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
г). чувствительность к ингибиторам – ингибиторочувствительный;
д). разность в показателях инфекционной активности при 33^oC и 40^oC – 7.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
е). разность в показателях инфекционной активности при 33^oC и 25^oC – 3.0 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
ж). структура генома рекомбинанта:
– гены от эпидемического вируса – НА, NA
– гены от донора аттенуации – РА, РВ1, РВ2, NP, М, NS.

6. Характеристика штамма после лиофилизации:
а). дата лиофилизации – 14 сентября 1998 года;
б). объем материала в ампуле – 1 мл;
в). количество доз в серии – 3;
г). инфекционная активность – 7.5 lg ЭИД₅₀/0,2 мл;
д). гемагглютинирующая активность – 1:256.

7. Рекомендуемое разведение при вакцинации – 1:3.

8. Антигенная специфичность
а). гемагглютинина в РТГА – идентичен вирусу А/Сидней/5/97 (H3N2), антисывороткой к которому полностью нейтрализуется;
б). нейраминидазы – идентична вирусу А/Сидней/5/97 (H3N2) по данным ПЦР-рестрикционного анализа ДНК- копий генов.

9. Безвредность для мышей при подкожном и внутрибрюшинном введении – безвреден.

10. Бактериологический контроль лиофилизированного материала: дата проведения – 14 сентября 1998 года результат – стерилен.

11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов – посторонние вирусы отсутствуют.

ЛИТЕРАТУРА
1. Штамм А/47/Шангдонг/93/1 (H3N2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для детей. Патент РФ N 2065498, 20.08.1996, БИ N 23.

2. Александрова Г.И., Климов А.И. Живая вакцина против гриппа. – СПб.: Наука.- 1994,- 151 с.

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А/47/Сидней/97/14 (Н3N2) ГИСК N 392/3 (Государственный институт стандартизации и контроля им.Л.А.Тарасевича), используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для детей.

РИСУНКИ

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 26.05.2006

Извещение опубликовано: 10.05.2007 БИ: 13/2007