Патент на изобретение №2159808

Published by on

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ

(19)

(11)

2159808

(13)

(51) МПК ⁷
_{C12N1/20, A61K39/10, A61K39/40
C12N1/20, C12R1:01}

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

Статус: по данным на 07.06.2011 – прекратил действие

(21), (22) Заявка: 99103256/13, 16.02.1999

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

16.02.1999

(45) Опубликовано: 27.11.2000

(56) Список документов, цитированных в отчете о
поиске:
RU 2051963 C, 10.01.1996. SU 1761796 A, 15.09.1992. Какоулин Т.Е., Маловастый К.С. Диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота с помощью R-антигенов. В: “Пути ликвидации инфекц.инваз.болезней сельскохозяйственных животных”, – Новосибирск, 1985, с.25-28.

Адрес для переписки:

355106, г.Ставрополь, ул. Советская 13-15, СНИПЧИ

(71) Заявитель(и):

Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт

(72) Автор(ы):

Дальвадянц В.Г.,
Лямкин Г.И.,
Таран И.Ф.,
Ляпустина Л.В.,
Соколова И.А.,
Панченко В.П.

(73) Патентообладатель(и):

Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт

(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BRUCELLA ABORTUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ПРИ ПОЛУЧЕНИИ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ БРУЦЕЛЛ В R-ФОРМЕ

(57) Реферат:

Изобретение предназначено для получения медицинских иммунобиологических препаратов для идентификации бруцелл в R-форме. Штамм бактерий Brucella abortus 3143 находится в стабильной R-форме. Он хорошо растет на любой питательной среде, применяемой для выращивания бруцелл. Штамм обладает достаточной иммуногенной активностью. Для получения сыворотки достаточна однократная иммунизация продуцентов (кроликов). Изобретение позволит упростить технологию получения бруцеллезной анти-R-сыворотки.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в получении медицинских иммунобиологических препаратов для идентификации бруцелл в R-форме.

Как показал анализ известных источников информации, для получения таких препаратов в основном используются штаммы B.ovis, находящиеся в R-форме.

Известны референтный штамм B.ovis ⁶³/290 и штамм B/ovic H-61, используемые как антигены для конструирования R-эритроцитарных диагностикумов и противобруцеллезных сывороток в R-форме (Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. Sixth Report. World Health Organisation. Technical Report Series, Geneva, 1986. – 133p; Методические рекомендации по приготовлению и применению овисного антигенного эритроцитарного диагностикума, Иркутск 1988; Методические рекомендации по получению высокоактивных гипериммунных противобруцеллезных сывороток, Иркутск, 1988).

Недостатком использования этих штаммов является высокое содержание в них клеток в S-форме, что снижает специфичность получаемых медико-биологических препаратов для идентификации R-форм бруцелл.

Известен штамм B.ovis 792 (НИИЭМ г. Москва) для получения R-бруцеллезных диагностикумов (патент РФ N 205, 1963, C 12 N¹/20, A 61 K 39/10, 10.01.96, Бюл. N 1).

Штамм B. ovis 792 выделен из семенников барана, является инагглютинабельным и инагглютиногенным, заражение этим штаммом подопытных животных не вызывает у них образование антител к S-клеткам бруцелл. Вирулентность штамма низкая. Антигенные свойства характеризуются образованием специфических антител при иммунизации кроликов.

Недостатком использования штамма является сложность выращивания культуры, обусловленная физиолого-биохимическими признаками штамма. Штамм растет в присутствии повышенного содержания CO₂.

Штамм вида B. abortus, в частности вакцинный штамм B.abortus 19, обладает высокими агглютиногенными свойствами, вызывает у привитых животных серопозитивные реакции, которые трудно отличить от серопозитивности у зараженных животных.

Известен вакцинный штамм бактерий B.abortus ВГНКИ N 20-1-ДЕП в R-форме (А. с. СССР N 176 1796, C 21 N 1/20, 15.09.92, Бюл. N 34). Этот штамм используется для приготовления вакцин против бруцеллеза. Недостатком использования штамма является сложность его селекции, которая включает пятикратный пассаж культуры через организм стельных коров.

Целью изобретения является изыскание штамма, находящегося в стабильной R-форме и обладающего достаточной иммуногенной активностью при получении моноспецифической сыворотки для идентификации R-форм бруцелл.

Поставленная цель достигается использованием штамма B.abortus 3143 при получении моноспецифической сыворотки для идентификации бруцелл в R-форме.

Штамм Brucella abortus выделен из абортированного плода коровы и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Клетки B.abortus 3143 представляют собой кокко-бактерии размером 0,3-0,6 мкм, при окраске по Граму – отрицательны, при окраске по Козловскому сохраняют красный цвет, при краске по Романовскому – нежно-фиолетовый цвет. Бактерии штамма хорошо растут на глюкозо-глицериновом печеночном бульоне и агаре Д, а также на других питательных средах, применяемых для выращивания бруцелл, и имеющих нейтральную или слегка щелочную реакцию (pH 6,8-7,2) в аэробных условиях при температуре 37^oC. Рост на бульоне хлопьевидный с осадком и просветлением. В мазках на двухсуточной агаровой культуры клетки имеют вид шаровидной, овоидной или палочковидной формы (биполярны), неподвижны, спор и капсул не образуют.

Биохимические признаки. Культура бактерий штамма B.abortus 3143 находится в стабильной R-форме при окраске по Уайт-Вилсону реакция с трипафлавином положительная, колонии красного или фиолетового цвета, сероводород не продуцирует, растет на среде с тионином (2 мкг/мл), на среде с фуксином (1 мкг/мл), не агглютинируется моноспецифическими сыворотками анти-абортус и анти-мелитензис, агглютинируется анти-R-сывороткой в диагностическом разведении, лизируется фагом T6 в RTD^-4 .

Иммуногенные признаки. При иммунизации кроликов вызывает образование специфических R-антител, при однократной иммунизации.

Возможность практического использования заявляемого штамма B.abortus 3143 иллюстрируется примерами получения диагностической агглютинирующей моноспецифической анти-R-сыворотки и серологической идентификации R-формы бруцелл.

Пример 1. Двухсуточную агаровую культуру штамма B.abortus 3143 высевают на пластинку агара Альбими или мясо – пептонно-печеночного агара (МППА) pH 6,9-7,1. Через 48 часов инкубации при 37^oC отбирают колонии и отсевают их на скошенный агар Альбими или МППА в пробирки. Через 48 часов инкубации выросшую культуру проверяют на чистоту в мазке, окрашенном по Граму. Затем готовят взвесь культуры на 0,85% растворе натрия хлорида. Полученную взвесь доводят до концентрации 20 млрд. м. к. в мл. тем же раствором. Микробную взвесь концентрацией 20 млрд. м. к. вводят кроликам весом 3-3,5 кг внутривенно в объеме 1,0 мл по методу Безредко дискретно по времени. Спустя 8-9 дней после инъекции кроликов тотализируют. Полученную сыворотку используют для постановки реакции агглютинации.

Пример 2. Сывороткой к R-формам бруцелл изучают штаммы бруцелл, типичные по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, но находящиеся в R-форме. Агглютинацию ставят на стекле. Наносят каплю агглютинирующей анти-R-сыворотки на стекло, а затем микробиологической петлей вносят бакмассу исследуемой культуры бруцелл и суспендируют плавным помешиванием. При образовании агглютинирующих хлопьев исследуемую культуру бруцелл определяют как культуру бруцелл, находящуюся в R-форме.

Заявляемый штамм имеет преимущества перед известными аналогами по простоте культивирования, высокой стабильности R-формы, достаточной иммуногенной активности, обеспечивающей возможность однократной иммунизации кроликов для получения анти-R сыворотки.

Формула изобретения

Штамм бактерий Brucella abortus 3143, используемый при получении моноспецифической сыворотки для идентификации бруцелл в R-форме.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 16.02.2001

Номер и год публикации бюллетеня: 19-2003

Извещение опубликовано: 10.07.2003